全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2015，27:710-714
文章编号:1001-6880(2015)4-0710-05
收稿日期:2014-09-19 接受日期:2015-02-15
基金项目:国家自然科学基金(81160515)
* 通讯作者 Tel:86-991-2320227;E-mail:zhaojun21cn@ 163． com
新疆圆柏总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的防治作用
刘 涛1，许 芳1，赵 军2* ，由淑萍1，徐 芳2
1 新疆医科大学公共卫生学院，乌鲁木齐 830011;2新疆药物研究所-维吾尔药重点实验室，乌鲁木齐 830004
摘 要:利用弗氏完全佐剂(FCA)诱导的佐剂性关节炎(AA)模型对新疆圆柏总黄酮( JSTF)的抗炎作用进行研
究。致炎前预防性给予 JSTF后，AA大鼠急性期足肿胀的趋势有一定的改善，其血清 IL-1β和 TNF-α水平也显
著降低(P ＜ 0． 05)。炎症继发期预防给药后，JSTF不同剂量组均可不同程度抑制大鼠皮肤的红斑、溃烂和降低
外周血中 TNF-α水平(P ＜ 0． 05)，且高剂量组能明显降低关节炎指数(AI)(P ＜ 0． 05)，并呈剂量-效应关系。炎
症继发期治疗给药后，各给药组大鼠皮肤出现皱褶，皮肤色泽由暗红色变为正常，肿胀消退，继发侧的肿胀和红
斑也有明显改善;与模型组比较，各组大鼠的 AI 值有明显的下降(P ＜ 0． 05)，其中高、低剂量组还能显著降低
TNF-α水平(P ＜ 0． 05)。结果表明 JSTF对大鼠佐剂性关节炎具有一定的预防和治疗作用。
关键词:新疆圆柏;黄酮;佐剂性关节炎
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A DOI:10． 16333 / j． 1001-6880． 2015． 04． 030
Preventive and Therapeutical Effects of Total Flavonoids from
Juniperus sabina on Adjuvant- induced Arthritis in Ｒats
LIU Tao1，XU Fang1，ZHAO Jun2* ，YOU Shu-ping1，XU Fang2
1College of Public Hygiene，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China;2Xinjiang
Key Laboratory for Ｒesearch and Development of Uighur Medicines;Xinjiang Institute of Materia Medica，Urumqi 830004，China
Abstract:To investigate the preventive and therapeutical effects of total flavonoids from Juniperus sabina ( JSTF) on
Freund’s complete adjuvant (FCA)-induced arthritis in rats． JSTF was administered intragastrically once a day before
adjuvant-induced arthritis (AA) induction，JSTF can reduce rat right paw ( injected side) swelling，and significantly im-
prove IL-1β and TNF-α level (P ＜ 0． 05) ． In preventive experiment of secondary inflammatory，JSTF (125，250，500
mg /kg) can inhibit the degrees of skin erythema in rats，and reduce the TNF-α levels in peripheral blood (P ＜ 0． 05)，
of which high-dose group significantly reduce arthritis index (AI) (P ＜ 0． 05) at a dose-response manner． In therapeuti-
cal experiment of secondary inflammatory，skin appeared folds with color from dark red to normal，secondary swelling and
erythema significantly improved，compared with the model group，AI values of various group in JSTF were significantly
decreased (P ＜ 0． 05)，of which the high and low dose group also significantly reduced TNF-α levels (P ＜ 0． 05) ． The
results showed that JSTF had preventive and therapeutical effects on adjuvant-induced arthritis in rats．
Key words:Juniperus sabina L． ;flavonoid;adjuvant-induced arthritis
新疆圆柏(Juniperus sabina L． )，又名砂地柏、叉
子圆柏和臭柏等，为柏科圆柏属常绿匍匐灌木，广泛
分布于我国新疆、甘肃、内蒙和陕北的干旱荒山和沙
地之中［1］。据《维吾尔药志》、《新疆中草药手册》和
《中国沙漠药用植物》等医药文献记载，新疆圆柏枝
叶是我国民间常用于治疗风湿性关节炎、类风湿性
关节炎等疾病的传统药材［2］。该药材主要含有黄
酮、木脂素、萜类和挥发油等多种类型的化合物，具
有抗氧化、抗菌、抗炎等生物活性［3］。Akkol EK 等
报道了五种圆柏属植物的不同溶剂提取物均具有显
著的抗炎镇痛活性，且不会造成胃肠道损伤［4］。为
了开发这一传统药用资源，本文作者通过弗氏完全
佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型对新疆圆柏中的
黄酮类成分进行抗炎活性评价，以期为该药材进一
步的开发利用提供依据。
1 材料与方法
1． 1 实验材料
新疆圆柏总黄酮 ( JSTF)自制 (黄酮含量为
69. 1% );雷公藤多苷片 ( Tripterygium glycosides
Tablet，TGT)，批号 1305124B，规格 50 片 /瓶，浙江得
恩德制药有限公司;弗氏完全佐剂，FCA，规格 10
mL /支，美国 Sigma公司;所用其它试剂均为国产分
析纯。
SPF级健康 SD 大鼠，雄性，体重 180 ± 20 g，由
新疆医科大学实验动物中心提供，证书号 SCXK
(新)2011-0004。
1． 2 大鼠佐剂性关节炎(AA)模型的制备及药物干
预方案
按文献方法［5］，用 75%乙醇对大鼠右后足进行
消毒后，除空白对照组注射生理盐水外，其他各组于
右后足跖皮内注射 FCA(0． 1 mL /只)，约 14 d 左右
可成功诱发大鼠佐剂性关节炎。实验分为原发性病
变(急性期)预防、继发期预防和继发期治疗给药，每个
实验使用动物数为 36只，共 108只，随机分为 6组，每
组 6只。分别为空白对照组、模型组、雷公藤多苷 TGT
组和 JSTF低中高剂量组(125、250、500 mg /kg)。
1． 2． 1 JSTF对急性期原发性病变的预防作用
连续给予药物干预 5 d，于给药第 3 d用 FCA造
模(记为实验 D1)，D4 实验结束，共 6 d;于造模前、
造模后 6、12、18、24、96 h分别测量大鼠后肢右侧足
容积，以观察药物对佐剂性关节炎大鼠急性炎症的
影响。
1． 2． 2 对继发期病变的预防作用
致炎 7 d后开始给予药物干预，连续 7 d;于造
模前、造模后 D2、D4、D7、D10、D14 测量大鼠后肢双
侧足容积，并于第 14 d进行 AI 的评价，以观察药物
对 AA大鼠继发病变的预防作用。
1． 2． 3 JSTF对继发期病变的治疗作用
致炎第 14 d后开始给予药物干预，连续 16 d;
分别于造模前、造模后 D2、D4、D7、D10、D14、D18、
D22、D26、D30 测量大鼠后肢双侧足容积，并于 D14
开始，每隔 3 d 进行 AI 的评价，直至实验结束。以
观察药物对佐剂性关节炎大鼠继发性病变的治疗作
用。
每个实验每组大鼠末次给药后 24 h，经腹主动
脉取血，室温静置 30 min 后，于 4 ℃ 3000 rpm 离心
15 min，分离血清，置冰箱-20 ℃保存，待测。
1． 3 指标检测
自制足容积测试装置，采用排水法测量大鼠后
肢左、右踝部以下容积，并计算足肿胀度。足肿胀度
=致炎后足体积﹣致炎前足体积。按全身病变 5 级
评分法对四肢关节红肿程度进行累计积分和评价，
计算关节炎指数(AI)。标准为:0 分:无关节炎;1
分:个别足趾发红、肿胀;2 分:大部分足趾及足底肿
胀;3 分:踝关节及以下肿胀;4 分:肿胀累及膝关节
以上，不能负重。AI =四肢关节评分之和。大鼠评
分 ＞ 4 分认为造模成功。采用酶联免疫法，按试剂
盒操作说明书测定大鼠血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α
和 PEG2 水平。
1． 4 统计学分析
数据采用 SPSS17． 0 统计软件，结果用 珋x ± s 表
示，通过 ANOVA LSＲ进行分析，检验水准 α = 0． 05。
2 结果与分析
2． 1 JSTF对 AA大鼠急性期原发性病变的影响
2． 1． 1 JSTF对 AA 大鼠急性炎症期足趾肿胀的影
响
如表 1 所示，与空白对照组比较，模型组大鼠足
趾肿胀度明显增加，在 24 h 时达峰值，且各时间点
均有统计学意义(P ＜ 0． 01)。与模型组比较，在致
表 1 JSTF对 AA大鼠急性炎症期足趾肿胀的影响(n = 6，珋x ± s )
Table 1 Effects of JSTF on acute inflammation period of AA rats (n = 6，珋x ± s )
分组
Group
剂量 Dose
(mg /kg) 6 h 12 h 18 h 24 h 96 h
对照组 Control － 0． 083 ± 0． 076 0． 083 ± 0． 104 0． 083 ± 0． 076 0． 000 ± 0． 000 0． 267 ± 0． 176
模型组 Model － 1． 350 ± 0． 150* 1． 442 ± 0． 150* 1． 367 ± 0． 088* 1． 450 ± 0． 126* 1． 440 ± 0． 114*
雷公藤多苷 TGT 20 1． 298 ± 0． 245* 1． 433 ± 0． 176* 1． 300 ± 0． 197* 1． 350 ± 0． 283* 1． 425 ± 0． 232*
JSTF低剂量 JSTF-L 125 1． 280 ± 0． 196* 1． 434 ± 0． 243* 1． 257 ± 0． 214* 1． 270 ± 0． 161* 1． 308 ± 0． 033*
JSTF中剂量 JSTF-M 250 1． 308 ± 0． 311* 1． 425 ± 0． 126* 1． 280 ± 0． 091* 1． 308 ± 0． 292* 1． 377 ± 0． 127*
JSTF高剂量 JSTF-H 500 1． 000 ± 0． 334* # 1． 425 ± 0． 155* 1． 288 ± 0． 085* 1． 242 ± 0． 120* 1． 230 ± 0． 162*
注:与空白对照组比较* P ＜ 0． 01;与模型组比较#P ＜ 0． 05。
Note:Compare with control，* P ＜ 0． 01;compare with model，#P ＜ 0． 05．
117Vol. 27 刘 涛等:新疆圆柏总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的防治作用
炎 6 h时，JSTF高剂量组(500 mg /kg)大鼠足趾肿胀
度即有明显降低(P ＜ 0． 05)，在 12 h 达到高峰后，
足趾肿胀度均逐渐减轻;中低剂量组对急性期的大
鼠足趾肿胀也有一定的缓解作用。
2． 1． 2 JSTF 对急性炎症期 AA 大鼠血清 IL-1β 和
TNF-α水平的影响
与空白对照组比较，模型组大鼠血清中 IL-1 和
TNF-α水平明显增高(P ＜ 0． 05);与模型组比较，
JSTF中剂量组(250 mg /kg)大鼠血清中的 IL-1 和
TNF-α水平显著降低(P ＜ 0． 05)，结果见表 2。
2． 2 JSTF对 AA大鼠继发性病变的预防作用
2． 2． 1 JSTF对 AA大鼠继发期足趾肿胀的预防作用
如表 3 所示，与模型组比较，JSTF 的高剂量组
(500 mg /kg)可使 AA大鼠的关节炎指数 AI 显著降
低(P ＜ 0． 05)，且不同剂量的 JSTF 对 AA 大鼠继发
侧足趾肿胀度均有降低趋势，但无统计学意义。
表 2 JSTF对急性期实验 AA大鼠血清 IL-1、TNF-α的影响(n = 6，珋x ± s )
Table 2 Effects of JSTF on IL-1 and TNF-α levels in acute inflammation period of AA rats (n = 6，珋x ± s )
分组
Group
剂量 Dose
(mg /kg)
IL-1β
(pg /mL)
TNF-α
(pg /mL)
对照组 Control － 76． 075 ± 1． 450 69． 679 ± 5． 731
模型组 Model － 98． 200 ± 21． 447* 110． 708 ± 34． 985*
雷公藤多苷 TGT 20 87． 433 ± 10． 851 98． 365 ± 30． 065
JSTF低剂量 JSTF-L 125 96． 033 ± 6． 315 100． 654 ± 26． 963
JSTF剂量 JSTF-M 250 78． 308 ± 7． 688# 69． 333 ± 15． 125#
JSTF高剂量 JSTF-H 500 93． 210 ± 9． 500 89． 400 ± 12． 085
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0． 01;与模型组比较，#P ＜ 0． 05。
Note:Compare with control，* P ＜ 0． 01;compare with model，#P ＜ 0． 05．
表 3 JSTF对继发期预防实验 AA大鼠继发侧足趾肿胀的影响(n = 6，珋x ± s )
Table 3 Preventive effects of JSTF on the secondary foot swelling degree of AA rats (n = 6，珋x ± s )
分组
Group
剂量 Dose
(mg /kg) D7 D10 D14 AI
对照组 Control － 0． 060 ± 0． 036 0． 067 ± 0． 076 0． 100 ± 0． 000 0． 0 ± 0． 0
模型组 Model － 0． 178 ± 0． 097 0． 227 ± 0． 069 0． 235 ± 0． 096 3． 8 ± 1． 0＊＊
雷公藤多苷 TGT 20 0． 163 ± 0． 060 0． 263 ± 0． 200 0． 263 ± 0． 217 3． 7 ± 0． 5＊＊
JSTF低剂量 JSTF-L 125 0． 090 ± 0． 156 0． 237 ± 0． 158 0． 233 ± 0． 202 3． 5 ± 0． 5＊＊
JSTF中剂量 JSTF-M 250 0． 110 ± 0． 110 0． 180 ± 0． 144 0． 150 ± 0． 157 3． 3 ± 0． 5＊＊
JSTF高剂量 JSTF-H 500 0． 174 ± 0． 165 0． 198 ± 0． 228 0． 175 ± 0． 174 3． 0 ± 0． 0＊＊#
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与模型组比较，#P ＜ 0． 05。
Note:Compare with control，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;compare with model，#P ＜ 0． 05．
2． 2． 2 JSTF对 AA 大鼠继发期血清 IL-1β 和 TNF-
α水平的影响
与空白对照组比较，模型组大鼠血清中 TNF-α
水平显著增高(P ＜ 0． 01)。与模型组比较，JSTF低、
中、高剂量(125、250、500 mg /kg)均能使 AA大鼠血
清中 TNF-α水平明显降低(P ＜ 0． 01)。不同剂量的
JSTF也能降低 AA 大鼠血清中 IL-1β 水平，但无统
计学意义，结果见表 4。
表 4 JSTF对继发期预防实验 AA大鼠血清中 IL-1β、TNF-α的影响(n = 6，珋x ± s )
Table 4 Effects of JSTF on IL-1β and TNF-α levels in secondary period of AA rats (n = 6，珋x ± s )
分组
Group
剂量
(mg /kg)
IL-1β
(pg /mL)
TNF-α
(pg /mL)
对照组 Control － 89． 450 ± 14． 017 74． 515 ± 7． 962
模型组 Model － 107． 200 ± 12． 642 143． 754 ± 23． 927＊＊
雷公藤多苷 TGT 20 93． 510 ± 17． 363 83． 096 ± 10． 363##
217 天然产物研究与开发 Vol. 27
JSTF低剂量 JSTF-L 125 101． 890 ± 19． 353 111． 754 ± 18． 293* #
JSTF中剂量 JSTF-M 250 92． 680 ± 12． 901 91． 340 ± 36． 008##
JSTF高剂量 JSTF-H 500 100． 975 ± 14． 126 108． 962 ± 12． 863* #
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与模型组比较，#P ＜ 0． 05，##P ＜ 0． 01。
Note:Compare with control，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;compare with model，#P ＜ 0． 05，##P ＜ 0． 01．
2． 3 JSTF对 AA大鼠继发性病变的治疗作用
2． 3． 1 JSTF对 AA 大鼠继发期足趾肿胀的治疗作用
从表 5、表 6 可见，不同剂量的 JSTF 对佐剂性
关节炎大鼠的继发性足肿胀均有一定的降低作用。
与空白对照组比较，模型组大鼠的足趾肿胀度及 AI
于第 18 d 开始，不同剂量的 JSTF 均能显著降低佐
剂性关节炎大鼠的 AI 值(P ＜ 0． 01)。JSTF 高剂量
组和低剂量组在实验第 18 d、第 26 d AI较雷公藤组
降低，并具有统计学差异(P ＜ 0． 05)。
表 5 JSTF对继发期治疗实验 AA大鼠继发侧足趾肿胀的影响(n = 6，珋x ± s )
Table 5 Therapeutical effects of JSTF on the secondary foot swelling degree of AA rats (n = 6，珋x ± s )
和分管分组
Group
剂量 Dose
(mg /kg) D14 D18 D22 D26
对照组 Control － 0． 100 ± 0． 050 0． 100 ± 0． 087 0． 150 ± 0． 050 0． 133 ± 0． 115
模型组 Model － 0． 210 ± 0． 143 0． 317 ± 0． 151 0． 319 ± 0． 052* 0． 360 ± 0． 139*
雷公藤多苷 TGT 20 0． 195 ± 0． 065 0． 280 ± 0． 185 0． 287 ± 0． 094 0． 296 ± 0． 174
JSTF低剂量 JSTF-L 125 0． 275 ± 0． 087 0． 267 ± 0． 196 0． 272 ± 0． 127 0． 275 ± 0． 081
JSTF中剂量 JSTF-M 250 0． 265 ± 0． 184 0． 282 ± 0． 136 0． 288 ± 0． 144 0． 285 ± 0． 118
JSTF高剂量 JSTF-H 500 0． 262 ± 0． 040 0． 265 ± 0． 078 0． 262 ± 0． 165 0． 265 ± 0． 058
表 6 JSTF对继发期治疗试验 AA大鼠 AI的影响(n = 6，珋x ± s )
Table 6 Effects of JSTF on AI in secondary period of AA rats (n = 6，珋x ± s )
分组
Group D14 D18 D22 D26
对照组 Control 0． 0 ± 0． 0 0． 0 ± 0． 0 0． 0 ± 0． 0 0． 0 ± 0． 0
模型组 Model 3． 8 ± 0． 4a 4． 8 ± 0． 8a 4． 8 ± 0． 8a 5． 0 ± 1． 3a
雷公藤多苷 TGT 3． 5 ± 0． 5a 3． 8 ± 0． 4a，c 3． 8 ± 1． 2a，b 4． 6 ± 0． 9a
JSTF低剂量 JSTF-L 3． 5 ± 0． 5a 2． 5 ± 0． 5a，c，e 3． 5 ± 0． 8a，c 3． 3 ± 0． 8a，c，d
JSTF中剂量 JSTF-M 3． 5 ± 0． 5a 3． 7 ± 0． 5a，c 3． 5 ± 0． 5a，c 3． 8 ± 0． 8a，b
JSTF高剂量 JSTF-H 3． 2 ± 0． 4a，b 2． 8 ± 0． 8a，c，e 3． 2 ± 0． 4a，c 2． 0 ± 0． 0a，c，e
注:与空白对照组比较，aP ＜ 0． 01;与模型组比较，bP ＜ 0． 05，cP ＜ 0． 01;与雷公藤多苷组比较，dP ＜ 0． 05，eP ＜ 0． 01。
Note:Compare with control，aP ＜ 0． 01;compare with model，bP ＜ 0． 05，cP ＜ 0． 01;compare with TGT，dP ＜ 0． 05，eP ＜ 0． 01．
2． 3． 2 JSTF对 AA 大鼠继发期血清 IL-1β 和 TNF-
α水平的影响
与空白对照组比较，模型组佐剂性关节炎大鼠
血清中 IL-1β 和 TNF-α 水平明显增高(P ＜ 0． 05)。
与模型组比较，JSTF 高、中剂量(500、250 mg /mL)
能显著降低 TNF-α水平(P ＜ 0． 05)。
表 7 JSTF对继发期治疗实验 AA大鼠血清中 IL-1β、TNF-α的影响(n = 6，珋x ± s )
Table 7 Effects of JSTF on IL-1β and TNF-α levels in secondary period of AA rats (n = 6，珋x ± s )
分组
Group
剂量 Dose
(mg /kg)
IL-1β
(pg /mL)
TNF-α
(pg /mL)
对照组 Control － 87． 100 ± 6． 755 74． 515 ± 7． 962
模型组 Model － 131． 850 ± 30． 691* 118． 992 ± 36． 643＊＊
雷公藤多苷 TGT 20 97． 400 ± 12． 616# 89． 738 ± 11． 212#
317Vol. 27 刘 涛等:新疆圆柏总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的防治作用
JSTF低剂量 JSTF-L 125 114． 210 ± 11． 012* 93． 781 ± 16． 707#
JSTF中剂量 JSTF-M 250 109． 884 ± 6． 568 100． 406 ± 10． 610*
JSTF高剂量 JSTF-H 500 111． 093 ± 21． 520* 91． 218 ± 12． 391#
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与模型组比较#P ＜ 0． 05。
Note:Compare with control，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;compare with model，#P ＜ 0． 05．
3 讨论
大鼠佐剂性关节炎是一种免疫性炎症模型，其
发病机制和病理表现与人类风湿关节炎相似，是评
价防治类风湿关节炎的常用药物模型之一［6］。佐
剂性关节炎分原发性反应期和继发性反应期，原发
病变属于急性应激反应，表现为致炎侧的关节、足跖
红肿，致炎后即可出现，18 ～ 24 h 达峰值，持续 3 d
左右逐渐减轻;继发病变属自身免疫应答反应，为造
模 8 d左右后出现的广泛性炎症，表现为致炎侧、非
致炎侧及双前肢的足肿胀，耳、尾出现关节炎结节和
红斑，足活动明显受限等［7］。雷公藤多苷是临床上
治疗类风湿性关节炎的常用中药，因此本文采用弗
氏完全佐剂 FCA诱导的佐剂性关节炎模型，以雷公
藤多苷为阳性对照，考察新疆圆柏总黄酮的抗类风
湿性关节炎作用。
FCA造模时即可观察到大鼠足底隆起，18 h 足
肿胀度达高峰，足底肿胀明显，皮温升高，皮肤充血;
3 d后足底肿胀稍有减小。可明显观察到 JSTF能减
轻 FCA引起的急性期肿胀的趋势，并可有效降低外
周血中 IL-1β、TNF-α 的水平，说明该有效部位对急
性期的炎症有较好的改善作用。在继发期预防实验
阶段，第 10 d 时，模型组中部分大鼠出现红斑、溃
烂、结痂，皮肤紧绷，手感僵硬，表面充血发亮，有些
动物无法负重并出现出现后肢对侧趾关节红肿等，
JSTF不同剂量组均可不同程度抑制红斑、溃烂，从
而降低继发性关节炎评分，且高剂量组能明显降低
关节炎指数 AI。JSTF 各剂量组还能明显降低大鼠
外周血中 TNF-α水平，并呈剂量-效应关系。继发病
变治疗期的大鼠致炎侧肿胀、红斑和溃烂明显，D14
时大部分动物表现出了明显的继发反应，对侧和前
肢的趾(指)关节开始肿胀，尾部关节膨出，少部分
动物耳部出现了结节。在给予 JSTF干预以后，各给
药组大鼠皮肤出现皱褶，皮肤色泽由暗红色变为正
常，肿胀消退;致炎侧足肿胀度有减轻趋势，继发侧
的肿胀和红斑也有明显改善。JSTF 各组大鼠 AI 值
在第 22 d后较模型组有明显的下降，JSTF高剂量组
和低剂量组也能明显降低 TNF-α 水平。结果表明
JSTF对 AA大鼠继发期炎症有一定的预防和治疗作
用，其发挥药效的物质基础和作用机制有待进一步
研究。
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