全 文 ：收稿日期:2011-08-15; 修订日期:2012-06-01
基金项目:广西壮族自治区科技攻关项目( No． 0992011 －13)
作者简介:蒋 林( 1972-) ，男(汉族) ，广西博白人，现任广西国营六万林场
工程师，学士学位，主要从事植物资源开发与利用工作．
* 通讯作者简介:莫昭展( 1974-) ，男( 壮族) ，广西博白人，现任玉林师范学
院教授，博士学位，主要从事植物资源开发与利用工作．
流苏石斛丛生芽增殖和生根的研究
蒋 林1，卓 宇1，莫昭展2*
(1．广西国营六万林场，广西 兴业 537800;
2．玉林师范学院生命科学与生物技术二级学院，广西 玉林 437000)
摘要:目的 为了提高流苏石斛的增殖系数。方法 以流苏石斛的无菌苗为材料，研究不同浓度的激素、香蕉汁、土豆汁、椰
汁对流苏石斛丛生芽增殖的影响，以及激素对流苏石斛丛生芽生根的影响。结果 适宜丛生芽增殖的培养基为 MS + 6 － BA
2． 0 mg /L + NAA 1． 2 mg /L +香蕉汁 10%，增殖系数达 10． 769; 1 /2MS + NAA 0． 2 mg /L + IBA 2． 0 mg /L + AC 0． 1%时生根效
果最好，生根率达 90． 19%，而且根生长健壮，平均生根数为 4． 778。结论 生长素和细胞分裂素进行配合使用，能有效的促
进石斛丛生芽的增殖。低浓度激素培养的丛生芽更容易生根。
关键词:流苏石斛; 丛生芽; 增殖; 生根
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 09． 090
中图分类号:R285． 1 文献标识码:B 文章编号:1008-0805( 2012) 09-2310-02
流苏石斛 Dendrobium fimbriatum又名马鞭石斛、大黄草、马鞭
杆、旱马棒，为附生性丛生植物［1］。茎粗壮，斜立，质地硬，圆柱形
或有时基部上方稍呈纺锤形，不分枝，具多节，干后淡黄色，节间长
3． 5 ～4． 8 cm，具多数纵槽。流苏石斛含有石斛多糖、矿质元素、氨
基酸等有效成分，可以作为铁皮石斛的替代品［2］，为《中国药典》
收载的石斛类药材之一［3］。在我国主要分布于广西南部至西北
部、贵州南部至西南部、云南东南部至西南部等热带［4］。由于过度
采挖以及自身的生长、繁殖特性和对生长环境的特殊要求，流苏石
斛野生资源临近枯竭。植物组织培养方法是寻求解决流苏石斛种
源枯竭、保护其品种的有效途径。目前对流苏石斛进行的组织培
养研究较少［5 ～7］。为此，笔者在总结前人的基础上以果实作为外
植体，获得大量的无菌苗，深入研究流苏石斛丛生芽增殖和生根的
影响因子，建立完善的流苏石斛组织培养体系，通过人工栽培确保
流苏石斛资源的可持续利用。
1 材料
玉林师范学院组织培养室的流苏石斛无菌苗，选取生长良好，
长势均匀的无菌苗。
2 实验方法
2． 1 培养条件 每种培养基均添加 20 g /L的蔗糖，4 g /L的琼脂，
pH值 5． 4 ～5． 6，光照培养室温度设为(25 ± 2)℃，光照强度 1 500
～2000Lx，光照 12 h /d。
2． 2 不同浓度的 6 － BA 和 NAA 的实验设计 本实验以 MS 为基
本培养基，添加 1 ～ 4 mg /L 不同浓度的 6 － BA 和 0． 2 ～ 1． 2 mg /L
的 NAA(表 1)。将由果实诱导出来的生长健壮、长势均匀的无菌
苗接种于 H1 ～ H16培养基中，每编号接种 8 瓶，每瓶接种 5 ～ 7 株，
40 d后观察其增殖情况，统计丛生芽的增殖倍数，筛选出较适宜流
苏石斛丛生芽增殖的培养基，实验设计见表 1。
2． 3 不同激素实验设计 在 MS + 6 － BA 2． 0 mg /L + NAA1． 2 mg /
L基础上，添加不同浓度的 2，4 － D 、Ad(腺嘌呤盐酸盐)、KT(激动
素) ，如表 2所示，观察在 6 － BA，NAA的基础上添加其他激素，其
增殖效率是否有所提高。各处理重复 3遍，每个编号接种 8 瓶，每
瓶接种 5 ～7株，40 d后统计丛生芽的增殖倍数。实验设计见表 2。
2． 4 不同的附加物的实验设计 在 MS + 6 － BA2． 0 mg /L + NAA
1． 2 mg /L基础上，分别添加浓度为 100，200 g /L 的香蕉汁、椰子
汁、土豆汁，实验配方如表 3所示。每个处理重复 3次，每编号接 8
瓶，每瓶接种 5 ～7株。40 d后，统计丛生芽的增殖倍数，实验设计
见表 3。
表 1 不同浓度的 6 － BA和 NAA对流苏石斛丛生芽增殖的实验设计
编号
6 － BA/
mg·L －1
NAA/
mg·L －1
编号
6 － BA/
mg·L －1
NAA/
mg·L －1
H1 1 0． 2 H9 3 0． 2
H2 1 0． 4 H10 3 0． 4
H3 1 0． 8 H11 3 0． 8
H4 1 1． 2 H12 3 1． 2
H5 2 0． 2 H13 4 0． 2
H6 2 0． 4 H14 4 0． 4
H7 2 0． 8 H15 4 0． 8
H8 2 1． 2 H16 4 1． 2
表 2 不同激素对流苏石斛丛生芽增殖的影响实验设计
编号
6 － BA/
mg·L －1
NAA/
mg·L －1
2，4 － D /
mg·L －1
Ad /
mg·L －1
KT /
mg·L －1
S1 2 1． 2 0． 4 － －
S2 2 1． 2 0． 8 － －
S3 2 1． 2 1． 2 － －
S4 2 1． 2 － 0． 5 －
S5 2 1． 2 － 1 －
S6 2 1． 2 － 1． 5 －
S7 2 1． 2 － － 1
S8 2 1． 2 － － 2
S9 2 1． 2 － － 3
表 3 不同附加物对流苏石斛增殖的影响
编号
6 － BA/
mg·L －1
NAA/
mg·L －1
椰汁
(%)
土豆汁
(%)
香蕉汁
(%)
M1 2 1． 2 10 － －
M2 2 1． 2 20 － －
M3 2 1． 2 － 10 －
M4 2 1． 2 － 20 －
M5 2 1． 2 － － 10
M6 2 1． 2 － － 20
表中椰汁、土豆汁、香蕉汁的百分数是以体积分数来算
2． 5 不同激素对流苏石斛生根的实验设计 将通过以上途径得到
的无根苗接入以下的培养基:以 1 /2MS 为基本培养基，添加 0 ～
0． 2 mg /L不同浓度的 NAA和 1． 0 ～4． 0 mg /L不同浓度的 IBA，每
种培养基均加人活性炭(AC)0． 1%、琼脂粉 4 g /L、蔗糖 20 g /L，培
养 40 d左右。统计生根率及根的生长情况。
3 实验结果及分析
3． 1 不同浓度的 6 － BA 和 NAA 对流苏石斛丛生芽增殖的影响
丛生芽接种在培养基上经过 40 d生长后，不同培养基对丛生芽增
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殖的效果如表 4。
表 4 不同浓度的 6 － BA和 NAA对流苏石斛丛生芽增殖的影响
编号 增殖系数 芽长 /cm 长势 生长情况
H1 2． 625 1． 400 + + + + 芽稀疏，叶绿，苗较壮，伸长较慢
H2 2． 950 1． 643 + + + + + 芽稀疏健壮，叶绿，伸长较快
H3 3． 533 1． 740 + + + + + 芽较稠密，叶浓绿，苗壮，伸长快
H4 5． 565 2． 771 + + + + + 芽稠密健壮，叶浓绿，伸长很快
H5 3． 889 1． 467 + + + + + 芽较稠密健壮，叶绿，伸长较快
H6 4． 826 1． 560 + + + + 芽较稠密，叶绿，苗较壮，伸长快
H7 5． 652 1． 838 + + + + 芽稠密，叶绿，苗较壮，伸长快
H8 6． 429 1． 983 + + + + + 芽稠密健壮，叶浓绿，伸长快
H9 3． 286 1． 183 + + + + 芽较稀疏，叶绿，苗较壮，伸长慢
H10 2． 667 1． 425 + + + + + 芽稀疏，叶绿，苗肥壮，伸长慢
H11 3． 091 1． 529 + + + + + 芽较稀疏，叶绿，苗肥壮，伸长较慢
H12 4． 679 2． 013 + + + + + 芽较稠密，叶浓绿，苗较肥壮壮，伸长快
H13 2． 789 1． 300 + + + + + 芽稀疏，叶绿，苗健壮，伸长慢
H14 2． 316 1． 367 + + + 芽稀疏，叶较绿，芽体肥壮，伸长慢
H15 2． 226 1． 438 + + + + + 芽稀疏，叶绿，有少量愈伤组织
H16 2． 850 1． 467 + + + + 芽稀疏，叶较绿，苗较弱，伸长较慢
以“ +”描述流苏石斛的相对生长情况，“ +”越多表明生长越好
丛生芽增殖倍数 =继代后新萌发的芽苗总数 /继代芽苗总数。
由表 4可以看出，以 MS 为基本培养基以及激素用量为 6 － BA
2． 0mg /L + NAA1． 2 mg /L 时，增殖效果比较好，增殖系数达到
6． 429，而且长势好，芽稠密健壮，叶色浓绿，而且无根，有利于进一
步增殖，如果丛生芽长根会影响它的增殖效果，使得增殖系数降低
(见图 1)。由实验结果得出，6 － BA 的浓度从 1 mg /L 增加到 2
mg /L时丛生芽的增殖倍数呈上升的趋势，当浓度超过 2mg /L时，
丛生芽的增殖倍数降低。在浓度为 4mg /L时，出现了芽变粗的现
象，不能形成正常的增殖芽，可能是由于 6 － BA的浓度过高，在激
素积累到一定浓度时，芽的基部愈伤组织化。由此可见在继代增
殖过程中应当适当降低激素浓度，当浓度过高时，苗分化过多，生
长慢，还会形成愈伤组织，并出现丛生芽密集、黄化、节间缩短和产
生畸形苗等现象。而 NAA 的浓度从 0． 2 ～ 1． 2 mg /L 时对丛生芽
的增殖影响不大，但对芽的伸长有促进作用，随着浓度的增大，丛
生芽的株高逐渐增大。当 6 － BA与 NAA配合使用时，既可以促进
芽的增殖又可以促进芽的伸长。因此生长调节物质是诱导石斛组
织培养形成小植株所必需的。
表 5 不同激素对流苏石斛丛生芽增殖的影响
编号 增殖系数 芽长 l /cm 长势 生长情况
S1 7． 150 1． 513 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长快
S2 7． 829 1． 417 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，基部膨大
S3 6． 733 1． 340 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，基部膨大
S4 7． 595 2． 183 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长很快
S5 6． 625 2． 100 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长很快
S6 6． 600 2． 514 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长很快
S7 6． 892 2． 533 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长很快
S8 9． 553 1． 763 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长快
S9 6． 400 2． 114 + + + + + 芽健壮，产生少量愈伤组织
以“ +”描述流苏石斛的相对生长情况，“ +”越多表明生长越好
由表 5可以看出，在 MS +6 － BA2． 0 mg /L + NAA1． 2 mg /L的
基础上，添加不同浓度的 2，4 － D，Ad，KT，当 KT浓度为 2． 0 mg /L
时对流苏石斛丛生芽的增殖效果较好，增殖系数为 9． 553，苗健壮，
长势好，叶绿，芽伸长快，芽长有 1． 763 cm(见图 2)。从苗的生长
情况来看，添加这些激素后，石斛苗的叶展开慢，可能是由于激素
浓度过高。KT的浓度由 1． 0 ～ 3． 0 mg /L，丛生芽增殖系数由低 －
高 －低，低浓度时芽伸长过快，导致芽增殖较少;浓度过高时细胞
分化过快，产生愈伤组织，不能产生正常的芽体。一定浓度的 KT可
促进不定芽发生，当与生长素类配合使用时有利于芽的增殖及伸长。
2，4 －D的浓度在 0． 4 ～1． 2 mg/L时随浓度的增大，它的增殖效果也
呈低 －高 －低的趋势，当浓度高于 0． 4 mg/L时，芽基部稍有膨大，产
生的苗较壮，不利于继代增殖，可能是由于高浓度的 2，4 － D对愈伤
组织的诱导有促进作用，使芽体愈伤组织化。Ad对流苏石斛丛生芽
的增殖效果不明显，在 3个浓度梯度范围内，增殖系数与未加 Ad前
的增殖系数(6． 429)没有明显提高，但在芽的伸长方面有促进作用，
比较适宜用于壮苗和生长阶段，所以选择 MS + 6 － BA 2． 0mg/L +
NAA1． 2mg/L +KT2． 0 mg/L用于增殖培养。
图 1 增殖较好的丛生芽 图 2 添加 KT2． 0 mg /L后的丛生芽
3． 3 不同的附加物对流苏石斛丛生芽增殖的影响
表 6 不同附加物对流苏石斛丛生芽增殖的影响
编号 增殖系数 芽长 l /cm 长势 生长情况
M1 6． 750 1． 725 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长快
M2 8． 846 1． 450 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长较快
M3 5． 125 2． 700 + + + + + 芽较稠密，生长健壮，伸长很快
M4 6． 713 1． 900 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长快
M5 10． 769 1． 750 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长快
M6 7． 077 2． 350 + + + + + 芽稠密健壮，叶绿，伸长很快
表 6 可以看出，在丛生芽的增殖培养过程中加入香蕉汁及椰
汁添加物的培养基丛生芽的诱导倍数都有所增高，芽体和根更健
壮，可见土豆汁、香蕉汁和椰汁在流苏石斛试管苗丛生芽的诱导
和壮苗都有积极的作用。但是香蕉泥比椰子汁、土豆汁的效果都
好，其中添加 100 mg /L 香蕉泥的增殖效果比较好，增殖系数达
10． 769，芽稠密健壮，伸长快。可见香蕉提取物对石斛壮苗作用十分
显著 。虽然添加 10% 的土豆汁对芽伸长的效果好，芽长有
2． 700 cm，但是其增殖效率仅有 5． 125。综合两者，选择编号 M5:MS
+6 －BA 2． 0 mg/L +NAA1． 2 mg/L +香蕉汁 10%为适宜培养基。
表 7 不同激素对石斛生根的影响
编号
激素浓度 C /mg·L －1
NAA IBA
生根率(%)
平均根数
(条)
根的生长情况
Q1 － － 69． 77 1． 535 植株长势好，根粗壮，根长为 0． 74cm
Q2 0． 2 － 86． 21 4． 448 植株长势较好，根粗壮，根长为 0． 94cm
Q3 0． 2 1． 0 71． 43 2． 536 植株长势较好，根粗壮，根长为 1． 20cm
Q4 0． 2 2． 0 90． 19 4． 778 植株长势好，根 1． 3cm粗壮，根长为
Q5 0． 2 4． 0 95． 65 2． 957 植株长势好，根粗壮，根长为 0． 8cm
生根率 =生根的株数 /接种的总株数
从表 7 可以看出编号 Q5:NAA0． 2 + IBA4． 0 的生根率最大，
达到 95． 65%，但平均生根数仅为 2． 957，稍微偏低;而从平均生
根数来看，Q4:NAA0． 2 + IBA2． 0 的平均生根数为 4． 778，比较高，
其生根率为 90． 19%(见图 3)。因此综合生根率和平均生根数来
看，编号 Q4 的配方用于流苏石斛的生根较好。流苏石斛试管苗
比较容易生根，部分材料在无生长调节剂的 1 /2MS 培养基上也
能形成根系，但根系细弱、生长缓慢。适当加入生长素就能促进
生根，不同生长素配比使用诱导流苏石斛试管苗生根效果更好，
长出的根比较粗壮，对后期的移植栽培工作有利，能有效的提高
成活率。培养基中都添加 1‰的炭粉，可以吸附一定量的有害物
质还可以提供一个黑暗的环境，利于根的生长。
图 3 生根效果较好的组培苗
4 讨论与结论
在进行激素配比实验时，生长素和细胞分裂素进行配合使用，
能有效的促进石斛丛生芽的增殖。在使用 6 － BA时，丛生芽的增
殖系数随着激素浓度的增加，芽的增殖系数大，当 6 － BA 的浓度
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 9 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 9 期
达到 3． 0 mg /L时，增殖系数降低，芽基部膨大，产生少量的愈伤组
织。因此在继代增殖过程中应当适当降低激素浓度，当浓度过高
时，苗分化过多，生长慢，还会形成愈伤组织，并出现丛生芽密集、
黄化、节间缩短和产生畸形苗等现象，不利于继代增殖。在含适宜
浓度的 6 － BA、NAA培养基中，添加其他的激素(KT、2，4 － D、Ad)
都可以进一步提高增殖系数，其中以 KT2． 0 mg /L的浓度为佳。可
见不同激素共同使用时，起到协同作用，促进芽的生长。
香蕉、马铃薯、椰乳都属于天然提取物的范畴，它们作用可能
是因为某些成分在培养基中一定程度上充当了缓冲剂，能够调节
培养基的 pH值，为石斛提供一个稳定的培养环境。天然添加物
用于不同的研究实验，得出的结论不尽一致，香蕉提取物促进幼
苗生长和发育，但对原球茎的分化和增殖却有抑制作用，对幼苗
发育有促进作用，本实验表明香蕉汁对流苏石斛丛生芽的增殖和
壮苗效果突出。马铃薯的提取物对原球茎的分化、增殖及幼苗的
生长和发育有促进作用，主要用于壮苗。椰汁主要用于原球茎的
增殖。由此说明，天然提取物对组织培养实验结果的影响因实验
材料的种类、发育阶段和天然提取物的种类和提取方式而异。
实验中发现，低浓度激素培养的无根苗更容易生根，且诱导
生根时间也较短。因此，在进行试管苗生根前，先在低浓度激素
培养一段时间，可能诱导出来的试管苗生根率更高，不过这还需
要进一步的实验验证。
实验中，由于有些苗较小，与其他的苗分开接种，且接种量比
较多，30 d后观察到接种小苗较多的培养基中，苗的长势好，芽体
嫩，丛生芽增殖多。可见当同样的培养基接种不同数量的无菌苗
时，它们的增殖效率明显不同，当接种量比较多，分布较密集时，
石斛的生长情况比较好，可能是石斛在生长过程当中存在群体效
应。当石斛密集生长时，有利于植株的生长健壮和增殖。
同时发现，当植株较肥壮或生长到 5 cm左右，如果继续用于
丛生芽的增殖，其增殖效率非常低，每株无菌苗只能分化出 1 ～ 2
个芽，从而降低了整体的增殖效率，因此在进行丛生芽增殖时，最
好不要选择生长肥壮或植株过高的苗，当株高为 2 ～ 3 cm 时，是
进行增殖的最好阶段，增殖效率高，长势好。所以，在实验过程
中，选择好的材料非常重要。
参考文献:
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热带植物科学，2007，36(4) :45．
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科技，2006，26(6) :6．
［3］ 卫生部药典委员会．中华人民共和国药典［S］．北京:化学工业出版
社，2000:70．
［4］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志［M］．北京:科学
出版社，1999:90．
［5］ 付志惠，李洪林，杨 波．流苏石斛的组织培养［J］． 植物生理学通
讯． 2006，42(4) :690．
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［J］．安徽农业科学，2007，35(33) :10704．
［7］ 黄卫昌，殷丽青，胡永红．流苏石斛的离体快速繁殖［J］． 上海交通
大学学报(农业科学版) ，2008，26(6) :584．
收稿日期:2012-05-03; 修订日期:2012-08-28
基金项目:贵州省自然科学基金( No． J － 2011［2311］)
作者简介:赵能武( 1977-) ，男( 土家族) ，贵州德江人，现为贵阳中医学院
副教授，学士学位，主要从事民族医药和天然药物化学的研究工作．
* 通讯作者简介:黄 静( 1958 － ) ，女( 汉族) ，贵州贵阳人，现为贵州省食
品药品检验所副主任药师，学士学位，主要从事药用植物资源调查、食品
药品检验工作．
贵州雷公山自然保护区
药用蕨类植物种类调查研究(Ⅰ)
赵能武1，徐 宏1，黄 静2* ，杨理明2，赵俊华1
(1．贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002;2．贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳 550001)
摘要:目的 对贵州雷公山自然保护区药用蕨类植物的种类进行研究。方法 通过野外考察、标本鉴定以及资料的收集、
分析等。结果 基本明确雷公山自然保护区药用蕨类植物的种类情况。结论 雷公山自然保护区药用蕨类植物有 35 科，
75 属，190 种。
关键词:雷公山; 药用蕨类; 种类
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 09． 091
中图分类号:R282． 71 文献标识码:B 文章编号:1008-0805( 2012) 09-2312-02
蕨类植物又称羊齿植物，它是森林下层优势植物种类，不仅
具有优化环境，维持森林生态系统平衡的作用，还具有医药、食
品、工业等方面用途，是有着重要的生态、社会、经济效益的一个
植物群类。目前，全球约有蕨类植物 12 000 余种，以热带和亚热
带最为丰富。我国约有 2 500 种［1］;贵州已知的蕨类植物有 53
科，151 属，770 种［2］(由于近几年不断发现新分布及新种类，我
省蕨类植物现应有 800 余种) ，药用品种有 46 科，121 属，430 余
种。而雷公山位于我省东南部，它的气候、地层、地貌等，构成了
有利于蕨类植物生长繁衍的环境，因此，蕨类植物在雷公山相当
丰富。我们通过查阅相关的医药专业文献以及野外考察、标本鉴
定和资料的收集、分析等方法，确定了雷公山自然保护区药用蕨
类植物有 35 科，75 属，190 种。现按科、属和种的来源、生境及作
用与主治分述如下。
1 石杉科 Huperziaceae(2 属)
1． 1 石杉属 Huperzia(6 种)
1． 1． 1 皱叶石杉 系石杉科植物皱叶石杉 Huperzia crispata (Ch-
ing ex H． S． Kung)Ching的全草。生于海拔 1 780 ～ 1 820 m的阔
叶林或箭竹林下深厚而疏松的土壤中。具有化瘀止血，固肾涩
精，益气作用。主要用于治疗跌打损伤，痨伤吐血，气血积滞，痔
血，带下［3］。
1． 1． 2 昆明石杉 系石杉科植物昆明石杉 Huperzia kunmingensis
Ching的全草。生于海拔 1 800 m的杜鹃花下苔藓丛中。主要用
于治疗老年性痴呆和重症肌无力(因含石杉碱甲)［4］。
1． 1． 3 雷山石杉 系石杉科植物雷山石杉 Huperzia leishangensis
X． Y． Wang的全草。生于海拔 2 100 m 的山顶杜鹃花下苔藓丛
中。主要用于治疗老年性痴呆和重症肌无力(因含石杉碱
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 9