全 文 ：2011年 第 29卷 第 5期
2011 Vol.29 No.5
新疆中医药
Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine
高效毛细管电泳测定天山花楸多糖中单糖组分及含量
闫 波1， 勉强辉2， 孙述奎1， 常军民2*
（1.新疆医科大学第一附属医院； 2.新疆医科大学药学院， 新疆 乌鲁木齐 830011）
[2] 国家食品药品监督管理局. 中药天然药物长期毒性试验技术指
导原则[S].2005：3.
[3] 中华人民共和国食品药品监督管理局. 中药新药研究指南[S].
2004：123.
[4] 袁伯俊，王治乔.新药临床前安全性评价与实践[M].北京：军事
医学科学出版社，1997：43-48.
（收稿日期：2011- 04- 08）
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摘 要 目的：分析测定天山花楸多糖中单糖的组成。方法：将天山花楸多糖水解成单糖，1-苯基-3-甲基-5-
吡唑啉酮（PMP）衍生化，采用高效毛细管电泳法在245nm紫外检测分离测定各单糖。结果：测得天山花楸多糖由葡
萄糖、半乳糖醛酸、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、半乳糖等单糖组成。7种单糖在80min内可很好分离，对
各种单糖进行了方法学考察。结论：本法测定多糖的单糖组分操作简便，灵敏度高，结果准确可靠，可用作天山花楸
多糖的质量控制。
关键词 天山花楸；多糖；单糖；高效毛细管电泳；柱前衍生化
基金项目：新疆维吾尔自治区高校科研计划重点项目：天山花楸物质基础研究（XJEDU2005119）。
作者简介：闫波（1984-），男，新疆医科大学第一附属医院药学部，联系方式0991- 4362800。E- mail：yanboderen@163.com。
*通讯作者：常军民（1965-），男，副教授，博士，研究方向：天然药物分析。E- mail：cjmcjn2471@yahoo.com.cn。
天山花楸多糖是从蔷薇科花楸属植物天山花
楸（Sorbus tianschanica L．）[1]中分离得到的一种杂多
糖。多糖的单糖组成分析是进行多糖质量控制和获
取多糖基本信息的重要环节。因为糖类物质不具有
发色基团[2]，不能用紫外检测。而衍生化方法可以使
糖类样品带上发色基团，使紫外检测信号增强，大
大提高检测灵敏度。应用PMP作为衍生化试剂可以
在温和的反应条件下与糖链进行定量反应，并用于
单糖的组成分析。天山花楸多糖中单糖组分分析高
效毛细管电泳法研究未见报道，本文用PMP衍生化
法研究了天山花楸多糖中单糖组成，为天山花楸进
一步的药理研究提供基础研究资料。
1 仪器与试剂
Agilentl100高效液相色谱仪，ChemStations色谱
工作站；酸度计（上海雷磁）。
单糖标准品：葡萄糖（Glc）、甘露糖（Man）、半乳
糖（Gal）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）（生化试
剂，上海试剂二厂），半乳糖醛酸（GalUA）、阿拉伯糖
（Arab）；试剂：1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（分析纯）
（衍生化试剂PMP），乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），硫
酸（分析纯），盐酸（分析纯），氢氧化钠（分析纯）。
2 方法
2.1 电泳条件
石英毛细管柱 （60cm ×75μm，有效长度
48.5cm）；运行缓冲液：75mmol·L-1硼砂溶液（pH=
10.50）；柱温：25℃；电压：15KV；压力进样：0.5Pa×
20s；检测波长245nm。
2.2 多糖的水解
称取天山花楸多糖20mg置于10mL具塞试管内
加入2mL 2 mol·L-1H2SO4于100℃水解8h得水解样品
溶液。用4mol·L-1氢氧化钠水溶液中和至pH值约为
7.0，并以水稀释到5mL离心，取上清液待衍生化。
2.3 单糖标准品的衍生化
分别精确称取0.001 8g甘露糖（Man）、0.003 6g
半乳糖（Gal）、0.003 6g鼠李糖（Rha）、0.003 9g葡萄糖
（Glc）、0.003 9g葡萄糖醛酸（GIcUA）、0.004 2g半乳
糖醛酸（GalUA）、0.003 0g阿拉伯糖（Arab），于10mL
容量瓶溶解并定容混匀。取该溶液50μL与50μL0.5
mol·L-1PMP甲醇溶液及50μL0.3mol·L-1NaOH涡旋混
合30s，在70℃下反应30min。冷却至室温，加入50μL
0.3 mol·L-1HCl进行中和并加入去离子水100μL稀释
混匀，加入1mL氯仿涡旋混匀30s静置5min，吸取下
层液弃去，从“加入1mL氯仿”到“吸取下层液弃去”
重复3次，经0.45μm微孔滤膜滤过，进样20s。
2.4 样品的衍生化
精密吸取天山花楸多糖水解液100μL按照2.3
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项下方法“加入0.5 mol·L-1的PMP甲醇溶液80μL”处
理，进行HPLC分析。
3 结果
3.1 标准曲线
取单糖混合标准溶液25μL按2.3项下“加入
0.5mol·L-1的PMP甲醇溶液80μL”处理后，用去离子
水1∶1稀释，分别进样3.0s、5.0s、10.0s、20.0s、25.0s、
30.0s，测定峰面积，用峰面积对各单糖的浓度回归
得各单糖标准曲线、相关系数及线性范围见表1。
表1% 七种单糖标准的标准曲线
3.2 精密度
取标准单糖混合溶液，依前述衍生化和色谱条
件，连续进样5次，甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半
乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖峰面积的相对
标准偏差（RSD，n=5） 分别为2.1％、2.9％、1.4％、
2.6％、1.9％、2.2％、2.6％。
3.3 回收率
取已知含量天山花楸多糖样品100μL加入一定
浓度的单糖混标25μL，再以2.3项的“加入0.5 mol·L-1
的PMP甲醇溶液80μL”步骤处理后，重复测定6次，进
样20.0s，测得吸收峰面积的RSD和平均回收率结果
见表2。
表2 %回收率实验（n=6）
3.4 多糖样品分析
将混合单糖标准品图谱与天山花楸多糖的图
谱对照，可以确定天山花楸多糖由葡萄糖、鼠李糖、
甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖5种中性单糖和半乳糖醛
酸、葡萄糖醛酸2种酸性单糖组成，迁移时间见表3。
由面积归一化法计算得知天山花楸多糖中葡萄糖、
半乳糖醛酸、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛
酸、半乳糖的摩尔比是13.0：16.4：14.7：3.2：15.3：
16.3：21.1。
表3 %标准单糖及多糖水解衍生物的保留时间
4 讨论
4.1 硼砂缓冲液的浓度
考察了50 mmol·L-1、75 mmol·L-1、100 mmol·L-1、
125 mmo1·L-1、150mmol·L-1不同浓度的硼砂缓冲溶
液对迁移时间和分离度的影响，结果表明硼砂溶液
浓度增大，各单糖的迁移时间随之增大，彼此间分
离的越好。当硼砂溶液浓度为50mmol·L-1时，半乳糖
衍生物的迁移时间为50min，但甘露糖衍生物和鼠
李糖衍生物分不开，硼砂溶液浓度为75mmol·L-1时，
半乳糖的迁移时间为75min，7种单糖衍生物间的分
离度R>1.5；硼砂溶液浓度为100mmol·L-1时，半乳糖
衍生物的迁移时间为100min，硼砂溶液浓度为125
mmol·L-1时，半乳糖衍生物的迁移时间为120min，硼
砂溶液浓度为150 mmol·L-1时，半乳糖衍生物的迁
移时间为160min，因此，本实验选择硼砂缓冲溶液
的最佳浓度为75 mmol·L-1。
4.2 硼砂溶液的pH值
考察了pH值为7、8、9、9.5、10.0、10.5、11、11.5、
12时对迁移时间和分离度的影响，实验发现缓冲液
的pH值对迁移时间影响很大，pH值小于10.0时，葡
萄糖衍生物与半乳糖醛酸衍生物分不开，pH值大于
11.0时，各单糖衍生物之间的分离度增大，但迁移时
间过长，故本实验选择缓冲溶液的pH=10.5。
4.3 结果分析
43min处有一小峰，经过对衍生化试剂PMP的空
白实验得知，此峰是衍生化后溶液中微量的PMP产
生的，它可与各单糖衍生物很好地分离，不影响样
品的测定。
参考文献：
[1] 杨玲玲，常军民，姚军.HPLC测定天山花楸中的苦杏仁苷[J].华
西药学杂志，2007，22（5）：589-590.
单 糖
葡萄糖（GIc） 0.999 3
半乳糖醛酸（GalUA） 0.999 0
鼠李糖（Rha） 0.999 6
甘露糖（Man） 0.999 2
阿拉伯糖（Arab） 0.999 1
葡萄糖醛酸（GlcUA） 0.999 5
半乳糖（Gal） 0.999 4
y=462 850x-1.0×106
y=294 578x-631 606
y=254 989x-571 317
y=543 704x-1.0×106
y=284 248x-632 697
y=838 353x-2.0×106
y=809 726x-2.0×106
0.032 5～0.163
0.035 0～0.175
0.030 0～0.150
0.015～0.075
0.025 0～0.125
0.032 5～0.163
0.030 0～0.150
标准曲线 线性范围（μg）相关系数（r）
单糖
测得量
μg
RSD％
平均回收
率（%）
本底值
μg
加标量
μg
葡萄糖（Gle）
半乳糖醛酸（GalUA）
鼠李糖（Rha）
甘露糖（Man）
阿拉伯糖（Arab） 1.56
葡萄糖醛酸（GlcUA） 1.75
半乳糖（Gal） 1.24
1.84
1.96
1.45
0.31
0.65
0.70
0.60
0.30
2.48
2.65
2.04
0.62
2.1
2.4
1.9
2.2
99.5±2.09
99.5±2.39
99.3±1.89
103.2±2.27
0.50
0.65
0.60
2.05
2.41
1.82
2.5
2.4
1.8
99.4±2.49
100.6±2.41
98.4±1.77
成 分
葡萄糖（Glc）
半乳糖醛酸（GalUA）
鼠李糖（Rha）
甘露糖（Man）
阿拉伯糖（Arab）
葡萄糖醛酸（G1cUA）
半乳糖（Gal）
标准单糖（min）
38.650
41.508
44.408
48.663
51.228
66.408
75.512
天山花楸多糖（min）
38.660
41.510
44.410
48.665
51.231
66.411
75.522
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2011年 第 29卷 第 5期
2011 Vol.29 No.5
新疆中医药
Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine
[2] 戴红，张宗才，张新申，等.芦荟多糖及其分离分析[J].氨基酸和
生物资源，2004，26（1）：5-7.
[3] 耿越，王建波，刘靓雯，等.高效毛细管电泳法测定玉米花粉多糖
中单糖的组成[J].中草药，2005，36（8）：1164-1166.
（收稿日期：2011- 04- 19；修回日期：2011- 06- 29）
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中医治疗呃逆用药的性味归经研究
汪海飚
（新疆医科大学附属中医医院， 新疆 乌鲁木齐 830000）
摘 要 目的：探讨中医治疗呃逆所用方剂药物性味、归经的规律和特点，为呃逆的中医治疗提供参考和借鉴。
方法：借鉴循证医学和流行病学的思路与方法，将符合纳入标准和排除标准的98篇中医治疗呃逆的文献中的用药和
药物归类，并分别查出其性、味、归经，用SPSS17.0软件进行统计分析。结果：对所涉及的“性”进行描述统计发现中医
治疗呃逆用药主要是温性，其次是平性药物，此两性占到了全部用药药性的73.5％；用药以苦味为最，其次是辛味药，
此两味占到了全部用药药味的64.3％，其它药味则使用较少；“归经”以归脾经的药物为最，紧随其后的是归胃、肺经
的药物，此三归经占到了全部用药归经的70.8％。结论：治疗呃逆应紧扣其病机，辛开苦降，药物以温性为主，脏则重
在调理脾胃，其次是肺。
关键词 呃逆；性味/归经；规律
呃逆以气逆上冲，喉间呃呃连声，声短而频，令
人不能自制为主证[1]。本证古称“哕”。《内经》已对该
病的病因病机有所阐述，并记载了治疗方法。“然致
呃之由，总由气逆……而呃之大要，亦唯三者而已，
则一曰寒呃，二曰热呃，三曰虚脱之呃。”（《景岳全
书·呃逆》），为后世辨证施治奠定了基础。呃逆相当
于西医学中的单纯性膈肌痉挛，其它病如胃肠神经
官能症、胃炎、胃扩张、胸腹腔肿瘤、肝硬化晚期、脑
血管病、尿毒症以及胸腹手术后都会引起膈肌痉
挛，西医治疗手段不多，效果不理想[2]。中医药在治
疗中积累了丰富的经验，故而本研究系统整理近代
一家治疗呃逆的性味归经等规律，以期为呃逆的中
医处方用药提供借鉴。
1 资料来源
中国期刊全文数据库（CNKI）2006～2010年中医
治疗呃逆的相关临床研究文献。
2 选择标准
2.1 纳入标准
有关中医或中西医结合治疗高尿酸血症涉及
处方用药的各种临床研究文献，包括专家经验、病
历报告、病例分析、病例对照试验、专方专药的研究
等。文献须有明确的药物组成，如为《方剂学》中所
载方剂则需有明确的方名及加减。只统计主方用
药，针对伴随症状的加减用药不计。
2.2 排除标准
理论探讨性质文章；自拟方仅有方名，没有明
确的药物组成，或只列出方中几味中药而不全的文
章；针对西医常规治疗产生副作用治疗方法的文
章；膏方及非口服用药（包括针灸、贴敷、穴位注射）
疗效探讨的文章；少数民族医学用药探讨的文章；
没有辨证分型或根据所描述症状无法判定证型者；
食疗类文章不计；一稿多投或同一研究从不同角度
发表的多篇文章，只取其中一篇药物组成完整的，
其余的不计。
3 方法
3.1 文献检索
以中国期刊全文数据库为主库，检索年限为
2006～2010年，检索词为“呃逆”，然后选择中医、中
西医结合、中药栏下的所有文章下载备用。
3.2 中药名称及性味、归经的规范
对文献中同一味中药但是采用了不同的名称
者，依照《中药学》[3]及《中药大辞典》[4]予以规范。所
有药物的性味、归经的确定均依据依照《中华人民
共和国药典》进行规范，次则参照《中药学》所载。统
计不同归经所属药物的使用频次，以每一经出现一
次为一个统计单位，凡一药归数经者分别统计之；
同时，分别统计它们的性味。
3.3 统计分析
作者简介：汪海飚（1969-），男，学士，副主任医师，主要从事中医内科杂症的临床研究，E- mail：goodies@yahoo.cn。
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