全 文 ：药学学报 ^ e t a Ph a r m a e e u r i e a s in i e a 19 9 3 ; 2 8 ( 7 ) : 4 8 1~ 4 8 5
毛蓖试的抗诱变作用及代谢转化
李润沼 ’ 裴惠平 ’ ` 籍秀娟
(中国医学科学院药物研究所 , 北京 1 0 0 050 ; ` · 河南新乡市中心医院 , 新乡 月5 3 0 00)
提要 研究表明 , 毛蓖贰可显著抑制 MM c 和 M M s 等诱变剂对沙门氏菌 T A I . 和 T A . 。 回复突变
作用 ; 对 M M c 诱发的小鼠 P E c 微核抑制率达 56 . 5 % 。 代谢研究表明 : 毛蓖贰抑制 D N A 生物合成的作
用可被肝做粒体酶和胞浆液分别降低 46 和 12 % ; R P 一 H P L c 测定显示 , 体外毛蓖贰可被肝微粒代谢
转化 。
关性词 毛蓖贰 ;抗诱变作用 ;代谢转化
李 前文报道了毛蓑贰 (r an un cu iln ; R A N )对肿瘤细胞的细胞毒作用 , 并证实此细胞毒作用与
抑制 D N A 聚合酶和促进 自由基生成有关川 ,但同期进行的荷瘤动物实验仅显示微弱的疗效 ,
R A N 每日 3 0 0 m g / k g i p 使让w i s 肺癌生长抑制 3 0% ;使 p 3。。白血病小鼠生命延长 l d ( p < 0 . 0 5 .
未发表资料 ) 。 R A N 的体内 、 外活性存在明显差别 。 有文献报道与 R A N 结构类似的原白头翁素
有抗诱变作用 ` 2 , , 而 R A N 是 否也有此作用 , 以及 R A N 的抗肿瘤作用是否与其抗诱变作用有
关 ? 据此 ,本文研究了 R A N 的抗诱变活性 ,并初步探讨了 R A N 体内 、 外活性差异的原因 。
实 验 材 料
药品 R A N 为本所合成 ; 3 H 一dT R 为中科院原子能所生产 ; 甲基磺酸 甲醋 ( M M s) 由 M o r ck
公司 生产 ; 卡铂 (J M 。 ) 由齐 鲁制药 厂生产 ; 丝裂霉素 ( M M C ) 为 日本协和 公司产 品 ; P OP 及
OP OP P 由上海试剂一厂生产 。
实验动物 昆明种小鼠体重 18 一 2 9 , 由医科院动物 中心提供 , 早舍兼用 , 每批实验为同
一性别 。
仪器 H p CL : v a r i a n o DS 柱 。 4 . 6 m m x 2 . 5 m m ; S h im a d z u L c 一 g A 泵 . s h im a d z u s p D 一 6 A
检测器 ; S p 4 2 0 9 记录仪 。 色谱条件 : 流动相 M e 0 H / H Zo ( l / 9 ) ;流速 1 . 0 m l / m 三n ; 检测波长 2 0 7
方 法 与 结 果
~不
R A N 的抗诱变作用
采用 A m尹s 回复突变实验方法 ` ” , 选用 T A : o 。和 T A , 。2菌株 ,分别为 M M C , M M s · N a N 3 及 JM :
为阳性诱变剂 , 倒板后 37 C 温箱培养 , 48 h 后计数回变菌落数 。 按公式 :
回变抑制率% - 对照组菌落数
一实验组菌落数
对丽组菌落数二自发回变菌落数 X 10 0
卞文 J几 19 9 2 年 6 月 22 卜I收到 。
现工作单位 : 北京氏科大学天然药物及仿生药物国家敢点实骏室 , 北京 1 00 0 8 3
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~ - ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ . . 口 . .
4 8 2 药学学报 A e t a P h a r m a e e u t i e a S in i e a 19 9 3 ;2 8 (7 ): 4 8 1 ~ 4 8 5
求出回变抑制百分率 。 结果显示 , R A N 可抑制 M M (S 0 . 25 略 / lP at e )诱发的 T A I。。和 T A I。2回复突
变 , 且有量效关系 , 其中对 T A Lo Z作用较强 , 抑制率达 60 写 (表 1 ) ; 针对 T A I。 2菌株 , R A N 抑制
M M e ( l 乒g / p la t e )诱导的回复突变作用较强 ,抑制率可达 7 2% ; 对 J M : ( 6 0 0 9 / p la t e )诱发的回复
突变抑制率为 36 . 6 % ; 对 N a N : l( . 5 乒g / lP at e )诱发的回复突变作用无明显影响 (表 2 ) 。
T 自b E f f ec t o f r a n u n e u l in o n i n d u e t i o n o f H i s 斗
一
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3 7
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7 3 2士 11 . 份
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0 1 ,份 e o n t r o l . M M S : m e t h y l m e th a n e s u l f a n a t e
·
几 b 2 E f f e e t of ar n u n e u li n o n i n d u e t io n o f H i s + r e ve art n 妇 b y t h er k n o w n m u t a醉 n s
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6 9 9士 56 健 ( 18 . 2 4 )
5 17士 6 0 书 硬 ( 4 2 . 7 )
2 9 3士 6 1 替 件 ( 7 2 . 2 )
N a N 3 ( 1 15 协g / Pl a r e ) JM . ( 60 终g / Pl a t e )
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1 5 70士 16 0 ( 1 6 . 3 )
1 16 1士 2 13 ( 2 1 . 9 )
1 18 0士 12 3 片 . ( 3 6 . 6 1 )
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, 妥 备
P < 0
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0 1 ,讶 e o n t r o l . M M C : m y t o m y e i n C
R A N 对 M M c 诱发的小鼠 P C E 微核的影响
参照 R aJ 等的方法 ` , ’ ,将昆明小鼠分为 4 组 : 对照组 、 诱发微核组 ( M M c ! . 5 m g / k g ) 、 诱发
剂 十 R A N ( 3 0 0 m g / k g )组及单用 R A N 组 。 每组动物 7 只 , i p M M e 后 3 0 m i n 给 R A N , 3 0 h 后处
死动物 ,骨髓涂片 , 以 iG e m sa 染色后进行 CP E 微核计数 , 每片计 5 0 个 cP E 。 结果表明 : 合用
R A N 组与单用 M M c 组相比 , 微核发生率下降 56 . 5% (表 3 ) 。
T a b 3 E f f e c t o f r a n u n e u l i n o n M M C i n d u e de b o n e m a r r o w
m ie r o n u e l e u s f o r m a t i o n i n m i c e ( n = 7 )
O o s e M i e t o n u e 】e a t司 P C E
G r o u P
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0 5 R A N
矛w e o n t r o l ;
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.
0 1 R A N 一 M M ( 一 , 兮 M M C ; P C E : p o ly e h r o m a t ie e r y r h r o e y r e 、 .
药学学报 ^ e tah Pa rm a e eu tia es in i ea 9 19 3 ;8 ) ( 7 2:8 1 4~ 8 4 5
代谢酶对R AN 体外活性的影响
大鼠肝微粒体制备 大鼠禁食一夜 ,次 日断头处死 , 取肝脏制备微粒体并保留上清液 (胞
浆液 ) , 以考马氏亮兰法测定蛋白含量后 , 一 20 C保存 。
取 L : : .。腹水瘤细胞悬液 (l . 5 x l . 0 6 / m l ) ,每管 l ml , 除空白外均加入 R A N , 终浓度 为 50
。m o 一/ L ,分为 3组 : R A N 组 、 R A N + 肝微粒体酶液 5 0 0 1( 含 N A D p H 5 m m o l / L ,酶蛋白浓度为 10
m g / m一) 、 R A N + 胞浆液 10 0 0 1 (蛋白含量为 8 m g / m 一) 。 于 3 7 C温浴 3 0 m i n ,加入 ’ H 一dT R 一 8 5 K
10
’ “
qB /ml
,
l h 后置冰浴终止反应 , 以纸片法测放射性 。 结果显示 : R A N 抑制 “ H 一 dT R 的参入作
用在加肝微粒体酶组下降 46 % , 在加胞浆液组下降 12 . 3% ,统计学均有显著意义 (图 l ) 。
姿
乙工X一ǎ目召!矛à盆óO
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F ig 1 E f f e e r s o f r a t liv e r m ie r os o m e a n d c y t o P la s m e n z y m
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0 1 ,份 e o n t r ol ;
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, △之 P < 0
.
0 1 ,份 R A N .
H p L c 测定肝微粒体酶作用下 R A N 的含 t 变化
标准曲线 精确称取 6 . 95 m g R A N , 溶于 0 . 1 m m of / L 磷 酸缓 冲液 5 . 3 叫 中使成 2
m m o 一/ L 。 反应系统 含 : 肝微粒体酶 10 m g , 蛋 白质 / m l , N A D p H 1 0 m m o r / L , 磷酸缓冲液 0 . 1
m ol / L
, 总体积 1. 19 m l , R ^ N 的终浓度为 17 . 8 6 , 3 5 . 0 9 , 6 7 . 9 3 及 8 4 . 0 3 o m o l / L 。 每管分别取
s 川进样 , H P Le 检测 。 结果显示在 17 . 8 6 至 5 0 . 0 3 o m o 一/ L 范围内 , R A N 的峰高与其浓度呈良
好的线性关系 , 直线方程为 y ( 。m o 一/ L ) = 0 . 1 7 5 1+ 0 . 12 9 7 x ( m ) , 相关系数 r = 0 . 9 9 8 8 。
肝微粒体酶对 R A N 含 l 的影响 反应系统组成同前 , 试验管加入 2 m m ol L/ R A N 4 0 川 ,
对照管不加药 , 37 C 共同温浴 , 60 m in 后 ,对照管加入与前等量 R A N , 随即置冰浴终 止反应 。
H P LC 检测显示与肝微粒体酶共同温浴 l h ,可使 R A N 检测峰从 0 . 0 2 7 6士 0 . 0 0 15 ( m )下降到
0
.
0 一8 3士 0 . 0 0 2 5 ( m ) ( n = 3 , l, < 0 . 0 1 ) , 即 R A N 含量下降 3 3 . 6 9% . 同时与对照组相 比 · 于 2 5 8
n m 处出现一新的吸收峰 (图 2 ) 。
一 ~ 篇二一
F i g 2 C h a n se o f R P
一
H P L C
e h r o m a to g r a m o f R A N a t 2 5 8 n m a f t e r
i n e u 匕a ti o n w it h r a t l iv e r m i e r os o m e
e n z y m e s
,
A : be f o r e in e u加 t io n w it h
m ie r os o m e ; B
: 1 h a f te r i n e u 加 t i o n w it h
m iC t o s o m e
.
- 一 -一 -一 - ~ ~ . . . . . . .
药学学报 A et aP h arm a e` u t i e aS in i e a1 9 9 3 ; 2 8 (7 ) : 4 8 1一 4 8 5
讨 论
实验结果显示 R A N 对多种诱变剂产生 T 人 ,。。 / T A , 。2菌株的回复突变有一定抑制作用 ,且对
T A
,。 : 的作用较强 。 由于 T A : 。 2菌株是唯一有 自我修复能力的沙门氏菌株 , 因此 , 这种选择性提
示 R A N 可能有促进 D N A 修复功能 。 K ak iun m a 等曾指出 , a , 压不饱和内醋的抗诱变作用机制可
能是通过捕捉琉基改变 D N A 修复酶活性 ,修正易误修复 (er r or 一 rP on e 5 0 5 esr op n se ) ,增强无误
修复 ( e r r o r f r e e r e阵i r )而发生的 ` 5 , 。 我们的结果支持这种推测 。
肝微粒体酶及胞浆液使 R N A 体外抑制 D N A 合成作用分别下降 46 和 12 写 ; 在模拟肝脏
代谢条件下 ,用 H P L C 检测证实在 1 h R A N 转化了 3 . 69 写 。 因此 ,体 内 、 外活性的差异可能是
由于 R A N 转化的结果 。但 R A N 的体外抗诱变作用却未受体内代谢的影响 , R A N 的体外 O N A
保护作用达 46 . 5% 。值得注意的是在模拟肝代谢条件下 , H P L c 检测于 2 58 n m 处出现的新吸收
峰与原白头翁素 ( p r o toa en m on in) 的吸收峰相吻合 ,后者正是 R A N 转化中间产物之一 , 具有较
强的抗诱变作用 ` ” 。 R A N 的体内 、外活性在抗肿瘤作用与抗诱变作用之间的不平行 , 以及可能
存在的不同作用机制提示 : 上述两种作用可能是 由其结构上不同功能团所决定的 。
参 考 文 献
李润沼 ,等 . 毛蓖贰体外细胞毒活性及其机制 . 药学学报 1 9 9 3 ; 2 8 , 3 26 .
M i n a k a ta H
, e t a l
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P r o t oa n e m o n in
, a n a n t im u at g e n iso l
a ted f r om lP
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. 对泛公“ 舜` 1 9 8 3 ; l一 : 3 1 7 .
M a r o n D M a n d A m e s B N
.
R e v i se d m e t h od s f o r t h e 义 lm o n e ll a m u at ge n ie it y et s t . 乃以 19 8 3 , 1 1 3 :
1 7 3
.
R a j sA
a n d K a t z m or r is
.
I n h i ib t or y e f f e ct o f 7
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一
be n z of la v o n e o n D M B A
一 a n d 加 P , idn u c e d bo n e
m a r r o w m i e r on
u e le i i n m i沈 . 2阮汀 1 9 8 3 ; 1 1 0 : 3 3 7 .
K a k i n u m a K
, e t a l
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S t r u e t u r e
一 a e t i v it y r e l a t i o n hs i P a n d d ies g
n of a n a n t im u t a g e n a邵 i n s t th e U V -
i n d u e ed m u ta t io n o f 忍犯板 , 动初 口以艺. 月少祀 刀刚 〔狠城 1 9 8 6 ; 5 0 : 6 2 5 .
药学学报 ^ e t a P h a r m a e e u t se a sin i e a 1 9 9 3 ; 2 5 ( 7 ): 一8 1 ~4 5 5 4 8 5
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