全 文 ：湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
2013 年 4 月第 15 卷第 2 期
April 2013，Vol. 15，No. 2
作者简介:黄传奇(1986 －) ，男，湖北中医药大学药学院 2010 级硕士研究生，研究方向:中药品种鉴定和品质评价。
北美圆柏与侧柏挥发性成分体外抑菌活性的比较
黄传奇1，张林碧1，章习哲2，雷咪1，严何1
(1．湖北中医药大学药学院，湖北 武汉 430065;2．湖北中医药大学医学检验学院，湖北 武汉 430065)
摘要:目的 对北美圆柏与侧柏挥发性成分的体外抑菌活性进行对比分析。方法 采用《中国药典》附录ⅩD 甲
法提取二者的挥发性成分，测定其出油率。以滤纸片扩散法进行抗菌试验，再以倍半稀释法测定二者挥发性成分的最
低抑菌浓度。结果 最低抑菌浓度实验中，北美圆柏挥发性成分对大肠杆菌、沙门氏菌和酿酒酵母的抑菌活性优于侧
柏，对金黄色葡萄球菌的抑菌活性与侧柏相当，对黑曲霉的抑菌活性不及侧柏。结论 北美圆柏和侧柏挥发性成分对
常见细菌有较强抑菌活性。
关键词:北美圆柏;侧柏;挥发性成分;抑菌活性
中图分类号:R284 文献标识码:A doi: 10. 3969 / j. issn. 1008 － 987x. 2013. 02. 15
Vitro Antibacterial Activity Comparasion of Volatile Components
between Sabina Virginiana and Platycladus Orientalis
HUANG Chuanqi1，ZHANG Linbi1，ZHANG Xizhe2，LEI Mi1，YAN He1
(1． College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065;
2． College of Medical Technology，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065)
Abstract:Objective To make a comparative analysis on the vitro antibacterial activity of the volatile components between Sabina vir-
giniana and Platycladus orientalis． Method Extracted the volatile components by the means of CP Chinese Appendix ⅩD，and measured
their oil yield． The antibacterial activity was measured by filter － papered disc diffusion method，and the minimum inhibitory concentrations
were evaluated by half times dilution method． Result The antibacterial activity on Escherichia coli，Salmonella and Saccharomyces cerevi-
siae of S． virginiana were exceeded to be greater than P． orientalis，were similar to P． orientalis on Staphyloccocus aureus，while less effec-
tive on Aspergillus niger． Conclusion The volatile components of S． virginiana and P． orientalis have strong antibacterial activity against
such common bacteria．
Key words:Sabina virginiana;Platycladus orientalis;volatile components;antibacterial activity
北美圆柏(Sabina virginiana Linn． Ant． Cupress． Gatt．)又名
铅笔柏，是柏科圆柏属的常绿乔木，原产北美，我国自 20 世纪中
期广泛引种，其生长情况较原产地更好［1］，在园林绿化中有逐
步取代侧柏的趋势［2］。据国外文献报道，北美圆柏的挥发性成
分已应用于抗真菌、杀虫、香料、防腐等方面［3］。但其对金黄色
葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、黑曲霉和酿酒酵母菌的体外抑
菌活性研究尚未见报道。
侧柏(Platycladus orientalis Linn． Franco)是柏科侧柏属的
常绿乔木［1］，广泛分布和栽培于全国各省，是优良的药用和园
林绿化树种［4］。侧柏叶为常用中药，具有凉血止血、清肺止咳
的功效。其挥发性成分 α －杜松烯醇对变异链球菌具有较强的
抗菌性［5 － 8］;侧柏精油对大肠杆菌、耐新青霉素金黄色葡萄球菌
有抑制和杀灭作用［8］。但其与北美圆柏对金黄色葡萄球菌、大
肠杆菌、沙门氏菌、黑曲霉和酿酒酵母菌的体外抑菌活性的对比
研究尚未见报道。
本实验对北美圆柏和侧柏的挥发性成分进行了体外抑菌
活性研究，可为北美圆柏和侧柏资源的利用提供依据。
1 材料
1． 1 仪器
BCL － 1000A型超净工作台(北京亚泰科隆仪器技术有限
公司) ，303 恒温培养箱(上海浦东荣丰科学仪器有限公司) ，
LDZM －80KCS型高压蒸汽灭菌器(上海申安仪器有限公司) ，
超纯水机(上海和泰仪器有限公司) ，TP602 电子天平(德国赛
多利斯公司) ，玻璃平板培养皿、容量瓶、锥形瓶、烧杯等。
1． 2 试药
北美圆柏枝叶(2011 年 11 月 25 日采于湖北武汉黄鹤楼公
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湖北中医药大学学报
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园) ，侧柏叶(2011 年 11 月 26 日采于湖北武汉洪山公园) ，吐温
－ 80(化学纯，上海大众药业有限公司) ，牛肉膏蛋白胨培养基
(青岛日水生物技术有限公司) ，马铃薯葡萄糖培养基(青岛日
水生物技术有限公司)。金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus au-
reus) ，大肠杆菌(Escherichia coli) ，沙门氏菌(Salmonella)、黑曲
霉(Aspergillus niger)和酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae) (均
购自广州微生物研究所)。所有实验器材、药品均经高压灭菌
或紫外灭菌。
2 方法
2． 1 挥发性成分的提取
按《中国药典》2010 版附录ⅩD 甲法提取北美圆柏和侧柏
的挥发性成分。称取过 20 目筛的北美圆柏和侧柏粉末各
500g，分别投入 5L 圆底烧瓶中并注入 2500mL 去离子水，加沸
石适量，安装挥发油提取器，浸泡 2h 后保持微沸 8h，经无水硫
酸钠干燥分别得挥发性成分 3． 60mL和 1． 95mL，北美圆柏出油
率为 0. 72%(mL /g) ，侧柏出油率为 0. 39%(mL /g)。将所得挥
发性成分密封储藏于 4℃冰箱中备用。
2． 2 药敏滤纸片的制作
取 300μL北美圆柏和侧柏挥发性成分，分别与 100μL吐温
－ 80 混合，充分振摇，加去离子水定容至 5mL;再取 6%四环素
溶液和 2%吐温 － 80 各 5mL。向以上 4 种溶液中投入 20 片直
径 6mm滤纸片，浸泡 24h备用。
2． 3 梯度浓度挥发性成分溶液的配制
取 120μL北美圆柏挥发性成分和 40μL 吐温 － 80 充分振
摇，加去离子水定容至 2mL，加入 1 号试管，再向 1 － 13 号试管
中各加入 2mL MH 肉汤。1 号试管混匀，取混合液 2mL 加入 2
号试管，2 号试管混匀后再取 2mL混合液加入 3 号试管，依此法
操作。加至 11号试管且混匀后取混合液 2mL弃去。1 － 11 号试
管北美圆柏挥发性成分浓度依次为:3． 0%、1． 5%、0. 75%、
0. 38%、0. 19%、0. 095%、0. 048%、0. 024%、0. 012%、0. 006%、
0. 003%。12试管加入 2mL 6%四环素溶液作为阳性对照基液，
13号试管加入 2mL 2%吐温 －80 溶液作为阴性对照基液。侧柏
的梯度浓度挥发性成分溶液的制备同北美圆柏。
2． 4 药敏纸片抑菌效果的测定［9］
分别取以上菌液 100μL均匀涂布于琼脂平板培养基上(金
黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌用 MH琼脂;黑曲霉和酿酒
酵母用马铃薯葡萄糖琼脂) ，将药敏纸片贴在平板中间。金黄
色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌 35℃培养 24h，黑曲霉和酿酒
酵母 25℃培养 72h。每组重复 3 次试验，其抑菌圈平均直径作
为最终结果。
2． 5 最低抑菌浓度( MIC) 的测定
采用平板涂布法［10］。在 2． 3 步骤的基础上，向各组 1 － 13
号试管中均加入 1 × 107CFU /mL 菌液 2mL，混匀后取 100μL 均
匀涂布到适宜的琼脂培养基上(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和
沙门氏菌用 MH琼脂培养基;黑曲霉和酿酒酵母用马铃薯葡萄糖
琼脂培养基)。金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌 35℃培养
24h，黑曲霉和酿酒酵母 25℃培养 72h。观察各平板中菌落总数，
完全没有生长的最低挥发性成分浓度即为其最低抑菌浓度。
3 结果
3． 1 不同药敏纸片的平均抑菌圈直径
北美圆柏油和侧柏油对金黄色葡萄球菌、黑曲霉、酿酒酵母
菌的抑菌效果均显著好于 6%四环素(P ＜ 0. 01) ，且侧柏油显著
强于北美圆柏油(P ＜ 0. 01)。对大肠杆菌的抑菌效果北美圆柏
油与 6%四环素无显著性差异(P ＞ 0. 05) ，均优于侧柏油(P ＜
0. 01)。在对沙门氏菌的抑菌活性上，6%四环素显著好于北美
圆柏油、侧柏油两组(P ＜ 0. 01) ，北美圆柏油与侧柏油比较无显
著性差异(P ＞ 0. 05)。不同药敏纸片的平均抑菌圈直径结果详
见表 1。
表 1 不同药敏纸片的平均抑菌圈直径 (mm)
组别
金黄色
葡萄球菌
大肠杆菌 沙门氏菌 黑曲霉 酿酒酵母
北美圆柏油 21． 85＊＊△△ 15． 84△△ 10. 43＊＊ 14． 63＊＊△△ 11． 17＊＊△△
侧柏油 25． 07＊＊ 9． 35 11． 06＊＊ 20. 13＊＊ 15． 22＊＊
6%四环素 17． 74 15． 53△△ 14． 56 8． 56 8． 04
与 6%四环素比较，＊＊P ＜ 0. 01;与侧柏油比较，△△P ＜ 0. 01。
3． 2 最低抑菌浓度
表 2 各组菌落总数 (个)
组别
试管
编号
金黄色
葡萄球菌
大肠杆菌 沙门氏菌 黑曲霉 酿酒酵母
北美圆柏油
侧柏油
3%四环素
1%吐温 －80
1 0 0 0 0 0
2 0 0 0 0 0
3 0 0 9 5 3
4 0 7 19 12 9
5 12 19 44 32 22
6 35 37 76 91 57
7 77 83 157 不可计数 103
8 181 164 不可计数 不可计数 不可计数
9 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
10 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
11 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
1 0 0 0 0 0
2 0 4 13 0 21
3 0 10 36 0 63
4 0 23 73 不可计数 不可计数
5 3 50 166 不可计数 不可计数
6 9 141 不可计数 不可计数 不可计数
7 33 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
8 82 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
9 197 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
10 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
11 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
12 14 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
13 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数 不可计数
由表 2 可知:北美圆柏和侧柏挥发性成分对金黄色葡萄球
菌的最低抑菌浓度均为 0. 38%，对大肠杆菌的最低抑菌浓度分
别为 0. 75%和 3． 0%，对沙门氏菌的最低抑菌浓度分别为 1． 5%
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和 3． 0%，对黑曲霉的最低抑菌浓度分别为 1． 5%和 0. 75%，对
酿酒酵母的最低抑菌浓度分别为 1． 5%和 3． 0%。综上所述:北
美圆柏挥发性成分对大肠杆菌、沙门氏菌和酿酒酵母的抑菌活
性均强于侧柏，对金黄色葡萄球菌的抑菌活性与侧柏相当，对
黑曲霉的抑菌活性不及侧柏。
4 讨论
本实验以滤纸片扩散法对北美圆柏和侧柏挥发性成分进
行了抗菌试验，再以倍半稀释法测定二者挥发性成分的最低抑
菌浓度，结果表明:在同一浓度下，北美圆柏和侧柏挥发性成分
相对于四环素有较明显优势。最低抑菌浓度实验发现，北美圆
柏挥发性成分抗大肠杆菌、沙门氏菌和酿酒酵母的作用强于侧
柏，但在药敏纸片法中侧柏抑菌圈直径略大于北美圆柏，其综
合抑菌能力各有所长。
近年来北美圆柏在国内的种植日益广泛，因其耐荫、防虫、
耐修剪的特征有逐步取代侧柏的趋势，且从本实验数据来看，
北美圆柏出油率是侧柏的 1． 85 倍，故对北美圆柏的研究应纳入
绿色中药的发展计划，加快对北美圆柏的成分和药理研究，使
其尽快得到合理的开发和应用。
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－ 2784．
(收稿日期:2012 －12 －27 编辑:林飞)
【理论探讨】
基本项目:国家自然科学基金项目(编号:81273864) ;湖北省教育厅科研项目(编号:Q20121607)。
作者简介:沈峰(1976 －) ，男，博士，讲师，主治医师，研究方向:针灸防治脑病。
通讯作者:孙国杰(1938 －) ，男，教授，博士研究生导师，研究方向:针灸防治脑病。
针灸从益肾调督论治老年痴呆探讨
沈峰，孙国杰，杜艳军，孔立红，马骏，孟培燕，齐凤军
(湖北中医药大学针灸骨伤学院，湖北 武汉 430061)
关键词:阿尔茨海默病;益肾调督; 针灸
中图分类号:R245． 9 文献标识码:A doi:10. 3969 / j. issn. 1008 － 987x. 2013. 02. 16
阿尔茨海默病(Alzheimers disease，AD) ，又称老年性痴呆，
是发生于老年前期或老年期，以进行性记忆等认知障碍为主要
症状，同时伴有精神行为异常的神经退行性疾病。AD 已成为
全球继心血管病、肿瘤和卒中之后第 4 位致死病因，在我国有日
益上升的趋势，治疗 AD 尚无特效药物。中医学对 AD 有类似
记载，散见于健忘、善忘、痴呆、呆痴、呆病等病症中，属于“老年
呆病”范畴［1］。近年来，针灸疗法防治 AD 的研究取得很大进
展，对比发现针刺疗效不亚于中西药物，甚至在某些方面，如改
善患者 β －淀粉样蛋白及时空定向、计算能力上有优势［2 － 3］。
笔者结合该病的病位、病机、证候特征等对益肾调督论治该病的
针灸治疗原理作一简要探讨。
1 肾虚为 AD之本，治宜益肾
临床上，AD 起病缓慢，除学习、记忆等认知障碍的症状比
较明显以外，四诊八纲见证并不十分突出，辨证论治难度较大。
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