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高效液相色谱法测定檵木叶中没食子酸的含量
刘英慧1,2,陈晓玲3,黄琪1,2,雷鹏1,2*,梁敏红1 (1.中南大学湘雅医院药剂科,长沙 410008;2.中南大学药
学院,长沙 410013;3.江苏省军区机关医院,南京 210009)
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定檵木叶中没食子酸的含量。方法 以 Diamonsil C18 (4.6mm×250mm,
5μm)色谱柱为分析柱;甲醇-水-0.1%磷酸 (12∶78∶10)为流动相;流速为1.0mL·min
-1;检测波长为273nm;
柱温:30℃;进样量10μL。结果 没食子酸进样量在0.039 8~0.498 0μg呈现良好的线性关系(r=0.999 8),平
均回收率为99.7%,RSD为2.7%。结论 本法操作简便、准确,具有良好的重现性,可用于檵木叶中没食子酸
的含量测定,为檵木叶药材的合理应用及质量控制奠定了基础。
关键词:高效液相色谱法;檵木叶;没食子酸
中图分类号:R927.2,R284.1 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2012)01-0033-03
doi:10.3969/j.issn.1672-2981.2012.01.012
Content determination of galic acid in FoliumLoropetaliby HPLC
LIU Ying-hui 1,2,CHEN Xiao-ling3,HUANG Qi 1,2,LEI Peng1,2*,LIANG Min-hong1 (1.Department of Phar-
macy,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha 410008;2.College of Pharmaceutical Sciences,
Central South University,Changsha410013;3.Authority Hospital of Jiangsu Military Region,Nanjing210009)
Abstract:Objective To develop an HPLC method to determine the content of galic acid in Folium Loropetal.Meth-
ods The Diamonsil C18reversed-phase column (4.6mm×250mm,5μm)was used with the mobile phase of acetoni-
trile-water-0.1%phosphoric acid(12∶78∶10)at 1.0mL·min-1,the UV detection wavelength at 273nm,the col-
umn temperature 30℃and the injection volume 10μL.Results Galic acid had a good linearity at 0.039 8-0.498 0μg
(r=0.999 8),the average recovery of galic acid was 99.7%,RSD=2.7%.Conclusion The developed method is
simple,accurate,and specific,which is suitable for the quantitative determination of galic acid in Folium Loropeta-
li.
Key words:HPLC;Folium Loropetali;galic acid
檵木 (Loropetalum chinense (R.Br.)Oliv)为金缕梅
科 (Hamamelidaceae)常绿灌木,有时为小乔木,别名坚
漆、纸茉花、罗脂木等,味苦涩,性平。最早以檵木花之名
记载于 《植物名实图考》,谓:“一名纸末花,江西、湖南山
岗多有之”。檵木叶 (Folium Loropetali)为檵木的干燥叶,
为民间常用草药,收载于中国药典1977年版一部及湖南省
中药材标准2009年版[1-2],具有清热解毒、收敛止血的功
效,用于治疗烧、烫伤,外伤出血,吐血,崩漏,腹泻[3-4]。
文献对檵木化学成分的研究并不多见,这些化合物多为
极性较大的化合物如鞣质、有机酸及黄酮类[5-7]等成分,其
中没食子酸具有抗菌、止血、抗病毒和抗肿瘤作用,对吗啉
加亚硝酸钠所致的小鼠肺腺瘤有强抑制作用[8-9]。但目前为
止尚未见檵木叶中没食子酸含量测定的相关报道,为有效控
制檵木叶的质量,为檵木叶中没食子酸的含量测定提供一个
准确、简便、有效的方法,本文建立高效液相色谱法测定没
食子酸的含量。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪 (配G1311A四元梯度泵、
G1313A自动进样器、G1315A二极管阵列检测器、Agilent
化学工作站,美国安捷伦科技有限公司);AG285分析天平
(瑞士 Mettler公司,精密度:十万分之一)。
没食子酸对照品 (中国药品生物制品检定所,批号:
110831-200302);甲醇为色谱纯;水为纯净水;其余试剂均
为分析纯。檵木叶为湖南自采药材,共收集了5个批号的檵
木叶药材样品:2009081101,采自湖南浏阳;2009081301,
2009081302,采自湖南望城;2009102501,采自湖南宁乡;
2009103003,采自湖南澧县。经中南大学湘雅医院药剂科刘
韶副教授鉴定为金缕梅科植物檵木 [Loropetalum chinense
(R.Rr.)Oliv.]和红花檵木 [L.chinense(R.Br.)Oliv.
var.rubrumYieh]的干燥叶。
作者简介:刘英慧,女,硕士研究生,主要从事中药制剂研究,Tel:13755024134,E-mail:12liuhui@163.com *通讯作者:雷鹏,
男,硕士生导师,主要从事中药制剂及质量标准研究,Tel:13574115085,E-mail:lp7222003@163.com
中南药学2012年1月第10卷第1期 Central South Pharmacy.January 2012,Vol.10No.1
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2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性实验
色谱柱:Diamonsil C18柱 (4.6mm×250mm,5μm);
流动相:甲醇-水-0.1%磷酸溶液 (12∶78∶10);流速:
1.0mL·min-1;检测波长:273nm;柱温:30℃;进样
量:10μL。在上述色谱条件下,没食子酸理论塔板数≥
5 000,对照品和样品的色谱图见图1。
图1 对照品 (A)和供试品 (B)HPLC图
Fig 1 HPLC chromatogram of reference substance(A)and sample
(B)
1.没食子酸 (galic acid)
2.2 对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品9.96mg,置于100mL量瓶
中,加甲醇溶液将其溶解,定容配制成没食子酸(99.6μg·
mL-1)对照品储备液,精密量取储备液5mL,置于25mL
容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,得到浓度为19.92μg·
mL-1的对照品溶液,放冰箱冷藏保存,备用。
2.3 供试品溶液的制备
檵木叶粉碎,称取粉末约0.2g,精密称定,置100mL
圆底烧瓶中,加入3mol·L-1盐酸溶液50mL,称定重量,
水浴加热回流6h,冷却后称定,加3mol·L-1盐酸至原来
重量,过滤,精密量取续滤液1mL,置于10mL容量瓶中,
加甲醇稀释至刻度线,摇匀,0.45μm 微孔滤膜滤过,即
得。
2.4 线性关系的考察
分别精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20、25μL,
注入液相色谱仪,记录峰面积,以峰面积Y (A)为纵坐
标,没食子酸进样量X (μg)为横坐标绘制标准曲线,回归
方程为:Y=2.715×103 X+ 8.144,r=0.999 8。结果表
明,没食子酸在0.039 8~0.498 0μg具有良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10μL,重复进样6次,记录峰面
积,测得的平均峰面积为557.48,RSD 为1.4%。表明仪
器精密度良好。
2.6 重复性试验
取同一批檵木叶,粉碎,取粉末6份,每份约0.2g,
精密称定,按 “2.3”项下的方法制备样品,以 “2.1”项下
色谱条件进行含量测定,结果平均含量为5.086%,RSD为
2.9%,表明本方法具有较好的重复性。
2.7 稳定性试验
取同一批檵木叶的供试品溶液,按 “2.1”项下色谱条
件测定,分别在0、2、4、6、8、12、18、24h注入液相色
谱仪,测定,记录色谱图,考察峰面积的变化,结果没食子
酸峰面积的RSD为1.5%,表明供试品溶液在24h内稳定
性良好。
2.8 加样回收试验
精密称取没食子酸对照品50.49mg,置于50mL容量
瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制成1.009 8mg·mL-1对照
品溶液。取已知含量 (没食子酸含量为5.086%)的檵木叶
粉末6份,每份0.1g,精密称定,置圆底烧瓶中,分别精
密加入上述对照品溶液5mL (6份),挥干,按 “2.3”项
下方法制备加样溶液,按 “2.1”项下色谱条件测定,计算
回收率,结果见表1。
表1 回收试验测定结果 (n=6)
Tab 1 Recovery of galic acid(n=6)
样品中量
(sample
content)
/mg
加入量
(added
amount)
/mg
测得量
(measured
content)
/mg
回收率
(recovery)
/%
平均
回收率
(average
recovery)
/%
RSD
/%
5.109 5.049 10.273 102.3
5.282 5.049 10.237 98.1
5.257 5.049 10.172 97.4
5.297 5.049 10.206 97.2 99.7 2.7
5.379 5.049 10.410 99.6
5.282 5.049 10.497 103.3
2.9 样品含量的测定
精密吸取对照品溶液与各批次檵木叶供试品溶液各
10μL,按 “2.1”项下色谱条件测定,并计算没食子酸的含
量,结果见表2。
表2 样品没食子酸含量测定结果 (n=3)
Tab 2 Content determination of galic acid(n=3)
批号 (Lot No.)没食子酸 (galic acid)/% RSD/%
2009081101 2.492 2.3
2009081301 3.619 2.1
2009081302 5.086 2.9
2009102501 3.113 2.3
2009103003 3.990 2.5
3 讨论
3.1 流动相的选择
参考中国药典2010年版一部以及文献[10-12],结合实验
实际情况,对甲醇-水、甲醇-磷酸、乙腈-水、乙腈-磷酸等
系统进行了考察,结果表明用甲醇-水-0.1%磷酸溶液(12∶
78∶10)作为流动相,得到的色谱峰峰形尖锐,分离效果
好,且基线稳定,因此确定其为流动相。
3.2 供试品溶液制备方法的选择
实验中对檵木叶中没食子酸成分分别做了超声提取法和
回流提取法的提取效果比较,发现采用酸回流提取法能获得
较高的提取效率,且此方法有较好的稳定性和重复性。随后
在既定的回流时间 (4h)下比较用不同浓度的盐酸回流提
取檵木叶中没食子酸的提取效率,得出回流的盐酸浓度为
3mol·L-1时,没食子酸成分提取的含量最高。最后在提取
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时间 (1、2、4、6、8和10h)上做考察,综合考虑,最终
确定用3mol·L-1盐酸溶液回流提取6h,此时檵木叶中的
没食子酸成分提取的最完全且成分没有被破坏。
3.3 含量测定结果分析
本实验对湖南5个不同产地的檵木叶中药效成分没食子
酸进行含量测定发现檵木叶中没食子酸的含量较高,5批药
材含量为2.492%~5.086%,平均含量为3.660%。但不同
产地、不同来源的檵木叶中没食子酸含量存在一定的差异,
这可能由于各批药材处于不同的生态环境,受到温度、湿
度、土质、光照等因素影响所造成的。没食子酸为檵木叶中
发挥止血作用的物质基础,本实验通过建立其含量测定方
法,从而为檵木叶质量标准的制定提供依据。
参考文献
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(收稿日期:2011-09-16;修回日期:2011-10-08)
复方甲硝唑泡腾栓的制备及质量控制
成丹 (湖南省湘乡市人民医院,湖南 湘潭 411400)
摘要:目的 制备复方甲硝唑泡腾栓并建立质量标准。方法 以甲硝唑、诺氟沙星、醋酸泼尼松为主药制备复方甲硝
唑泡腾栓,对其进行性状、重量差异、融变时限、发泡量、卫生学检查,并采用高效液相色谱法测定甲硝唑和诺氟
沙星的含量,色谱条件为:色谱柱:Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-0.03mol·L
-1
磷酸溶液 (用三乙胺调节pH 3.0)(15∶85),流速:1.0mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:278nm。结果 所
制栓剂的鉴别、检查等结果均符合中国药典2010年版二部相应规定;甲硝唑和诺氟沙星检测浓度线性范围分别为
32~160μg·mL
-1 (r=0.999 9)、16~80μg·mL
-1 (r=0.999 8);平均回收率分别为97.4% (RSD=1.4%),
97.3% (RSD=0.87%)。结论 该制备工艺简单,含量测定方法操作简便,结果准确可靠,可用于复方甲硝唑泡
腾栓的质量控制。
关键词:甲硝唑;诺氟沙星;泡腾栓;高效液相色谱法;质量控制
中图分类号:R944.2,R927.2 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2012)01-0035-04
doi:10.3969/j.issn.1672-2981.2012.01.013
Preparation and quality control of compound
metronidazole effervescent suppository
CHENG Dan (People’s Hospital of Xiangxiang,Xiangtan Hunan 411400)
Abstract:Objective To prepare compound metronidazole effervescent suppository,and to establish its quality control
standard.Methods Compound metronidazole effervescent suppository was prepared with metronidazole,norfloxacin,
and prednisone acetate as the main components.Their character,weight variation,melting time,foaming output and
作者简介:成丹,女,副主任药师,主要从事医院药学工作,Tel:(0731)56772476。
中南药学2012年1月第10卷第1期 Central South Pharmacy.January 2012,Vol.10No.1