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琐琐葡萄多糖体外抗乙型肝炎病毒作用的实验研究
刘 涛1，赵 军2，李海波3，马 龙1
(1．新疆医科大学公共卫生学院毒理学教研室，新疆 乌鲁木齐 830011;2．新疆药物研究所新疆
维吾尔药重点实验室，新疆 乌鲁木齐 830002;3．江苏省南通市疾病预防控制中心，江苏 南通 226006)
Inhibitory effects of polysaccharides from Vitis
vinifer L on hepatitis B virus in vitro
LIU Tao1，ZHAO Jun2，LI Hai-bo3，MA Long1
(1． Dept of Toxicology，College of Public Health，Xinjiang Medi-
cal University，Urumqi 830011，China;2． Xinjiang Key Labora-
tory for Research and Development of Uighur Drugs，Institute of
Materia Medica of Xinjiang，Urumqi 830002，China;3． Nan-
tong Center for Disease Control and Prevention，Nantong Jiangsu
226006，China)
中国图书分类号:R 282. 71;R 284. 1;R 373. 21;R 978. 7
文献标识码:A 文章编号:1001 － 1978(2011)01 － 0147 － 02
关键词:琐琐葡萄;多糖;乙型肝炎病毒;HepG 2． 2． 15 细胞
株;细胞培养;体外
Key words:Vitis vinifer L;polysaccharides;HBV;HepG 2． 2．
15 cells;cell culture;in vitro
琐琐葡萄(Vitis viniferal L)为葡萄科小无核红葡萄，药
用果实，主产于我国新疆吐鲁番、和田、鄯善等地［1］，具有健
脾胃、理肺、生津、养血等功效;在维吾尔医临床主要应用于
脾胃不和、神志不安以及小儿麻疹和肝炎等病症的治疗［2］，
收稿日期:2010 － 09 － 17，修回日期:2010 － 10 － 29
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 30660157)
作者简介:刘 涛(1974 －)，女，博士，副教授，硕士生导师，研究方
向:食品毒理学，Tel:0991-4365317，E-mail:xjmult@ 163．
com
马 龙(1957 －)，男，教授，博士生导师，研究方向:食品
毒理学，通讯作者，Tel:0991-8567261;E-mail:xjmuml @
163． com
收载于《神农本草经》、《本草纲目》和《维吾尔药志》等历代
医药文献中。多糖(polysaccharides)是存在于有机体内的一
种重要的结构成分，也是一种重要的信号或信息分子的受
体，具有调节免疫［3］、抗肿瘤［4］、抗病毒［5］等多种生物活性。
文献报道［6］多糖是琐琐葡萄的主要特征性成分之一，且在体
内外对免疫性肝损伤具有保护作用［7 － 8］，对肝癌细胞 HepG2
的增殖具有抑制作用［9］。为探讨琐琐葡萄多糖抗乙肝病毒
作用，本文用 HepG 2． 2． 15 细胞株为模型，考察了用药后细
胞培养上清液中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、E 抗原
(HBeAg)的改变，并采用荧光定量 PCR 法考察了其对 HBV
DNA的抑制效果，评价其抗 HBV活性。
1 材料与方法
1． 1 细胞株和主要材料 HepG 2． 2． 15 细胞株购自武汉大
学物种保藏中心;DMEM培养基、G418、青霉素 －链霉素(美
国 Gibco公司);胎牛血清(杭州四季青生物制品公司);HB-
sAg和 HBeAg检测试剂盒(上海华美生物公司);HBV DNA
荧光定量 PCR检测试剂盒(上海申友生物技术公司);MTT
(AMRESCO，上海生工生物工程技术公司分装);二甲基亚砜
(DMSO)和 0. 025%胰蛋白酶 － EDTA(Sigma 公司);拉米夫
定(3-TC，批号:06120028，葛兰素史克制药苏州有限公司);
琐琐葡萄多糖由作者提取。
1． 2 方法
1． 2． 1 细胞培养 HepG 2. 2. 15 细胞株传代于高糖 DMEM
培养基(每 1 000 ml含 100 万单位青霉素、1. 0 g链霉素、100
mg G418 和 10%灭活胎牛血清)中，置 5% CO2 37℃培养箱
培养。
1． 2． 2 细胞毒性试验 细胞接种 48 h 后，倾去培养基，分
别加入不同浓度样品培养，d 4 换样，8 d 后加入 5 g·L －1的
MTT溶液，每孔 10 μl，37℃孵育 4 h后，加入 DMSO，每孔 150
·741·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 Jan;27(1):147 ～ 8
μl，混匀，使甲臢完全溶解，用酶标仪在 490 nm下测定 A值。
按公式计算细胞抑制率［细胞抑制率 /% = (A细胞对照组 －
A给药组)/(A细胞对照组 － A空白组)× 100%)］，求出半数毒性剂量
(TC50)。
1． 2． 3 药物活性试验 HepG 2. 2. 15 细胞接种 48 h 后，倾
去培养基，分别加入含琐琐葡萄多糖(100、50、25、12. 5 mg·
L －1)、3-TC(100、10、1 mg·L －1)的培养基，每孔 200 μl，每浓
度 3 复孔，置 37℃，5% CO2 培养箱中培养，每隔 4 d 换样，d
8 分别收集细胞培养上清液，置 － 20℃保存备用，待测 HB-
sAg、HBeAg和 HBV DNA。
1． 2． 4 HBsAg和 HBeAg 的检测 采用 ELISA 试剂盒测定
细胞培养上清液中 HBsAg 和 HBeAg 的浓度，以 P /N 表示。
按公式计算药物对 HBsAg 和 HBeAg 的抑制率［HBsAg(或
HBeAg)抑制率 /% = (A细胞对照组 － A给药组 )/(A细胞对照组 －
A空白组)× 100%］、半数有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)，综
合判断药物效果。TI = TC50 / IC50，TI ＞ 2 为有效低毒;1 ＜ TI
＜ 2 为低效有毒;TI≤1 为受试物毒性大，不宜于用于抗 HBV
治疗。
1． 2． 5 HBV DNA 的测定 使用 HBV DNA 荧光定量 PCR
试剂盒测定细胞培养上清液中 HBV DNA 的拷贝数。按公
式计算药物对 HBV DNA的抑制率［HBV DNA抑制率 /% =
(Copies细胞对照组 － Copies给药组)/Copies细胞对照组 × 100%］。
2 结果
琐琐葡萄多糖(100、50、25、12. 5 mg·L －1)和 3-TC(100、
10、1 mg·L －1)对 HepG 2. 2. 15 细胞分泌 HBsAg 的 IC50分别
为 112. 69 mg·L －1和 315. 37 mg·L －1，其 TI 为 12. 54 和
0. 78;对 HBeAg的 IC50分别为 204. 46 mg·L
－1和 9051. 01 mg
·L －1，其 TI 分别为 6. 91 和 0. 03，提示琐琐葡萄多糖抑制
HepG 2. 2. 15 分泌 HBsAg和 HBeAg的效果均优于 3-TC。琐
琐葡萄多糖对 HepG 2. 2. 15 细胞分泌 HBV DNA的抑制作用
随多糖浓度的增大而逐渐增强，100 mg·L －1时对 HBV DNA
的抑制率达 59. 33%，而 3-TC 可抑制 HBV DNA 的分泌，各
浓度组 DNA拷贝数均 ＜ 103，超出试剂盒检测下限。
3 讨论
1987 年 Sells等［10］用共转染法将克隆的 HBV DNA及抗
G418质粒转染人肝癌细胞株 HepG2 建立了 2． 2． 15 细胞株，
该细胞株能长期稳定地向培养上清液中分泌 HBsAg、HBeAg
和完整的 Dane颗粒，且能产生大量的病毒复制中间体，目前
该模型已被广泛用于体外抗 HBV的药效学研究中。我们应
用此模型考察了琐琐葡萄多糖抗 HBV 的效果，结果表明琐
琐葡萄多糖用药 8 d 后，对 HepG 2. 2. 15 细胞分泌 HBsAg、
HBeAg具有明显抑制作用，其 TI分别为 12. 54 和 6. 91，效果
均优于拉米夫定，且药物细胞毒性较小;同时，琐琐葡萄多糖
对 HBV DNA也表现出一定的抑制作用，在 100 mg·L －1时
抑制率达到 59. 33%，但其效果与拉米夫定相比较差异较
大。以上实验结果显示，琐琐葡萄多糖的抗病毒作用可能与
其干扰病毒吸附和穿入宿主细胞等功能有关［5］，其确切机制
还有待进一步研究。
综上所述，琐琐葡萄多糖在体外具有一定的抗 HBV 生
物学活性，与维吾尔医临床应用效果相一致，这为利用琐琐
葡萄开发有效抗病毒民族新药提供了实验依据。
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