全 文 ：乌头碱脂质体制备工艺研究
董雯雯 ,张燕芳 ,刘小平 ,耿丹清
(武汉理工大学化工学院制药工程系 ,湖北武汉 430070)
　　摘要　目的:研究乌头碱脂质体的处方筛选和制备工艺。方法:采用乙醇注入法制备乌头碱脂质体 , 以包封率
为评价指标 , 采用正交设计优化处方和制备工艺 , 用 HPLC测定其包封率。结果:最佳工艺处方为:药物∶卵磷脂为
1∶15,卵磷脂∶胆固醇为 3∶1, 磷酸盐缓冲液 pH=7.4, 制备温度为 60℃。结论:经优化得到的乌头碱脂质体处方合
理 , 工艺可行 ,包封率较高 , 稳定性好。
关键词　乌头碱;脂质体;制备工艺
中图分类号:R943　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)09-1413-03
StudyonPreparationTechnologyofAconitineLiposomes
DONGWen-wen, ZHAHGYan-fang, LIUXiao-ping, GENGDan-qing
(CollegeofChemicalEngineering, WuhanUniversityofTechnology, Wuhan430070, China)
Abstract　Objective:Tooptimizetheprescriptionandpreparationofaconitineliposomes.Methods:Aconitineliposomeswere
preparedbyethanolinjectionmethod.Theencapsulationefficiencywastakenasinspectiontargetandthepreparationofliposomeswere
optimizedbyorthogonaldesign.HPLCwasusedtomeasuretheencapsulationefficiency.Results:Thebestprescriptionwasaconitine/
lecithin/cholesterol(1∶15∶5)withphosphatebufersolution(pH7.4)ashydrationmedia.Thehydrationtemperaturewas60℃.Con-
clusion:Theoptimizedformulationofaconitineliposomesisreasonableinprescription, practicableintechnology, highinencapsulation
efficiencyandgoodinstability.
Keywords　Aconitine;Liposomes;Preparationtechnology
　　乌头碱是 C-19二萜类双酯型生物碱 ,分子式
C34H47NO11 ,存在于乌头属欧乌头 、川乌 、北草乌和
华乌头等多种植物中 。实验证明乌头碱可抑制醋酸
引起的扭体反应 〔1〕 ,且能抑制兴奋在神经干的传导
或使神经干完全丧失兴奋和传导能力 ,有较强的麻
醉镇痛作用 〔2〕。临床多偏好其散寒搜风 、止痛活络
功效 ,用于治疗寒湿痹症及跌打损伤诸症 ,且对各种
神经痛和痛风有疗效 ,是不可多得的燥湿镇痛之良
药 。但乌头碱毒性较大 ,口服 0.2 mg即可中毒 。脂
质体能较好地包裹亲水或亲油性药物 ,具有靶向和
缓释作用 ,可延长药物作用时间 ,降低药物毒性 。本
实验以包封率为评价指标 ,对乌头碱脂质体的制备
工艺进行了研究 。
1 　仪器与材料
1.1 　仪器　TDL-5低速离心机 (上海安亭科学仪
器厂), Agilent1100型高效液相色谱仪 (美国 Agi-
lent公司), KQ-100超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司), D-1无级调速磁力搅拌器(巩义市英峪
予华仪器厂)。
1.2 　材料　乌头碱对照品(中国药品生物制品检
定所 ,批号 0720-9406),乌头碱(江苏南京青泽医药
科技开发有限公司提供),卵磷脂(国药集团化学试
剂有限公司 ,生化试剂),胆固醇(国药集团化学试
剂有限公司 ,分析纯),甲醇(国药集团化学试剂有
限公司 ,色谱纯),乙腈(国药集团化学试剂有限公
司 ,色谱纯),其余试剂均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　脂质体的制备　采用乙醇注入法制备乌头碱
脂质体。精密称取处方量的乌头碱 、卵磷脂 、胆固醇
于 100 ml烧杯中 ,加入 20 ml无水乙醇使之完全溶
解。搅拌下 ,用五号针头匀速注入一定温度的 20 ml
磷酸盐缓冲溶液中 ,恒温搅拌 2 h以除去乙醇 ,即得
乌头碱脂质体混悬液。
2.2　包封率的测定
2.2.1　色谱条件:色谱柱:Elite-C18柱 (Hypersil
ODS2, 4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相:0.2%冰醋
酸(三乙胺调 pH6.25)-乙腈 =65∶35;检测波长:
230 nm;流速:1.2 ml/min;柱温:30℃。
2.2.2　专属性试验:取乌头碱对照品适量 ,用甲醇
溶解 ,制成浓度为 80 μg/ml的乌头碱对照品溶液 ,
吸取 20 μl注入液相色谱仪 ,记录色谱图 。另配制
空白脂质体和载药脂质体的甲醇溶液 ,分别吸取 20
μl注入液相色谱仪 ,记录色谱图。通过比较得出 ,
乌头碱在此条件下 19 min左右出峰 ,载药脂质体中
乌头碱达到基线分离 ,空白脂质体对乌头碱的含量
测定无干扰 ,见图 1。
·1413·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 9期 2008年 9月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.09.004
图 1　专属性试验的高效液相色谱图
A.乌头碱对照品　B.乌头碱脂质体样品　C.空白阴性对
照
2.2.3　标准曲线的制备:精密称取 5.0 mg乌头碱
对照品 ,置于 10 ml的容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,得浓度为 0.5 mg/ml的乌头碱对照品
溶液。精密量取 0.4、0.8、 1.2、1.6、2.0 ml上述溶
液分别置于 10 ml容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇
匀 ,分别得到浓度为 20.0、40.0、60.0、80.0及 100.0
μg/ml的溶液 。分别精密吸取 20 μl,注入液相色谱
仪 ,测定峰面积 。以峰面积 Y为纵坐标 ,浓度 X
(μg/ml)为横坐标进行线性回归 ,得回归方程为:Y
=13.35X+19.7(r=0.9972),结果表明乌头碱在
20.0 ～ 100.0 μg/ml范围内线性关系良好 。
2.2.4　精密度试验:取乌头碱对照品适量 ,用甲醇
溶解 ,制成浓度为 80 μg/ml的乌头碱溶液 ,吸取 20
μl注入液相色谱仪 ,测定乌头碱的峰面积 ,重复 5
次 , RSD=0.68%。
2.2.5　重复性试验:按 2.2.2项下乌头碱对照品
溶液的制备方法 ,平行制备 5份溶液 ,分别吸取 20
μl进样测定 , RSD=2.07%。
2.2.6　回收率试验:分别量取空白脂质体溶液 3
ml,分别精密加入 75、150、225 μg/ml的乌头碱对照
品溶液各 2 ml,摇匀 ,分别吸取 20 μl进样测定 ,结
果平均回收率为 96.26%;RSD=1.60%(n=9)。
2.2.7　稳定性试验:配制适量载药脂质体的甲醇
溶液 ,按 2.2.1项下色谱条件:在 0、24、48 h分别进
样 20 μl, 测定乌头碱的峰面积 , 计算得 RSD=
2.12%(n=3),表明 48 h内供试液稳定。
2.2.8　包封率的测定:量取适量脂质体混悬液 ,于
离心机中以 4000 rpm离心 30 min,取上清液 1 ml用
甲醇稀释 ,进样测定 ,通过标准曲线计算出游离乌头
碱的浓度 C。乌头碱脂质体混悬液体积为 V,则游
离乌头碱的质量 W=C×V×稀释倍数 , M为制备初
始加入的乌头碱的质量 , 包封率 =(M-W)/M×
100%〔3〕。
2.3　脂质体的处方与工艺优化　根据药物的性
质 、文献 〔4〕以及预实验结果 ,以脂质体包封率为指
标 ,选取对其有显著影响的药物与卵磷脂质量比
(A)、卵磷脂与胆固醇质量比(B)、缓冲液 pH(C)、
水化温度(D)为考察因素 ,设计 4因素 3水平的 L9
(34)正交试验对脂质体的制备工艺进行优化 。水
平因素见表 1,结果分析见表 2。结果表明 ,影响脂
质体包封率的因素顺序为 A>D>B>C,优化的处
方和工艺为 A1B1C3D3 ,即药物与卵磷脂质量比为 1
∶15,卵磷脂与胆固醇质量比为 3∶1,磷酸盐缓冲液
pH7.4,水化温度 60℃。在此工艺条件下 ,乌头碱
脂质体包封率最高 。
　表 1 　因素与水平
水平 因素A B C D(℃)
1 1∶15 3∶1 6.5 40
2 1∶20 4∶1 7.0 50
3 1∶30 5∶1 7.4 60
　表 2 　正交试验结果与分析
试验号 因素A B C D
包封率(%)
1 1 1 1 1 84.44
2 1 2 2 2 47.58
3 1 3 3 3 96.56
4 2 1 2 3 93.41
5 2 2 3 1 45.64
6 2 3 1 2 30.86
7 3 1 3 2 41.08
8 3 2 1 3 29.59
9 3 3 2 1 37.00
X1 76.19 72.98 48.30 55.69
X2 56.64 40.94 59.33 39.84
X3 34.56 54.81 61.09 73.19
K 41.63 32.04 12.79 33.35
3　讨论
3.1　乌头碱的水溶性较低 ,且在高温下易分解 ,乙
醇注入法适用于水溶性低的药物 ,且所用设备简单 ,
·1414· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 9期 2008年 9月
易于操作 ,重现性好 ,制备的脂质体小而均匀 ,包封
率高 ,稳定性好 〔5〕。
3.2 　由于脂质体双分子层膜的流动性 ,使药物易
于从脂质体粒子中渗漏出来。一定胆固醇的加入可
有效地调节脂质双分子层膜的细微结构 〔6〕 ,提高脂
质体的包封率和稳定性〔7〕。本实验结果表明在卵
磷脂与胆固醇质量比为 3∶1时包封率较高 。
3.3 　选用 HPLC法进行含量测定 ,流动相的选择
上采用 0.2%冰醋酸(三乙胺调 pH6.25)-乙腈(65
∶35),其中三乙胺的加入减小了拖尾效应 ,峰形良
好 。方法简便 、快速 、准确 、重现性好 ,具有可推广
性 。
参 考 文 献
[ 1] 彭波 , 杨华元 .乌头 、附子及其主要生物碱的研究进
展 .华西药学杂志 , 1993, 8(3):158-161.
[ 2] 施玉梁 , 魏仁榆 ,周念辉 , 等.乌头碱对神经肌肉接头电
活动和神经干复合电位作用的观察 .生理学报 , 1980,
32(2):135-142.
[ 3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 .二部.北京:
化学工业出版社 , 2005:附录 177-182.
[ 4] 郭海燕 , 莫穗林 .脂质体物理稳定性和包封率的影响
因素 .中国新药杂志 , 2004, 13(6):498-501.
[ 5] 李凤前 , 胡晋红 ,朱全刚 .大豆磷脂脂质载体与胆盐表
面活性剂的体外相互作用 .中国药学杂志 , 2002, 37
(9):675-678.
[ 6] IoannaKyrikou, IoannaDaliani, ThomasMavromoustakos,
etal.Themodulationofthermalpropertiesofvinblastine
bycholesterolinmembranebilayers.BiochimicaetBio-
physicaActa, 2004, 1661:1-8.
[ 7] CrosassoP, BursaP, ArpiccoS, etal.Preparation, char-
acterizationandpropertiesofstericalystabilizedpaclitaxel-
containing liposomes. JournalofControled Release,
2000, 63:19-30.
(2007 -12-19收稿)
基金项目:浙江省科技厅重点科技计划项目(2006C23008)＊通讯作者:袁珂 , Tel:0571-63743607, E-mail:yuan ke001@ 163.com。
肿节风不同提取方法的比较研究
原　雪 ,刘元慧 ,斯金平 ,朱玉球 ,袁　珂＊
(浙江林学院天然药物研发中心 ,浙江临安 311300)
　　摘要　目的:对肿节风的不同提取方法进行比较研究。方法:采用冷浸提取 、渗漉提取 、回流提取 、连续回流提
取 、超声提取 、微波萃取六种不同的方法进行提取 ,并对提取物的收率进行比较 ,同时以富马酸含量为考察指标进
行含量测定。结果:采用六种不同的提取方法提取所得提取物的收率及有效成分的含量有较大的差异 ,其中回流
提取及连续回流提取所得提取物的收率相对较高 , 而超声提取及微波萃取所得提取物中有效成分的含量相对较
高。结论:与其它方法相比 ,微波提取法具有提取快速 , 节省时间 、溶剂和能源 , 所提取的有效成分含量较高等优
点。
关键词　肿节风;微波萃取;富马酸;含量测定
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)09-1415-04
ComparisonStudyofDifferentExtractionMethodsofSarcandraglabra
YUANXue, LIUYuan-hui, SIJin-ping, ZHUYu-qiu, YUANKe
(ResearchandDevelopmentCenterofNaturalMedicine, ZhejiangForestryUniversity, Lin′an311300, China)
Abstract　Objective:TocomparethediferentextractionmethodsofSarcandraglabra(Thunb.)Nakai.Methods:Tocompare
theyieldofextractionanddeterminationcontentofextractionby6 kindsofdiferentextractionmethodsascold-soakedextraction, per-
colationextraction, refluxextraction, continuousrefluxextraction, ultrasonicextractionandmicrowaveextraction, andthecontentof
furmaricacidwasdeterminatedasindex.Results:Theyieldsofextractionandcontentsofavailabilitycomponentwereverydiferent
through6kindsofdiferentextractionmethods.Amongthem, theyieldsofrefluxextractionandcontinuousrefluxextractionwerehigh-
er, thecontentsofavailabilitycomponentsofultrasonicextractionandmicrowaveextractionwerehigher.Conclusion:Microwaveex-
tractionmethodisbetterthanothermethods.Itisfasteconomical, solventandenergy, andalsohashigheryieldofavailabilitycompo-
nent.
Keywords　Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai;Extractionofmicrowave;Furmaricacid;Determinationofcontent
·1415·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 9期 2008年 9月