全 文 ：收稿日期:2006-11-28;　修订日期:2007-03-11
作者简介:黄加宝(1978-),男(汉族),湖北荆门人 ,现任湖北省荆门市第二人
民医院药剂科药剂师 ,主管药师 ,学士学位,主要从事中西药制剂研究工作.
高效液相色谱法测定拳参中没食子酸的含量
黄加宝 ,林　娜 , 李安珍
(湖北省荆门市第二人民医院　448000)
摘要:目的 制订拳参的含量测定方法。方法 采用高效液相法测定拳参中没食子酸的含量。结果 没食子酸在 0. 050 7
～ 0. 608 4 μg范围内呈良好的线性关系。平均加样回收率为 100. 212%, RSD 为 3. 6%。结论 此方法简便准确 , 专属性
强 , 建立的方法能有效地控制拳参的质量。
关键词:拳参;　没食子酸;　高效液相色谱法
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2007)08-1909-02
　　拳参为蓼科蓼属多年生草本植物拳参 Polygonum bistorta L.
的干燥根茎。始载于《神农本草经》,称为紫参 , 列为中品。该药
材具有清热解毒 , 凉肝熄风 ,消肿止血的功效。临床上用于赤痢 ,
热泻 , 肺热 ,咳嗽 , 痈肿 ,瘰疬 , 口舌生疮 ,吐血 , 衄血 ,痔疮出血 ,毒
蛇咬伤的治疗 [ 1] 。 《中国药典》2005年版拳参项下 , 对其质量控
制确定了性状 、显微鉴别和薄层鉴别。因此 , 本实验利用高效液
相色谱法对有效成分的含量测定进行了研究。 以期完成质量标
准 , 有效 、全面地控制拳参的质量。
拳参的根茎中主要含可水解鞣质 15% ～ 25%, 缩合鞣质 β-
谷甾酸类等。可水解鞣质水解后生成没食子酸 (ga llic acid)和糖
(或多元酚)。没食子酸的化学名:Benzoic ac id, 3, 4, 5 - trihydroxy
- 。分子式:C7H6O5。为针状结晶(无水甲醇或氯仿 ), 熔点 235～ 240℃。结构式如下:
测定鞣质含量的方法很多 , 有氧化还原法 、络合量法 、比色
法 、皮粉法及高效液相色谱法 [ 2] 。 由于鞣质是一种复杂多元酚
混合物 , 不同鞣质组分均同具有多元酚的特性 , 不易分离提取为
单体。在提取分离过程中 , 鞣质可发生氧化 、聚合 、离解等反应而
改变其原有的状态 , 故难以定量。目前多采用测定没食子酸的含
量作为检测指标。没食子酸含量测定方法有薄层层析—紫外分
光光度法 、薄层扫描法 、紫外分光光度法 、高效液相色谱法等。根
据这些方法操作复杂性 、测定的准确性 、重现性和精密度 ,本实验
选用高效液相色谱法来测定拳参中游离没食子酸的含量。此方
法简便 、快速 ,结果准确 , 重现性好。
1　仪器与试药
Ag ilent 1100 se rie s美国 AG ILENT公司:Hypersil ODS(25
μm , 4. 6 mm ×250 mm)色谱柱;TG332A微量分析天平仪 , 湘仪天
平仪器厂;0. 45μm微孔滤膜。
没食子酸对照品 , 中国药品生物制品检定所 (批号 0831 -
9501);甲醇为色谱纯;磷酸为分析纯;重蒸馏水。药材为市售 ,产
地英山 、麻城。
2　方法与结果
2. 1　提取条件的选择实验
2. 1. 1　溶剂的选择 鞣质极性强 , 可溶于有机溶剂中 ,不溶于极
性小的溶剂 ,微量水的存在可增大鞣质的溶解度 [ 3] 。根据其特
征 , 本实验在提取没食子酸的过程中 , 采用极性大的溶剂甲醇。
2. 1. 2　溶剂浓度选择实验 称取相同量的样品 , 用不同浓度甲醇
( 100%, 70%, 50%)回流提取 2 h,按照实验选择的色谱条件测
定没食子酸含量。结果提取的含量分别为 2. 61, 2. 52, 2. 66 m g /
g。 50%甲醇提取的含量最高。 因此 , 本实验选择 50%甲醇
溶液。
2. 1. 3　提取方式选择实验 称取相同量的样品 , 加入 50%甲醇
溶液 , 通过加热回流 2 h, 温浸(40 ～ 50℃)4 h, 超声处理 20 m in3
种不同方式提取 , 按照实验选择的色谱条件测得结果分别为
2. 748, 2. 553, 2. 749 mg /g。根据实验结果和实际操作情况 ,本实
验采用超声提取方法。
2. 1. 4　超声提取时间实验 称取相同量的样品 , 加 50%甲醇溶
液进行不同时间(15, 20, 30, 40 m in)超声提取。测得结果分别为
3. 14, 3. 04, 3. 50, 2. 92 mg /g。超声 30 m in后含量达到最高 ,且稳
定。因此 , 本实验选择超声处理 30 m in。
2. 1. 5　色谱条件选择实验 通过紫外分光光度仪测没食子酸的
最大吸收波长为 261 nm, 故选择测定波长为 261 nm。见图 1。采
用 C18柱 , 以甲醇-水-乙腈-磷酸溶液不同比例的筛选 , 用甲醇 -水
-磷酸 (2∶98∶0. 05)的流动相时 , 测得没食子酸的色谱峰形对
称 , 分离效果好。因此 , 选择该比例的流动相进行测定。柱温的
高低和流速的好慢 , 可直接影响分离效果 , 经试验选择柱温为
30℃, 流速为 1. 000 m l /m in。 在此色谱条件下 , 没食子酸色谱峰
的对称性 、分离度均能满足测定要求。色谱图见 2 ～ 3。
图 1　没食子酸的紫外图谱
图 2　没食子酸对照品色谱图
2. 2　对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品(经五氧化
二磷干燥恒重)15. 84 m g, 置 25 m l的量瓶中 ,加 50%甲醇稀释至
刻度。精密吸取上述溶液 2 m l, 置 25 m l量瓶中加 50%甲醇稀释
1909
LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 8 时珍国医国药 2007年第 18卷第 8期
至刻度 , 摇匀。
2. 3　供试品溶液的制备 取本品粉末 (过 2号筛)0. 5 g, 精密稳
定 , 置 50 m l量瓶中 , 加 50%甲醇 30 m l,超声处理 30 m in, 用 50%
甲醇稀释至刻度 , 摇匀。用 0. 45 μm微孔滤膜滤过 , 即得。
图 3　样品拳参的色谱图
2. 4　线性关系考察 精密吸取上述没食子酸对照品溶液 1, 2, 3,
6, 9和 12 μl, 按上述色谱条件进行色谱分析 , 测定色谱峰面积。
以对照品进样量为横坐标 , 峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲线。结
果见表 1。
表 1　线性关系考察
进样量 /μg 峰面积
0. 050 7 108. 1
0. 101 4 215. 6
0. 152 1 323. 9
0. 304 2 650. 5
0. 456 3 978. 9
0. 608 4 1 304. 6
　　计算回归方程:Y =2147. 6X - 1. 92, r=0. 999 9
结果表明 , 没食子酸在 0. 050 7 ～ 0. 608 4 μg之间呈良好的
线性关系。
2. 5　精密度实验 取本品粉末(过 2号筛), 按溶液制备项下提
取 , 按上述色谱条件重复进样 5次 , 测得色谱峰面积。 结果见
表 2。
表 2　精密度实验
进样次数 峰面积
1 206. 9
2 208. 8
3 210. 3
4 211. 7
5 212. 5
　　均值 χ=210. 0, RSD =1. 1%
结果表明 , 本方法精密度良好。
2. 6　稳定性实验 取供试品溶液 ,照上述色谱条件 ,间隔不同时
间进行测定 , 共测定 5次。结果见表 3。
表 3　稳定性实验
时间 t /m in 峰面积
0 195. 1
40 196. 0
80 196. 0
120 195. 9
160 196. 7
　　结果表明 ,样品溶液在测定的 160 m in RSD 为 0. 3%, 方法稳
定 , 可满足实验要求。
2. 7　重现性实验 取同一批号本品粉末(过 2号筛)5份 ,按溶液
制备项下提取 , 按上述色谱条件进行含量测定 , 并对所得数据进
行处理 。结果见表 4。
表 4　重现性实验
峰面积 含量 C /mg kg- 1
226. 3 3. 05
239. 7 3. 23
228. 2 3. 12
223. 1 3. 06
229. 3 3. 14
　　χ=3. 12 RSD =2. 3%
结果表明 ,方法的重现性良好。
2. 8　加样回收率实验 精密称取已知含量的本品粉末 (过 2号
筛)0. 5 g共 5份 , 置 50 m l的量瓶中 , 精密加入没食子酸的对照
品 1. 267 2 m g, 分别按供试品溶液制备项下提取 ,按上述色谱条
件进行测定并进行数据处理。结果见表 5。
表 5　回收率实验
取品量
m /g
样品没食子酸
的含量m /mg
加入没食子
酸量m /mg
测得没食子
酸量m /mg
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
0. 506 0 1. 578 7 1. 267 2 2. 804 2 96. 71
0. 502 8 1. 568 7 1. 267 2 2. 871 6 102. 82
0. 502 7 1. 568 4 1. 267 2 2. 875 3 103. 13 100. 212 3. 6
0. 501 3 1. 564 1 1. 267 2 2. 863 4 102. 53
0. 502 9 1. 569 0 1. 267 1 2. 783 9 95. 87
结果表明 ,平均回收率为 100. 2%, RSD 为 3. 6%。
2. 9　样品测定 精密称定不同批号本品粉末 (过 2号筛)0. 5 g,
按照供试品溶液制备法制备 , 在上述色谱条件下 , 精密吸取对照
品溶液和样品溶液 10 μl注入高效液相色谱仪 ,依法测定。结果
见表 6。
表 6　样品测定 m g g- 1
来源 含量
湖北省麻城市人民医院　　　　　　 0. 85
湖北省宜昌中医院　　　　　　　　 0. 27
湖北省中药材公司 ,产地麻城　　　 2. 0
湖北九州通医药有限公司,产地英山 1. 19
3　讨论
目前 ,对拳参的化学成分研究文献报道的很少。而在现行的
拳参质量标准中 ,尚未确定拳参含量测定方法。因此 , 本实验研
究从拳参中提取出没食子酸 ,通过实验表明没食子酸为拳参中可
控成分之一 , 故将其作为药材中的指标性成分进行含量测定 , 有
效地控制拳参的质量。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会. 中国药典 , Ⅰ 部 [ S] . 北京:化学工业出版社 ,
2000:239.
[ 2 ] 　李永吉.中药质量检验常规 [M ] .北京:北京医科大学中国协和医
科大学联合出版社 , 1993:496.
1910
时珍国医国药 2007年第 18卷第 8期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M ED ICA RESEARCH 2007VOL. 18 NO. 8