全 文 ：摘 要：选取 ! 个萱草品种 ! #$%&’() #$%&&’ ( ) *+,，! #$%&’() -./0 12’+3，! #$%&’() 4’5&%5 6’5，! #$%&’()
7+’/8 6’& 9进行不同外植体诱导愈伤组织的研究 : 接种萱草叶片、根段、茎尖和子房花药几种外植体诱导愈伤
组织发现：茎尖诱导愈伤组织的效果最好；叶片取材方便但是诱导率相对较低；根段较难诱导愈伤组织；子房
和花药受取材时间限制且污染率较高，但是愈伤组织诱导率较叶片和根段高 : 激素的筛选试验表明，;# < =
3> ? @ AB4C < D: = 3> ? @ ECC对愈伤组织诱导效果良好 : 对不同萱草品种的相同外植体进行愈伤组织诱导实
验，发现其诱导效率也不同：萱草品种 ! #$%&’() #$%&&’ ( ) *+, 生长愈伤组织数量最多，FDG以上的茎尖诱导出
愈伤组织并再生出芽；! #$%&’() -./0 12’+3 在愈伤组织诱导培养基上，约 HDG的无菌苗获得愈伤组织；!
#$%&’() 4’5&%5 6’5 在愈伤组织诱导培养基上，经过 I个月的诱导，即可产生愈伤组织，其诱导成功率为 JDG K
!DG；! #$%&’() 7+’/8 6’&诱导产生愈伤组织的频率较低，为 =DG K JDG :
关键词：萱草；外植体；愈伤组织
中图分类号：LFIJ: I 文献标识码：C 文章编号M IDDNBNF!N =DDH 9DJBD=!=BDH
收稿日期：=DD!BI=B=N；修回日期：=DDHBDNB==
基金项目：兰州大学引进人才项目资助（FDDNIA）
作者简介：王晓娟（ION= P），女，甘肃人，兰州大学草业学院副教授，博士，主要从事植物细胞遗传方面的研究，Q%&：DOJIBFOI!=ND，
RB3’.&：S.’,TU’/V’/>W &XU: %YU: Z/:
第 O卷 第 J期 生命科学研究 [,&: O E,: J
=DDH年 O 月 @.\% #Z.%/Z% ]%8%’+Z2 #%^: =DDH
大花萱草不同外植体诱导愈伤组织的比较研究
王晓娟 I，金 I，陈家宽 =
（I: 兰州大学 草地农业科技学院 甘肃省草原生态研究所，中国甘肃 兰州 NJDD=D；=: 复旦大学 生命科学院 生物多
样性科学研究所 生物多样性科学与生态工程教育部重点实验室，中国上海 =DD!JJ）
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（>’/- 64’-74- <-1-)&4#e =DDHe O J 9 M =!= K =!A）
DOI:10.16605/j.cnki.1007-7847.2005.03.010
!#第 # 期
近年来，我国城市环境保护中的绿化建设越
来越受到重视，其中急需解决的是绿境植物多样
性问题$ 我国的花卉栽培以前在世界上是有名的，
而且花卉品种甚多$ 但是由于历史原因，国内现有
的花卉生产情况与人民生活水平的提高是不相适
应的，因此，引进国外优良的花卉品种，可以加快
解决我国城市绿化中花境植物品种单一的现状$
萱草（!#$%&’(()* +,-$).’）又称忘忧草，百合
科多年生宿根草本 $ 萱草原产中国南部、欧洲南
部及日本 $ 大花萱草（!#/%&’(()* 01(2’ %&’$ ()*+
’, - .),/*）也称多倍体萱草，一般株高 0 1 200
34，叶丛生，花序挺立于叶丛，花大优美，通常花
冠漏斗形或钟形，花期 5 1 20月，蒴果长卵形，果
期 6 1 22月，种子黑色，具光泽，寿命 # 1 7年 8 2 9 $
目前栽培比较多的大花萱草是培育出的多倍体新
品种，花色有淡白绿、深金黄、淡米黄、绯红、淡粉、
深玫瑰红、淡紫等，色彩华丽，是一种重要的花境
植物，广泛应用于城市绿化和园林景观建设 $
自然界的萱草一般采用分蘖等无性繁殖方式
进行增殖 $ 但由于其速度慢，一般一株萱草每年
仅可繁殖 1 7株，因而难以适应市场商品化生产
的需求 $ 利用组织培养技术快速繁育试管苗，是
一项目前被广泛应用于花卉生产的技术 $ 虽然组
织培养技术快速繁殖试管苗存在生产成本高、试
管苗出现变异植株等问题，但是采用组织培养繁
殖可以提高繁殖倍数，而且可以打破季节局限，加
快繁殖速度，实现工厂化育苗 $ 因此，组织培养繁
殖技术在挽救濒危稀有植物品种、由于引种植物
品种母本植株少而急需扩繁以增加生产规模等方
面发挥着巨大作用。前人对于萱草组织培养的研
究，仅见有少量简短的报道 8 ! 1 : 9，而未见到有关观
赏型大花萱草的工厂化扩繁方面的报道 $ 本文就
种观赏型大花萱草外植体的选择和愈伤组织的
诱导进行了研究，以期为合作企业提供相关环节
的技术参数，为企业进一步大规模组织培养扩繁
萱草提供技术指导 $
! 材料与方法
! ! 供试材料
选用上海四季花木生态科技发展有限公司提
供的 种由国外引进的萱草品种 （;&<),< =&<，
>?/@ AB&’4，C’&/D =&)D，EF,))& GH I’*）（图 2，J -
G）$ 大花萱草的生长规律是：春季萌芽，夏季开
花，秋季生长缓慢转向休眠，秋末地上部分枯萎 $
以上 个大花萱草于 !000年 #月引种，外植体取
材于 !000年 20月进行 $
! # 外植体的选择
选取以上各萱草品种的叶片 （切成 ! K # 34
大小）、茎尖、根（侧根切成 ! L 0$ 7 34长，主根横
切为半径 2 L 0$ 7 34的园片）和子房 （横切为 #
段）（图 2，M 1 N），经流水冲洗，:0O乙醇浸 ! 1 #
4?/后，蒸馏水冲洗 ! 1 #次，再用 0$ 2O=PA)!灭
菌 Q 1 20 4?/，无菌水冲洗 ! 1 #次后，进行接种 $
! $ 不同萱草品种愈伤组织诱导培养基的筛选
根据 =,RD,’ 和 J..D85 9的报道，选用 SE培养
基 8 Q 9作为基本培养基，同时参阅前人有关萱草及
其同属、同科植物的愈伤组织的培养基配方 8 ! 1 7 9，
设计了2!种激素组合进行初步试验（表!），从中筛
选出适合各品种愈伤组织生长的最适激素组合$
! % 愈伤组织的快速增殖及其芽的诱导
根据王凯基等 8 6 9 的方法，分别采用 SE T !
4P U V 5+;J T 0$ ! 4P U V WJJ 和 SE T 20 4P U V
5+;J T ! 4P U V WJJ进行萱草愈伤组织的继代培
养，同时获得再生苗 $
# 结果与讨论
# ! 萱草愈伤组织的诱导及其培养基配方的筛选
我们在进行愈伤组织诱导之前，查阅了前人
有关萱草及其同属、同科植物的愈伤组织诱导的
培养基配方，选择了 2! 种培养基配方进行实验
（见表 2），通过近 !个月的工作，我们发现针对此
次实验的 种萱草品种，编号为 NN号和 X号的培
养基诱导愈伤组织的效果良好 $ 其中，NN号培养
基在诱导 !3 +,-$).’ EF,))& G H I’*产生愈伤组织
时效果最好，而 X号培养基则适用于其它 #种萱
草品种 $
# # 不同外植体诱导愈伤组织的效果
!$ !$ 2 叶片愈伤组织诱导
大部分叶片在培养基上都能生长，但仅有叶
片面积的扩大，而无新的愈伤组织产生，!0 Y后，
叶片干枯死亡 $ 有几棵叶片在培养基上经过诱
导，生出白色的不定根或气生根，这些叶片只能在
该培养基上存活，但经转接后死亡，不能传代（图
!J）$
!$ !$ ! 茎尖愈伤组织诱导
采用整棵茎尖接种的方法，不能产生愈伤组
织，因为完整的萱草茎尖利用自身的内源激素和
培养基中的营养物质，在无菌条件和恒温光照培
王晓娟等：大花萱草不同外植体诱导愈伤组织的比较研究
! 生 命 科 学 研 究 !##$ 年
表 ! 萱草愈伤组织诱导培养基一览表
#$%& ! ’#%%()*+,-(./+0, 1&-+(1 02 ! #$%&’()
激素浓度
%&’()’( &* +&,-&’)
. -/·0 1 2
基本培养基
345) 678(7,) -)9:7-
培养基编号
;&< &* 678(7,) -)9:7-
=>3?
2
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图 ! 引进快繁萱草材料品种图片及接种外植体
?：E,4’5 F485，内花被红色，外花被黄色，生长势强；3：34G8)G F4G，花黄色，花大；%：H:’I %+4,-，花粉红色；A：C()884 A J K,&，
花黄色，花小，开花早，花期长；L：叶片；E：茎段；M：根；F：花药；D：子房
3+45 ! 670/0) 02 +,/80-(.&- )9&.+&) 02 !*+*&,-)..’/ #$%&’() #,- &:9%#,/) 02 /7&1
?：E,4’5 F485@ ,)9 :’’), N),:4’(+@ G)88&O &7(), N),:4’(+@ 5(,&’/ /,&O(+ P:/&,Q 3：34G8)G F4G@ G)88&O *8&O),@ R:/ *8&O),Q %：H:’I
%+4,-@ N:’I *8&O),Q A：C()884 A J K,&@ G)88&O *8&O),@ 5-488 *8&O),@ R8&&- )4,8G@ 8&’/ *8&,)56)’6)Q L：0)4*Q E：S&&(Q M：C()-Q F：
?’(+),Q D：KP4,G
!#第 $ 期
图 ! 萱草愈伤组织的诱导和芽的增殖
%：叶片诱导产生气生根；&：茎段分裂形成许多小芽；’：侧根诱导形成气生根；(：主根诱导膨大；)：子房产生愈伤组织；*：
愈伤组织和芽的增殖同时进行；+：无根试管苗；,：茎段根部形成愈伤组织；-：愈伤组织开始形成芽
#$% ! &’(()* #+,)-.#/+ ’+, *0//. 12$2+21’.#/+ /3 !#$%&’(()’ *+,$)-.
%：%./012 /334 05678.6 35 49. 2.1:; &：<9334= 05678.6 >? =4.@ 60A0=035; ’：%./012 /334 05678.6 35 49. >/1589 /334; (：)521/B.@.54
3: 1C012 /334; )：’1227= :3/@14035 35 49. 3A1/?; *：D/3E1B14035 3: 81227= 156 =9334; +：F.=4G47>. E21542.4 H049374 /334; ,：’1227=
:3/@14035 B.5./14.6 :/3@ 49. 1E0812 E3054 3: 49. =4.@; -：<9334 E/3678.6 :/3@ 49. 81227=I
养下，生长成为一棵一棵无根小苗 I 采用每棵茎
尖一切为二后接种方法，不同的萱草品种有不同
的结果：
其中有 #JK的材料以产生腋芽的方式增殖，
即萱草利用两个叶片之间长有的芽原基，在培养
基内提供的外源激素和营养的刺激下，芽原基里
面的分生组织萌动生长，产生新的芽点 I 这样，每
个茎尖可以产生 # L M个新芽点，经过 !J 6的培
养，该茎尖可以切割为 $份新的外植体，接入增殖
培养基内进行增殖培养 （该途径是 ! #$%&’()
D05N ’91/@发展快繁的一条有效途径）O图 !&P I
! #$%&’() <4.221 (Q R/3 生长愈伤组织数量最多，
SJK以上的茎尖诱导出愈伤组织并再生出芽 I
! #$%&’() D05N ’91/@ 在愈伤组织诱导培养基
上，约 #JK的无菌苗获得愈伤组织 I
另外一种途径是首先在茎段靠近培养基部位
形成愈伤组织，然后转接形成芽（图 !’，(）I !
#$%&’() &1?2.? ,1? 在愈伤组织诱导培养基上，经
过 T个月的诱导，即可产生愈伤组织，其诱导成功
率为 $JK L JK I ! #$%&’() */15= ,12诱导产生
愈伤组织的频率较低，为 !JK L $JK I
!I !I $ 根段诱导愈伤组织
根段在愈伤组织培养基上发生的变化共有两
种：在原有的纤细茎段上产生新的不定根，该不定
根初期呈绿色，后期生长老化，但不形成愈伤组
织，转接后死亡；根的四周发生生长，但仅仅是膨
大，不形成愈伤组织（图 !)，*）I
!I !I 子房诱导愈伤组织
! #$%&’() <4.221 (Q R/3的子房在愈伤组织诱
导培养基上易诱导愈伤组织 （采用子房或胚轴均
可）（图 !+）I 但是该外植体最大的缺点是前期污染
率极高，主要原因是子房存在皱折，不易彻底灭菌 I
王晓娟等：大花萱草不同外植体诱导愈伤组织的比较研究
!# 生 命 科 学 研 究 !$$% 年
! # 萱草愈伤组织的快速增殖及其芽的诱导
在萱草的组培过程中，我们发现萱草愈伤组
织的产生与新芽的形成是相伴同时发生的，不存
在单有愈伤组织块或者全部生芽的情况 （图 !&，
’）( 我们推测此现象的发生可能有如下几种原
因：)）所用培养基的激素刚好合适萱草愈伤组织
和新芽的生长；!）萱草愈伤组织利用培养基中的
成分生长后，愈伤组织块体内的内源激素水平促
使新芽的形成；*）萱草愈伤组织块在培养基上生
长过程中，培养基中的外源激素刺激愈伤组织的
表皮细胞，使愈伤组织分化产生新芽 (
针对不同品种的愈伤组织，我们实验了不同
的激素对愈伤组织快速增殖的效果，每种配比都
做了一个系列的浓度，结果发现，! #$%&’() +,-../
0 1 234 采用 ’’号培养基效果最好；而 ! #$%&’()
5/6.-6 &/6， ! #$%&’() 789: ;>3/9? &/.?采用!号培养基效果最好 ( 这与愈伤
组织的诱导培养基的筛选结果是一致的 (
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《生命科学研究》专辑征稿启事
《生命科学研究》是经国家新闻出版署和国家科委批准，面向全世界公开发行的反映国内外生命科
学领域中最新研究成果的综合性学术期刊，属国家科技部中国科技论文统计源期刊及中国科技核心期
刊。
《生命科学研究》由国内外著名的专家、学者 #%人组成编辑委员会，其中国内编委 %人，国外编委
))人，分布在美、英、日、瑞典等国家。由国内著名专家邹承鲁、袁隆平、戚正武、刘以训、顾孝诚、翟中和、
刘筠、姚开泰、姚守拙、尹长民、刘德富教授担任学术顾问。
本刊拟于 !$$%年下半年出版一期《生命科学研究进展专辑》增刊，主要刊登生物学、农业科学、基础
医学等学科最新研究进展，特别欢迎反映各学科国内外最新研究动态的综述类文章。该专辑的公开刊
号、版式标准、印刷质量、发行范围等等与正刊完全一致。作者来稿请按现行国家标准或行业标准及本
刊规范格式撰写，通过 XN=/8.向我部发送（文稿请贴在 XN=/8.的附件中，要求使用 S43O文字处理系统），
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另请附上作者的详细通讯地址、联系电话和 XN=/8.地址，信封上需注明“专辑论文”字样。
本刊地址：)$$T) 湖南师范大学《生命科学研究》编辑部
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