全 文 ： Ⅰ型超敏反应是指已致敏的机体再次接触相同
抗原后在数分钟内所发生的超敏反应 。其中 IgE抗
体是介导 Ⅰ型超敏反应的主要抗体 。 Ⅰ型超敏反应
涉及皮肤 、呼吸道 、耳鼻咽喉 、眼 、消化道 、血液系统 、
神经系统和循环系统等 。常见病症有花粉症 、支气
管哮喘 、特应性皮炎和食物过敏等症 。复方牛黄注
射液抗过敏药效经本实验研究显示:复方牛黄注射
液及其拆方对卵蛋白致敏豚鼠离体回肠具有显著抑
制过敏性收缩作用 ,其中复方牛黄注射液的作用强
度成一定的量效关系。与中药阳性药清开灵注射液
比较 ,复方牛黄注射液各剂量组的作用强度均无统
计学差异(P>0.05)。提示:复方牛黄注射液能阻
断抗原与抗体(通常是 IgE抗体类)在介质释放细
胞上的相互作用 ,从而阻止了释放活性物质 ,减轻或
消除过敏症状 。
外感高热是多种疾病的重要病理过程和临床表
现 ,临床发病率高 ,是急诊科(室)的常见病种。目
前治疗外感高热的方法主要为应用大剂量抗生素和
服用西药退热 ,但抗生素的滥用 ,对病人健康危害甚
大;应用西药退热 ,会出现胃肠刺激症 、体温过低 、休
克 、过敏反应及骨髓抑制等不良反应 。复方牛黄注
射液从安宫牛黄丸中筛选得到一个新的有效成分组
方。经实验证明复方牛黄注射液具有解热 、抗炎 、抗
过敏的药理作用。其三种有效成分牛磺酸 、黄芩苷 、
葛根上述三个药理作用方面显示出具有一定的配伍
增效作用 。复方牛黄注射液注射液中剂量组给药剂
量与清开灵注射液组一致 ,两者的解热作用结果未
有统计学差异 ,提示复方牛黄注射液的解热效果与
清开灵相似。清开灵注射液由 9味中药(包括中药
单体成分 2种)组成 ,整个处方包涵的成分复杂 ,配
伍关系研究较困难 ,就不可避免的造成作用机理不
明确 ,不良反应多 ,可控性不强等缺点 。有文献报道
清开灵注射液含有水牛角鹿茸精等成分 ,其含有的
异型蛋白具有抗原性 ,容易产生过敏反应 。药品质
量与医疗质量直接相关。中草药注射剂引起变态反
应的主要因素是药物本身的纯度。而复方牛黄注射
液由牛黄 、黄芩 、葛根三药的有效成分牛磺酸 、黄芩
苷 、葛根素组成 。本注射剂组方明确 ,可控程度高 ,
可测成分达到 99%,注射剂的质量完全可以达到现
代西药注射液的要求 。
参 考 文 献
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收稿日期:2009-10-09基金项目:滨州医学院科技计划项目(BY2007KJ09)作者简介:李珂珂(1976-), 女 , 讲师 , 硕士 , 主要从事药物制剂及生物体内药物分析研究;Tel:0535-6913409, E-mail:like tju@ya-hoo.com.cn。
拳参水提物对小鼠免疫功能的影响
李珂珂 1 ,栾希英 2 ,刘现兵 2
(滨州医学院 1.药学院;2.基础学院 ,山东 烟台 264003)
摘要 目的:探讨拳参水提物对正常小鼠免疫功能的影响。 方法:测定胸腺 、脾脏质量并计算脏器指数;碳粒
廓清法测定单核巨噬细胞吞噬功能;MTT法检测 T淋巴细胞增殖和 NK细胞活性;鸡红细胞免疫后测定小鼠血清
溶血素抗体水平;ELISA法测定血清中 IL-2含量。结果:拳参水提取物能显著增强正常小鼠单核巨噬细胞的吞噬
能力;上调正常小鼠免疫器官的胸腺指数和脾脏指数;促进 T淋巴细胞增殖 ,增强 NK细胞的细胞毒作用;上调血清
溶血素及血清 IL-2水平。结论:拳参水提取物对正常小鼠的免疫功能具有增强作用。
关键词 拳参水提取物;免疫功能;小鼠
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2010)08-1302-05
·1302· JournalofChineseMedicinalMaterials 第 33卷第 8期 2010年 8月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2010.08.041
拳参又名紫参 、草河车 ,为蓼科植物拳参(Po-
lygonumbistortaL.)的干燥根茎 ,具有清热解毒 、消
肿止血的功效 ,用于赤痢 、热泻 、肺热 、咳嗽 、痈肿 、口
舌生疮 、吐血 、痔疮出血 、毒蛇咬伤等症〔1〕。文献报
道拳参水提取物具有抗炎 〔2〕 、抗突变〔3〕、抗癌〔4〕、抗
心律失常 〔5〕和中枢抑制等 〔6〕作用 ,并从拳参中分离
得到了没食子酸 、斛皮素 、原儿茶酸 、阿魏酸 、5-粘霉
烯-3-酮 、无羁萜醇等化合物 〔7〕 ,但拳参水提取物对
小鼠免疫功能的调节作用尚未见国内外文献报道。
本研究着重观察了拳参水提取物对正常小鼠免疫功
能的调节作用及可能的机制 ,为进一步研究其免疫
药理作用提供实验依据 。
1 材料与仪器
1.1 实验动物 6 ～ 8周龄昆明种小鼠 122只 ,雌
雄兼用 ,体质量(20 ±2)g;6 ～ 8周龄雄性豚鼠 3只 ,
体质量(300 ±30)g,滨州医学院实验动物中心提
供。合格证号:SYXK(鲁)20030020。
1.2 药物与试剂 拳参购于烟台市药材公司 ,经
滨州医学院中药研究室鉴定为拳参(Polygonumbis-
tortaL.)的根茎;盐酸左旋咪唑 (山东省莒南制药
厂 ,批号 070505);四唑蓝 (MTT, Amresco公司);刀
豆蛋白(ConA, Sigma公司);改良型 RPMI-1640培
养基 [赛默飞世尔生物化学制品(北京)有限公司 ] ;
小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司);DMSO
(Sigma公司);印度墨汁 (北京化工厂);胰蛋白酶
(Amresco公司);肝素钠注射液(河北常山生化药业
有限公司);IL-2 ELASA试剂盒(北京赛尔斯生物技
术有限公司);K562细胞株(由滨州医学院生物化
学教研室馈赠)。
1.3 主要仪器 DNM-9602酶标分析仪 (北京朗
新技术有限公司);1500型 CO2恒温培养箱(Herae-
us公司);TU-1901型双光束紫外可见分光光度计
(北京普析通用仪器有限公司);EL-204型精密电子
天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);X-12R型离心
机(Backman公司);CKX41型倒置显微镜(Olympus
公司), RE-52A旋转蒸发器(上海雅荣长城科工贸
易有限公司)。
2 方法
2.1 拳参水提物的制备 拳参药材常规加工粉
碎 ,用水浸泡 24 h后 ,回流提取 3次 ,过滤后 ,将滤
液合并 ,浓缩至含生药 100、200、400 mg/mL的拳参
水提取物 , 4 ℃冰箱保存 。
2.2 小鼠碳粒廓清实验 〔8〕 取小鼠 24只 ,随机分
成 3组:空白对照组(生理盐水)、拳参水提物给药
组(1 g/kg), 阳性对照组(盐酸左旋咪唑 0.03 g/
kg),每组 8只。分别灌胃给药 , 1次 /d,连续给药 14
d,各组小鼠称量质量并记录。末次给药后 1 h,各鼠
尾静脉注射无菌的印度墨汁 10 mL/kg,分别在注射
后的第 3 min(t1)和第 13 min(t2)摘眼球取血 ,肝素
抗凝 ,取 50 μL血液 ,溶入 5.0 mL0.1% Na2CO3溶
液中摇匀 ,于 600 nm波长处测定光密度 D(λ)值 ,
以正常小鼠血加 Na2CO3溶液作空白对照 。末次取
血后 ,立即脱臼处死小鼠 ,摘取肝脏 、脾脏 ,剪去连带
的脂肪和结缔组织 ,称其湿质量 ,并计算廓清指数 K
值和吞噬指数 α值。
K=logD(λ)1 -logD(λ)2t2-t1
α= 体质量肝质量 +脾质量 ×K1/3
2.3 免疫器官指数测定〔9〕 取小鼠 50只 ,雌雄各
半 ,随机分为 5组:空白对照组(生理盐水)、拳参水
提物组(0.5、1、2 g/kg)、阳性对照组(盐酸左旋咪唑
0.03 g/kg),每组 10只 ,分别灌胃给药 , 1次 /d,连续
21 d。末次给药后 6 h,称量小鼠体质量并记录 ,颈
椎脱臼处死 ,无菌取出脾脏 、胸腺 ,精密称量质量 。
按公式分别计算脾脏和胸腺的脏器指数。
免疫器官指数 =免疫器官质量(g)体质量(g)
2.4 T淋巴细胞增殖反应测定(MTT法)〔10〕 实
验动物分组及给药同 “2.3”项所述 ,末次给药后 6 h
将各组小鼠脱颈椎处死 ,无菌取出脾脏 ,常规制备脾
细胞悬液 ,并调整细胞浓度至 5 ×106 /mL,加入 96
孔细胞培养板中 ,每孔 100 μL,每只动物设 3个复
孔 ,再分别加入 100 μLRPMI-1640培养液。实验孔
加入 ConA(10 μg/mL),并设空白对照孔 ,置 37 ℃、
5%CO2培养箱中培养 66 h。取出培养板 ,每孔加入
MTT20 μL(5 mg/mL),继续培养 4 ～ 6 h, 2 000 r/
mim离心 5 min,吸弃上清液 ,每孔加入 DMSO150
μL,振荡 、充分混匀后 ,在酶标仪 492 nm处读取光
密度 D(λ)值。计算刺激指数 SI值。
SI=D(λ)实验孔 -D(λ)本底D(λ)对照孔 -D(λ)本底
2.5 NK细胞活性测定(MTT法)〔11〕 实验动物
分组及给药同 “2.3”项所述 ,末次给药后 6 h将各组
小鼠脱颈椎处死 ,无菌取出脾脏 ,常规制备脾细胞悬
液 ,用含 10%小牛血清的 RPMI-1640调整细胞浓度
为 5 ×106 /mL, 作为效应细胞;取对数生长期的
K562细胞作为靶细胞(1 ×105 /mL),效 、靶细胞各
取 100 μL加入 96孔平底培养板 ,各设 3个平行孔 。
另设 3个靶细胞对照孔和 3个效应细胞对照孔 ,在
37 ℃、5%CO2培养箱中培养 4 h。再向每孔中加入
·1303·JournalofChineseMedicinalMaterials 第 33卷第 8期 2010年 8月
MTT20 μL(5 mg/mL),继续培养 4 h, 2 000 r/min
离心 5 min,弃去上清液 ,每孔加入 DMSO150 μL,振
荡 、混匀 ,在 492 nm处测定各组 D(λ)值 ,取 3个复
孔的 D(λ)值均值 ,按公式计算 NK细胞活性 ,以杀
伤率(%)表示 。
NK细胞活性(%)= 1-D(λ)实验孔 -D(λ)效应细胞对照孔D(λ)靶细胞对照孔 ×100%
2.6 血清溶血素的测定〔12〕 实验动物分组及给
药参照 “2.2”所述 ,于给药第 7天每鼠腹腔注射 5%
鸡红细胞(CRBC)悬液 0.2 mL/d进行免疫 ,免疫 7
d,末次给药 2 h摘眼球取血 , 2 000 r/min离心 10
min分离血清 ,用生理盐水稀释 100倍。取稀释血
清 2 mL,与 5%CRBC1 mL、10%补体 1 mL混合 ,在
37 ℃恒温箱中孵育 30 min后 ,置 0 ℃冰浴中 10 min
终止反应 。离心取上清液于分光光度计 540 nm处
测定 D(λ)值 ,以 D(λ)值读数作为判定血清溶血素
的指标 ,比较各组间差异 。
2.7 血清 IL-2含量测定 取小鼠 24只 , 雌雄各
半 ,随机分为4组:空白对照组(生理盐水)、拳参给
药组 2、3(拳参水提物 1、2 g/kg)、阳性对照组(盐酸
左旋咪唑 0.03g/kg),每组 6只 。分别灌胃给药 , 1
次 /d, 连续给药 21 d, 按上述方法制备血清 , 用
ELISA法测定血清 IL-2含量 。操作方法按试剂盒
说明书进行 。
3 结果
3.1 拳参水提物对小鼠碳粒廓清功能的影响 结
果如表 1所示 ,与空白对照组比较 ,盐酸左旋咪唑 、
拳参水提物均可显著提高碳粒廓清指数和吞噬指数
(P<0.01)。
表 1 拳参水提物对小鼠碳粒廓
清功能的影响( x±s, n=7)
组别 给药剂量 /(g/kg) 廓清指数K值 吞噬指数α值
空白对照组 0 0.0172 ±0.0029 3.5447±0.4185
盐酸左旋咪唑组 0.03 0.0270 ±0.0039＊＊ 5.1560±0.2765＊＊
拳参水提物给药组 1 0.0241 ±0.0035＊＊ 5.8781±0.5639＊＊
注:与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01
3.2 拳参水提物对免疫器官质量的影响 结果如
表 2所示 ,与空白对照组比较 ,盐酸左旋咪唑和拳参
水提物 3个剂量均可显著提高正常小鼠的脾指数和
胸腺指数(P<0.01), 3个剂量组间差异无统计学意
义(P>0.05)。
表 2 拳参水提物对免疫器官质量的影响( x±s)
组别 n 剂量 /(g/kg) 脾质量 /g 脾指数 /(g/g) 胸腺质量 /g 胸腺指数 /(g/g)
空白对照组 8 0 0.0730±0.0124 2.9896±0.3727 0.0636±0.0135 2.6051±0.3228
盐酸左旋咪唑组 8 0.03 0.1491±0.0302＊＊ 5.5762±1.2217＊＊ 0.1480±0.0251＊＊ 5.5276±0.9628＊＊
拳参给药组 1 10 0.5 0.1121±0.0131＊＊ 4.4812±0.4847＊＊ 0.1014±0.0139＊＊ 4.1371±0.3255＊＊
拳参给药组 2 8 1 0.1235±0.0315＊＊ 4.9552±0.9370＊＊ 0.1068±0.0320＊＊ 4.1983±0.9742＊＊
拳参给药组 3 10 2 0.1123±0.0171＊＊ 4.5896±0.3832＊＊ 0.1017±0.0121＊＊ 4.2841±0.2349＊＊
注:与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01
3.3 拳参水提物对 T淋巴细胞增殖的影响 结果
如表 3所示 ,与空白对照组比较 ,盐酸左旋咪唑和拳
参水提物各剂量给药组均可显著促进正常小鼠的 T
淋巴细胞增殖(P<0.01),且随水提物浓度的增加
而逐步提高。其中 0.5 g/kg组与 1 g/kg组比较差
异显著(P<0.01);而 1 g/kg与 2 g/kg组间比较无
显著性差异(P>0.05),表明 T淋巴细胞增殖随拳
参水提物剂量的增加而有增加 ,但到一定剂量后 ,增
加减缓甚至有所降低。
3.4 拳参水提物对 NK细胞活性的影响 结果如
表 4所示 ,与空白对照组比较 ,盐酸左旋咪唑和拳参
水提物均可显著增加正常小鼠脾脏 NK细胞的自然
杀伤率(P<0.01),但各剂量组间差异无统计学意
义(P>0.05)。
3.5 拳参提取物对小鼠血清溶血素的影响 结果
如表 5所示 ,与空白对照组比较 ,盐酸左旋咪唑和拳
参水提物均可显著上调正常小鼠的血清溶血素水平
(P<0.01),提示拳参水提取物能增加小鼠血液中
抗体含量 ,从而增强免疫力 。
表 3 拳参水提物对 T淋巴细胞
增殖的影响( x±s, n=10)
组别 给药剂量 /(g/kg) 刺激指数(SI)
空白对照组 0 1.1326±0.0824
盐酸左旋咪唑组 0.03 1.5508±0.1721＊＊
拳参给药组 1 0.5 1.3818±0.1126＊＊##
拳参给药组 2 1 1.5566±0.1488＊＊
拳参给药组 3 2 1.4200±0.1104＊＊
注:与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01;与拳参给药组 2比较 , ##P
<0.01
·1304· JournalofChineseMedicinalMaterials 第 33卷第 8期 2010年 8月
表 4 拳参水提取物对 NK细胞活性的影响( x±s)
组别 n 给药剂量(g/kg) NK细胞活性 /%
空白对照组 8 0 30.35±5.39
盐酸左旋咪唑组 8 0.03 47.34±8.87＊＊
拳参给药组 1 9 0.5 50.34±10.78＊＊
拳参给药组 2 9 1 51.92±9.16＊＊
拳参给药组 3 9 2 48.03±8.28＊＊
注:与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01
表 5 拳参提取物对小鼠血清溶血素的影响( x±s, n=8)
组别 给药剂量 /(g/kg) D(λ)450
空白对照组 0 0.4073±0.0176
盐酸左旋咪唑组 0.03 0.5532±0.0417＊＊
拳参水提物给药组 1 0.5398±0.0541＊＊
注:与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01
3.6 拳参水提取物对小鼠血清 IL-2含量的影响
结果如表 6所示 ,与空白对照组比较 ,拳参水提物可
显著上调正常小鼠血清 IL-2含量(P<0.05或 P<
0.01)。该实验结果与 T淋巴细胞增殖反应结果一
致。
表 6 拳参水提取物对小鼠血清 IL-2
含量的影响( x±s, n=6)
组别 给药剂量 /(g/kg) IL-2/(pg/mL)
空白对照组 0 33.07±5.38
盐酸左旋咪唑组 0.03 47.88±8.56＊＊
拳参给药组 2 1 46.56±6.55＊＊
拳参给药组 3 2 40.11±4.23＊
注:与空白对照组比较 , ＊ P<0.05, ＊＊P<0.01
4 讨论
网状内皮系统(单核巨噬细胞系统)是机体最
重要的防御系统 ,它具有强大而迅速的吞噬廓清异
物颗粒或某些可溶性异物的能力 ,并能迅速清除体
内自身产生的某些有害物质 。机体单核巨噬细胞系
统功能的增强或减弱 ,将影响机体抵御外界病因侵
袭的能力 。故测定体内该系统的功能 ,有助于观察
健康状况 ,也可用于判断某些生物反应调节剂的强
度。本实验观察了停药 lh后药物对网状内皮细胞
吞噬活性的即刻性影响 。结果表明 ,拳参水提物能
显著提高正常小鼠的吞噬指数 α和廓清指数 K值
(P<0.01),提示拳参水提取物可提高正常小鼠的
巨噬细胞吞噬功能 。
胸腺和脾脏指数的改变能够反应机体免疫功能
的状态。免疫器官的质量在一定程度上可反映免疫
器官内淋巴细胞的数量 ,从而间接了解体内淋巴细
胞总体水平。如果脾指数和胸腺指数均增加 ,说明
药物对细胞免疫和体液免疫均有促进作用 〔13〕。实
验结果表明 ,各剂量拳参水提物对小鼠脾脏 、胸腺指
数均有显著的提高作用(P<0.01),提示拳参水提
取物能显著增强脾脏和胸腺的免疫功能。
淋巴细胞增殖反应是非常重要的免疫指标 ,尤
其 T淋巴细胞增殖反应是反映 T细胞功能和机体
细胞免疫的主要指标之一 。实验结果表明拳参水提
取物能显著促进正常小鼠脾脏 T淋巴细胞的增殖 ,
且随拳参水提取物剂量的增加刺激指数有所增高 ,
但药物浓度达到一定剂量(1 g/kg)后 ,增加减缓甚
至有所降低 。
NK细胞在调节机体的非特异性免疫反应中起
重要作用 ,是非特异性免疫的检测指标之一 ,它能直
接杀伤肿瘤细胞 ,并可通过合成和分泌 TNF对肿瘤
细胞起到杀伤作用 , NK细胞杀伤活性的提高可增
强机体的抗肿瘤能力 。实验结果表明拳参水提取物
能增强正常小鼠 NK细胞活性 ,且在 0.5 ～ 2 g/kg剂
量间比较无显著性差异。
体液免疫是特异性免疫的重要组成部分 ,与细
胞免疫相辅相成 ,共同发挥免疫作用。针对病原微
生物 ,体液免疫可通过产生抗体与对应的抗原特异
性结合产生各种生物学效应 ,故抗体产生体现了体
液免疫功能的强弱 。血清中溶血素(抗体)的水平
反映了体液免疫能力 ,溶血素的含量与机体体液免
疫能力呈正相关 〔14〕。本实验结果显示 ,拳参水提物
(1 g/kg)可上调正常小鼠血液中溶血素水平 ,提示
拳参水提取物可提高正常小鼠的体液免疫功能 。
IL-2是免疫应答过程中重要的细胞因子 ,可刺
激 T淋巴细胞生长 、分化及增强细胞毒 T淋巴细胞
(CTL)的功能 ,并能激活 NK细胞和巨噬细胞 ,在胸
腺细胞分化过程中起着重要作用。实验结果显示 ,
1、2 g/kg拳参水提物可显著提高正常小鼠血清中
IL-2的含量。这一结果与上述 T细胞增殖 、NK细
胞活性检测实验结果一致 。
本研究首次报道了拳参水提取物对正常小鼠免
疫功能的影响 ,实验结果表明拳参水提取物在一定
剂量范围内对正常小鼠的免疫功能有增强作用 ,但
是对于拳参免疫调节作用的具体有效成分及其详细
的作用机制还有待于进一步研究。
参 考 文 献
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聚轮烷 -喜树碱偶联物对卵巢癌细胞株
A2780作用的实验研究
赖春丽 ,赵建彬 ,赖 乐 ,陈建海＊
(南方医科大学南方医院药学部 ,广东 广州 510515)
摘要 目的:观察聚轮烷-喜树碱偶联物对卵巢癌细胞株 A2780的抑制作用 , 以评价其作为抗肿瘤药物的价
值。方法:MTT检测偶联物对卵巢癌细胞株 A2780的抑制作用;形态学观察经作用后的细胞生长情况;流式细胞仪
检测作用后细胞凋亡情况。结果:偶联物对卵巢癌细胞株 A2780有显著抑制作用 ,并呈现量效关系 ,且其 IC50有显
著提高;形态学和流式细胞仪检测结果表明 ,聚轮烷-喜树碱偶联物能够抑制癌细胞生长。结论:聚轮烷-喜树碱偶
联物对卵巢癌细胞株 A2780有显著的抑制作用 , 其机制可能是通过诱导细胞凋亡实现的。
关键词 聚轮烷-喜树碱偶联物;卵巢癌细胞株 A2780;抗肿瘤;凋亡
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2010)08-1306-03
收稿日期:2009-10-22作者简介:赖春丽(1971-),女 ,博士,主要从事药剂学研究;Tel:13642637995, E-mail:laichunli1979@yahoo.com.cn。＊通讯作者:陈建海 , Tel:020-61642173, E-mail:jhchen06@ 126.com。
喜树碱(camptothecinCPT)是喜树中所含的吲
哚类生物碱 ,在临床上用于治疗复发性及难治性乳
腺癌和卵巢癌等多种癌症 ,具有显著的抗癌活性。
喜树碱水溶性极低 ,限制了其在临床上的广泛使用 ,
许多研究机构主要通过提取天然产物的有效成分 ,
经过结构改造或修饰获取新的溶解性更好的化合
物 ,本实验室以新型药物载体聚轮烷为主体 ,通过化
学聚合反应 ,合成新的聚轮烷 -喜树碱偶联物 ,提高
药物的水溶性 ,降低毒副作用。本实验旨在通过聚
轮烷 -喜树碱偶联物对卵巢癌细胞 A2780的抑制作
用 ,进一步评价其作为抗肿瘤药物的价值。
1 材料与仪器
1.1 细胞株 卵巢上皮癌细胞株 A2780,由南方
医院药学部实验室传代并保存 ,所有细胞培养均在
37 ℃、5%CO2条件细胞培养箱 ,取对数生长期细胞
进行实验。
1.2 药物与试剂 聚轮烷-喜树碱偶联物为粉剂 ,
用 DMSO配制为 0.001 mg/L储备液 , 0.2 μm微孔
滤膜 -20 ℃保存 ,临用前以 DMEM稀释为使用浓
度 , DMSO的含量最大不超过 0.002%;DMEM及胰
酶(Trypsin)购自 Gibc公司;胎牛血清(FCS)为 Hy-
clone公司产品;DMSO、MTT等为 Sigmma公司产
·1306· JournalofChineseMedicinalMaterials 第 33卷第 8期 2010年 8月