全 文 ：China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 7 中国药房 2012年第23卷第7期
江南卷柏（Selaginella moellendorffii Hieron.）是卷柏科卷
柏属药用植物，多年生草本，具有清热利湿、止血之功效[1]。已
知其化学成分有异茴芹素、银杏素等[2，3]。卷柏属含有丰富的
双黄酮类化合物，而黄酮碳苷很少报道，史社坡[4]2003年首先
从卷柏中得到了芹菜素-6，8-二-C-β-葡萄糖苷；笔者于2008年
在硕士学位论文中报道在江南卷柏中发现了 4种黄酮碳
苷 [5]；申健2010年的硕士学位论文中亦报道从布朗卷柏中分离
得到了芹菜素6，8-二-C-β-D-葡萄糖苷以及芹菜素6-C-β-D-葡
萄糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷[6]。本文详细报道3种黄酮碳苷的提
取分离方法和结构鉴定过程。
1 仪器与试药
INOVA 600核磁共振仪（美国Varian公司）；7.0T傅里叶变
换离子回旋共振质谱仪（美国 IonSpec公司）；U-2001紫外分光
光度计（日本Hitachi公司）；5700FFIR红外分光光度计（美国
Nicolet公司）；P680高效液相色谱仪（美国Dionex公司）。
江南卷柏全草于 2005年 7月采自湖北恩施，由湖北中医
药大学陈科力教授鉴定为江南卷柏 Selaginella moellendorffii
Hieron.，标本留存于湖北中医药大学中药标本中心。聚酰胺
粉（60～100目，武汉药科新技术开发有限公司）；Sephadex
LH-20（瑞士Pharmacia公司）；聚酰胺薄膜（20×20 cm，浙江台
州路桥四青生化材料厂）；薄层色谱硅胶G（青岛海洋化工厂）；
其他试剂均为分析纯。
2 提取与分离
江南卷柏干燥全草 12 kg，切段，依次用 15倍量 95％、
90％、80％乙醇各提取3 h，滤过，减压回收乙醇，浓缩成浸膏，
用蒸馏水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，
得到正丁醇部位浸膏120 g。取正丁醇部位浸膏113 g，上样于
聚酰胺柱（60～100目，86 cm×9 cm），以不同浓度的水-乙醇梯
度洗脱，每 500 mL为一流分，共收集 279份流分，用硅胶G薄
层和聚酰胺薄膜检识，合并相同流分，得 28个部分（Fr1～
Fr28）。取 Fr6（纯水洗脱部分）、Fr7（5％乙醇洗脱部分）经
Sephadex LH-20柱色谱（甲醇，60 cm×2.2 cm）纯化，流分结晶
Δ国家自然科学基金资助项目（30470193）
＊药师，硕士。研究方向：中药资源及其品质。电话：027-
88929175。E-mail：sweetness2001@126.com
# 通讯作者：教授。研究方向：中药资源及其品质。电话：
027-68890106。E-mail：kelichen@126.com
江南卷柏中的黄酮碳苷类成分研究Δ
朱田密 1，2＊，陈科力 1 #，黎 莉 1，3（1.湖北中医药大学省部共建中药资源与中药复方教育部重点实验室，武汉
430065；2.湖北省中医院药事部，武汉 430061；3.武汉工程大学化工与制药学院，武汉 430073）
中图分类号 R282.71；R932.71 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2012）07-0622-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.07.16
摘 要 目的：研究江南卷柏中的黄酮碳苷类成分。方法：采用溶剂提取、聚酰胺柱色谱、Sehpadex LH-20柱色谱分离纯化，通过
理化性质和波谱分析鉴定结构，并对化合物Ⅰ进行活性测试。结果：从江南卷柏正丁醇部位得到4种黄酮碳苷，鉴定其中3种，分
别为芹菜素-6，8-二-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅰ）、芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-β-D-吡喃木糖苷（Ⅱ）和芹菜素-6-C-β-D-吡喃木
糖-8-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅲ）。化合物Ⅰ能浓度依赖性地抑制结肠癌细胞环氧化酶-2 mRNA的表达。结论：化合物Ⅰ为首次从
江南卷柏中分离得到，Ⅱ、Ⅲ为首次从卷柏属中得到。
关键词 江南卷柏；化学成分；黄酮碳苷；环氧化酶-2
Study on Flavone-C-glycosides from Selaginella moellendorffii
ZHU Tian-mi，CHEN Ke-li，LI Li（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Resource and Compound Pre-
scription，Ministry of Education，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China）
ZHU Tian-mi（Pharmaceutical Department，Hubei Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430061，Chi-
na）
LI Li（School of Chemical Engineering & Pharmacy，Wuhan University of Technology，Wuhan 430073，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the flavoue-C-glycosides from Selaginella moellendorffii. METHODS：The compounds were
isolated and purified by solvent extraction，polyamide column chromatography and Sephadex LH-20 column chromatography，and their
structures were identified by means of physical and chemical properties and spectrum analysis. The activity of compound I was deter-
mined. RESULTS：The n-butyl extract of S. moellendorffii yielded four flavone-C-glycosides，three of them were identified as 6，
8-di-C-β-D-glucopyranosylapigenin（Ⅰ），6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-β-D-xylopyranosylapigenin（Ⅱ），6-C-β-D-xylopyrano-
syl-8-C-β-D-glucopyranosylapigenin（Ⅲ）.CompoundⅠ shows inhibition effect against the COX-2 mRNA expression of colon carcino-
ma cells in a concentration-dependent manner. CONCLUSION：CompoundⅠ is isolated from S. moellendorffii for the first time, and
compoundⅡandⅢ are reported for the first time from genus.
KEY WORDS Selaginella moellendorffii；Chemical constituents；Flavone-C-glycosides；COX-2
··622
中国药房 2012年第23卷第7期 China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 7
后得化合物Ⅰ（40 mg）；采用相同方法，Fr9（10％～15％乙醇洗
脱部分）纯化得复合结晶Ⅱ和Ⅲ（16 mg）。此外，Fr8（10％乙醇
洗脱部分）和 Fr10（15％乙醇洗脱部分）经过 Sephadex LH-20
柱色谱后，再用半制备高效液相色谱分离，亦得到复合结晶Ⅱ
和Ⅲ（10mg）。
3 结构鉴定
化合物Ⅰ：淡黄色粉末（甲醇），UV（MeOH）λmax：272、333
nm；IR（KBr）νmax：3 383（br，OH）、2 927（CH2）、1 651（Ar-C＝
O）、1 626、1 574、1 511、1 481（芳环骨架振动）、829（苯环对位
二取代）cm－1；HR ESI-MS（m/z 595.1 657[M+H]+，计算值595.1
663）推断分子式为C27H30O15（Ω＝13）。三氯化铁反应阳性，喷
三氯化铝显色剂于紫外光灯下显黄色荧光，提示可能为黄酮
类化合物；氨气熏后黄色荧光不变亮，为黄酮苷；常规酸水解
条件下不能被水解，表明为碳苷。其核磁共振氢谱（1H-NMR，
DMSO-d6，600 MHz）见 表 1；核 磁 共 振 碳 谱（13C-NMR，
DMSO-d6，150 MHz）见表2。δC低于140的碳原子数有6个，说
明黄酮母核除C-2、C-4、C-9外，还有 3个碳原子连有氧原子，
这和 1H-NMR中显示 3个-OH信号相符。糖基碳原子δ低至
81，是碳苷的表现。HSQC中δC 73.9、73.2分别与δH4.81（1H，d，
J＝10.8 Hz）、4.76（1H，d，J＝10.2 Hz）相关，是2个碳苷端基C、
H信号。根据 13C-NMR中的 12个糖碳信号，DEPT谱δC 59.7、
61.2显示的 2个CH2，1H-NMR中糖基所有氢原子的偶合常数
JH-H值都大于 5Hz以及 2个端基氢的偶合常数（J＝10.8 Hz，
10.2 Hz），说明2个糖单元都为β-D-吡喃葡萄糖，并且各自连在
母核上。HMBC中端基H-1″与母核C-5、C-6、C-7远程相关，端
基H-1′″与母核C-7、C-8、C-9远程相关，表明2个糖基分别连在
母核C-6和C-8位；另有远程相关信号确定了 3个-OH取代位
置在母核C-5、C-7、C-4′位。综合上述分析，并与文献对照[7]，
确定其为芹菜素-6，8-二-C-β-D-吡喃葡萄糖苷。
复合物Ⅱ和Ⅲ：黄色粒状结晶（甲醇），UV（MeOH）λmax：272、
330 nm；三氯化铁反应阳性，三氯化铝反应紫外光灯下显黄色
荧光，提示可能为黄酮类化合物；其 1H-NMR（DMSO-d6，600
MHz）见表1；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）见表2。糖基碳原
子δC低至 81，表明为碳苷。δC59～81有 22个C信号（δC70.3为
重叠），表明有4个糖基（2个六碳糖和2个五碳糖）。HMQC可
确定4个端基C-H：δC75.2、73.6、74.9、73.9分别与δH5.02（1H，d，
J＝9.0 Hz）、4.74（1H，d，J＝9.6 Hz）、4.65（1H，d，J＝9.0 Hz）、
4.55（1H，d，J＝9.6 Hz）相关。4个端基碳都处于较高场δC73～
75，说明 4个糖基与母核以碳键相连，为碳苷。端基氢的偶合
常数（J＝9.0 Hz，9.6 Hz）说明 4个糖基都是β构型；DEPT谱显
示 4个 CH2：δ C 59.7、61.2、70.3（2个 CH2叠加），1H-NMR（600
MHz）任意2个H的JH-H值都不小于3 Hz，以及表2数据表明4个
糖基为2个β-D-吡喃葡萄糖和2个β-D-吡喃木糖[8～10]。母核碳信
号个数为 24（部分重叠），大于 15，且多数信号成对出现，提示
分子中可能含有 2个黄酮单元，或者是 2个化合物的复合物。
据HMBC糖端基H与母核C-6、C-8位的远程相关，确定了4个
糖基分别连在母核上的 6，8位；结合HMQC，1H-NMR确定了
C-5、C-7、C-4′位有-OH取代，C-3位有H。因所有位置均有归
属，2个黄酮单元无处相连，判断其为一对同分异构体复合
物。这个判断经质谱得到了证实：HR ESI-MS在 300～1 300
分子量范围内只显示一个准分子离子峰（m/z 563.1 395[M-H]－，
计算值 563.1 401），证实了该晶体是一对分子式为 C26H28O14
（Ω＝13）的同分异构体，确定其为芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄
糖-8-C-β-D-吡喃木糖苷和芹菜素-6-C-β-D-吡喃木糖-8-C-β-D-
吡喃葡萄糖苷的复合物。化合物结构式及HMBC相关性表达
见图1。
表 1 化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的 1H-NMR数据（600 MHz，（J）Hz
DMSO-d6）
Tab 1 1H-NMR data of compoundⅠ、Ⅱ、Ⅲ（600 MHz，（J）
Hz，DMSO-d6）
H
3
2′，6′
3′，5′
1″
2″
3″
4″
5″
6″
1′′
2′′
3′′
4′′
5′′
6′′
OH-5
OH-7
OH-4′
Ⅰ
6.82（s）
8.03（2H，d，7.8）
6.90（2H，d，7.8）
4.81（d，10.8）
3.48
3.28
3.38
3.25
3.46，3.72
4.76（d，10.2）
3.86
3.39
3.36
3.26
3.59，3.54
13.71
9.37
10.38
Ⅱ
6.79（s）
7.94（2H，d，8.4）
6.92（2H，d，8.4）
4.55（d，9.6）
3.86
3.19
3.50
3.26
3.50，3.72
5.02（d，9.0）
3.40
3.16
3.35
3.18，3.18
13.76
9.37
10.36
Ⅲ
6.80（s）
8.02（2H，d，8.4）
6.89（2H，d，8.4）
4.65（d，9.0）
3.67
3.26
3.35
3.06，3.06
4.74（d，9.6）
3.75
3.40
3.35
3.48
3.67，3.67
13.74
9.24
10.36
4 化合物抑制环氧化酶（COX-2）活性测试
选择化合物Ⅰ进行抑制COX-2的活性测试。参照文献方
表2 化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的 13C-NMR数据（150 MHz，DMSO-d6）
Tab 2 13C-NMR data of compoundⅠ、Ⅱ、Ⅲ（150 MHz，
DMSO-d6）
C
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1′
2′，6′
3′，5′
4′
1″
2″
3″
4″
5″
6″
1′′
2′′
3′′
4′′
5′′
6′′
Ⅰ
163.9
102.5
182.2
158.5
107.4
160.7
105.2
154.9
103.8
121.4
128.9
115.7
161.1
73.9
71.8
78.7
70.4
81.8
61.2
73.2
70.8
77.7
68.9
80.8
59.7
Ⅱ
163.7
102.5
182.4
160.8
109.3
161.6
102.8
153.7
103.3
121.4
128.8
115.9
161.2
73.9
70.9
78.5
69.5
81.9
61.2
75.2
72.3
79.3
69.9
70.3
Ⅲ
164.0
102.6
182.4
159.1
107.9
160.8
105.2
155.1
103.9
121.5
129.1
115.8
161.2
74.9
71.3
78.8
69.9
70.3
73.6
70.5
77.8
68.8
81.1
59.7
··623
China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 7 中国药房 2012年第23卷第7期
法[11]，将化合物Ⅰ作用于培养的人结肠癌细胞（HT-29），配成不
同浓度的试验组（终浓度分别为 12.5、25.0、50.0 μg·mL－1），同
时设空白对照组、阳性对照姜黄素组（3.125 μg·mL－1）做对比，
继续培养，提取总RNA。采用RT-PCR技术检测药物作用前、
后HT-29细胞中COX-2 mRNA的表达，扩增产物的电泳结果
见图2。以灰度值即COX-2 275bp电泳带与内参β-actin 234 bp
电泳带的吸光度值的比值来反映COX-2 mRNA的相对含量
（计算公式：COX-2 mRNA 灰度值＝COX-2 mRNA 密度/
β-actin mRNA密度）（见表 3）。结果，样品组的灰度值与其浓
度之间呈负相关，相关系数为－0.944，说明化合物Ⅰ可在
mRNA水平抑制HT-29COX-2的表达。
5 讨论
除以上3种黄酮碳苷外，笔者还从江南卷柏正丁醇部位分
离鉴定了一个新的黄酮氧苷：系由上述聚酰胺柱色谱 40％乙
醇洗脱部分，经 Sephadex LH-20柱（甲醇）纯化、结晶而得（51
mg），经理化性质和波谱分析，鉴定为 5-羧甲基-4′-羟基-黄
酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，是首次发现的 5-羧甲基取代的黄
酮类型，这一研究发表在Chinese Chemical Letters[12]；之后，这
一黄酮类型又有新发现：Cao Y[13]等2010年从江南卷柏、申健[6]
从布朗卷柏中分别发现了新化合物：5-羧甲基-4′，7-二羟基黄
酮，Cao Y等[13]还得到了它的乙酯和丁酯，也是2个新化合物并
具抗乙型肝炎病毒活性。申健[6]还分离得到了与江南卷柏相
同的成分：4′-羟基-5-羧甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。至此，
卷柏属中已报道了4种5-羧甲基取代的黄酮类化合物。
参考文献
[ 1 ] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编（上册）[M].北
京：人民卫生出版社，1975：339
[ 2 ] 陈德钊，余竞光.江南卷柏化学成分分析[J].中草药，
1986，17（1）：4.
[ 3 ] Sun CM，Syu WJ，Huang YT，et al.Selective cytotoxicity
of ginkgetin from Selaginella moellendorffii[J]. J Nat
Prod，1997，60（4）：382.
[ 4 ] 史社坡.卷柏化学成分研究[D].郑州：河南中医学院，
2003.
[ 5 ] 朱田密.江南卷柏的生药学研究Ⅱ-黄酮苷类成分的分
离鉴定[D].武汉：湖北中医学院，2008.
[ 6 ] 申 健.布朗卷柏化学成分研究[D].长沙：中南大学，
2010.
[ 7 ] 张嫚丽，李作平，贾湘曼.麻叶荨麻化学成分研究[J].天然
产物研究与开发，2005，17（2）：175.
[ 8 ] Rancon S，Chaboud A，Darbour N，et al. A new C-glyco-
syl xanthone isolated from Davallia solida[J]. Phytochem-
istry，1999，52（8）：1 678.
[ 9 ] Feng J，Yang XW，Wang RF.Bio-assay guided isolation
and identification of α-glucosidase inhibitors from the
leaves of Aquilaria sinensis[J]. Phytochemistry，2011，72
（2-3）：244.
[10] 李晓亮，汪 豪，刘 戈，等.广金钱草的化学成分研究
[J].中药材，2007，30（7）：802.
[11] （美）萨姆布鲁克，（美）拉塞尔著.黄培堂译.分子克隆实
验指南[M].第3版.北京：科学出版社，2002：676.
[12] Zhu TM，Chen KL，Zhou WB. A new flavone glycoside
from Selaginella moellendorffii Hieron.[J].Chin Chem
Lett，2008，19（12）：1 456.
[13] Cao Y，Tan NH，Chen JJ，et al.Bioactive flavones and bi-
flavones from Selaginella moellendorffii Hieron. [J]. Fito-
terapia，2010，81（4）：253.
（收稿日期：2011-04-25 修回日期：2011-06-17）
250 bp
100 bp
250 bp
100 bp β-acin 234 bp
COX-2 275 bp
图2 电泳图
M.DL2000 DNA Marker；1.空白对照组；2.阳性对照姜黄素 3.125 μg·
mL－1；3.化合物Ⅰ 12.5 μg·mL－1；4.化合物Ⅰ 25.0 μg·mL－1；5.化合物Ⅰ
50.0 μg·mL－1
Fig 2 Electrophoretogram
M.DL2000 DNA Marker；1.blank control group；2.curcumin positive
control 3.125 μg·mL－1；3.compoundⅠ 12.5 μg·mL－1；4.compoundⅠ
25.0 μg·mL－1；5.compoundⅠ 50.0 μg·mL－1
M 1 2 3 4 5
表3 灰度值测定结果
Tab 3 Results of gray scale determination
化合物Ⅰ浓度
/μg∙mL－1
0
12.5
25.0
50.0
COX-2 mRNA
灰度值
0.986 9±0.036 9
0.804 4±0.025 9
0.665 8±0.038 3
0.579 5±0.019 8
姜黄素浓度
/μg∙mL－1
0
3.125
COX-2 mRNA
灰度值
0.986 9±0.036 9
0.771 6±0.023 7
Ⅰ Ⅱ Ⅲ
图1 化合物结构式及HMBC相关性表达
Ⅰ.芹菜素-6，8-二-C-β-D-吡喃葡萄糖苷；Ⅱ.芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄
糖-8-C-β-D-吡喃木糖苷；Ⅲ.芹菜素-6-C-β-D-吡喃木糖-8-C-β-D-吡喃
葡萄糖苷
Fig 1 Structures and key correlations for compounds
Ⅰ.6，8-di-C-β-D-glucopyranosylapigenin；Ⅱ.6-C-β-D-glucopyranosyl-
8-C-β-D-xylopyranosylapigenin；Ⅲ.6-C-β-D-xylopyranosyl-8-C-β-D-gl-
ucopyranosylapigenin
··624