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朝鲜蓟叶提取物中洋蓟素的检测分析



全 文 :[9] 李明,杨国林,米沙,等.大枣环磷酸腺苷(cAMP)提取工艺的研究
[J].中药材.2007,30(9):1143-1145
[10] 王向红,桑亚新,崔同,等.高效液相色谱法测定枣果中环腺苷酸
[J].中国食品学报, 2005,5(3):108-112
收稿日期:2010-05-26
朝鲜蓟,别名菊蓟、菜蓟、法国百合、荷花百合,学
名Cynarascolymus L.,为菊科(Comopsite)菜蓟属多年生
草本植物。朝鲜蓟原产地中海沿岸 [1],是由菜蓟(C.
cardunculus L.)演变而成。朝鲜蓟以意大利栽培最多,
其次为西班牙和阿根廷,意大利的产量占全球的50 %。
19世纪由法国传入我国上海。目前我国主要在上海、浙
江、湖南、云南等地有少量栽培。朝鲜蓟食用部分为花
蕾的总苞和花托,是一种高营养保健蔬菜,被誉为“蔬
菜之皇”。朝鲜蓟叶内含丰富的酚酸类物质如洋蓟素
(Cynarin, 1,5-二咖啡酰奎宁酸)、绿原酸、1,3-二咖啡
酰奎宁酸等。其具有保肝、护肝,治疗消化不良等的功
效[2- 3]。因此对朝鲜蓟叶的开发利用可以提高朝鲜蓟产
品的附加值,同时可以为医药保健领域提供一种新的
原料。
目前国际市场上的朝鲜蓟叶提取物一般是要求
洋蓟素含量高于2.5 %,少数会对绿原酸的含量提出要
求。熊杰等[4]用RP- HPLC方法对朝鲜蓟中的绿原酸进
行了测定,但对其中洋蓟素的含量没有进行分析。因此
建立洋蓟素的测定方法,用来控制产品的质量就非常
朝鲜蓟叶提取物中洋蓟素的检测分析
冯建光1,陈利琼2
(1.深圳职业技术学院,广东深圳 518055;2.深圳劲创生物技术有限公司,广东深圳 518057)
摘 要:建立朝鲜蓟叶提取物中洋蓟素的高效液相色谱测定方法。采用waters symmetry C-18色谱柱(5 μm,4.6×
150 mm),流动相为乙腈-磷酸/水(梯度洗脱),检测波长330 nm,流速1.0 mL/min,柱温25 ℃。洋蓟素在38 μg/mL~
190 μg/mL的浓度范围内呈良好线性关系(r=0.999 4),平均回收率在97.4 %~102.3 %之间,回收率的RSD为3.0 %。结果
表明,用高效液相色谱法测定朝鲜蓟叶提取物中洋蓟素的含量操作简便,结果准确,重复性好,可用于指导原料的采
购和提取物质量指标的控制。
关键词:朝鲜蓟;朝鲜蓟叶提取物;高效液相色谱法;洋蓟素
Determination of Cynarin Content in Artichoke Leaf Extract
FENG Jian- guang1,CHENLi- qiong2
(1. Department of Research & Development, Shenzhen Polytechnic, Shenzhen 518055,Guangdong,China; 2. BannerBio
Nutraceuticals Inc, Shenzhen 518057,Guangdong, China)
Abstract: To determine the content of cynarin content in Artichoke leaf extract by HPLC. Waters symmetry
C- 18 column(5 μm,4.6×150 mm)was used as stationary phase and Acetonitrile- Phosphoric Acid/water was
used as mobile phase with 330 nm for detection wavelength. The flow rate was 1.0 mL/min and the column
temperature was 25 ℃ . External standard method was used for quantitative analysis. The linear range of
cynarin was 38 μg/mL- 190 μg/mL(r=0.999 4). The average recovery was 97.4 %- 102.3 %(RSD=3.0 %). The
method is simple, accurate, stable and reproducible. It can be applied to quality control of Artichoke leaf extract.
Key words: Artichoke;Artichoke leaf extract;HPLC;Cynarin
基金项目:科技部“科技型中小企业技术创新基金”项目(07C262
14421829)
作者简介:冯建光(1973—),男(汉),工程师,硕士,研究方向:天然产
物化学的研究。
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检测分析
食品研究与开发
Food Research And Development
2011年 7月
第 32卷第 7期112
冯建光,等:朝鲜蓟叶提取物中洋蓟素的检测分析
有必要。
洋蓟素分子结构式如下:
1 仪器与试剂
1.1 仪器
1525型高效液相色谱仪:美国Waters公司;2487型
双波长紫外检测器:美国Waters公司;BS110S电子天
平:北京赛多利斯天平有限公司。
1.2 药品与试剂
乙腈:HPLC级(中国医药集团上海化学试剂公
司);磷酸:AR级(广东汕头西陇化工厂);超纯水:
Millipore公司;洋蓟素对照品(纯度95.0 %):香港大学
植物系王明福博士提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
waters symmetryC- 18色谱柱(5μm,4.6×150mm),
检测波长:λ=330 nm。
流速:1.0 mL/min,进样量:10 μL,柱温;25℃。
流动相A:乙腈;流动相B:磷酸/水[0.2∶99.8V/V]。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品贮备液的制备
精密称取洋蓟素对照品100.0 mg(纯度95.0 %)置
于100 mL容量瓶中,加70 mL左右的甲醇溶解并超声
10 min,最后用甲醇定溶至500 mL。制得浓度为
190 μg/mL(100 %计)的洋蓟素对照品贮备液。
2.2.2 朝鲜蓟叶提取物测试样品溶液的制备
称取一定数量已粉碎的朝鲜蓟叶,加入8倍(V/W)
原料体积的75 %甲醇,浸泡1 h,然后加热沸腾提取
2 h,过滤获得第1次提取液,料渣再加入4倍体积的
75 %甲醇提取第2次,过滤获得第2次的甲醇提取液
体,合并所有的提取液体,浓缩到适当浓度后,加水进
行水沉,水沉上清液用树脂进行吸附,被吸附的活性物
质用适当浓度的乙醇进行解析,解析液浓缩干燥后就
为朝鲜蓟叶提取物。称取150.0 mg左右的上述朝鲜蓟
叶提取物置于100 mL容量瓶中,加入70 mL左右的甲醇
溶解并超声10 min,最后用甲醇定溶至100 mL。
2.3 线性关系考察
以对照品贮备液配制浓度为38、57、95、114、152、
190 μg/mL的洋蓟素系列标准溶液。上述不同浓度的标
准溶液用0.45 μm微孔滤膜过滤,分别吸取10 μL滤液
注入高效液相色谱仪。以对照品进样浓度为横坐标,峰
面积为纵坐标进行回归计算。回归方程为:Y=46 635X+
6 249.5,相关系数r=0.999 4,表明洋蓟素在38 μg/mL~
190 μg/mL的浓度范围内呈良好线性关系。
2.4 稳定性实验
对同一对照品标准溶液(浓度为95 μg/mL),每隔
2 h测定1次,测定结果表明平均峰面积为4 402 567,
RSD为1.42 %(n=6),在10 h内稳定。
2.5 重复性实验
取朝鲜蓟叶提取物适量,精密称取5份,按样品测
定方法进行平行实验,测得样品中洋蓟素的平均含量
5.36 %,RSD为1.85 %,表明本方法重复性良好。
2.6 精密度实验
精密吸取上述对照品标准溶液(95 μg/mL)10 μL,
重复进样6次,结果见表2,图1。
2.7 加样回收率实验
精密称取3份已知含量的朝鲜蓟叶提取物120.0 mg,
经上述方法测定,其洋蓟素含量为5.36 %,分别置于
100 mL容量瓶中,每份样品分别加入按样品纯物质的
80 %、100 %、120 %的标准品物质,即加入190 μg/mL洋
时间/min
0
1
20
22
24
26
表 1 HPLC条件
Table 1 HPLC conditions
A/%
6
6
30
50
6
6
B/%
94
94
70
50
94
94
序号
峰面积
表 2 精密度实验结果
Table 2 Results of precision
1
4 399 973
3
4 359 567
2
4 482 063
4
4 397 065
5
4 452 037
6
4 436 781
平均值
4 421 247
RSD/%
1.0
图1 洋蓟素对照品的HPLC图谱
Fig.1 HPLC profile of Cynarin standard
AU
检测分析
113
蓟素的对照品贮备液 27、34、41 mL,再用甲醇定容至
100 mL。按质量标准(草案)正文中的含量测定项下方
法测定,各样品平行进3针,结果见表3。计算其平均回
收率在97.4 %~102.3 %之间,回收率的RSD为3.0 %。结
果表明本法具有良好的回收率。
2.8 样品测定
制备的溶液用0.45 μm过滤器过滤后精密吸取对
照品溶液和测试样品溶液各10 μL,分别注入液相色谱
仪中,测定其峰面积,按照外标法计算其含量,结果见
图2。
结果表明朝鲜蓟叶提取物中洋蓟素的含量为
5.36 %。
3 结论
目前,朝鲜蓟提取物中洋蓟素的检测还没有国标
检验方法,采用本文的高效液相色谱法可以快速有效
地测定朝鲜蓟叶提取物中洋蓟素的含量,该方法操作
简便,结果准确,重复性好,可用于指导原料的采购和
提取物质量指标的控制。
参考文献:
[1] Bianco V V. Present situation and future potential of artichoke in the
mediterranean basin[J]. Acta Horticulturae, 2005, 681:39-55
[2] Wegener T,FintelmannV. Pharmacological properties and therapeutic
profile of artichoke[J]. Wien Med Wochenschr, 1999, 149:241-247
[3] Pittler M H,Thompson C O,Ernst E. Artichoke leaf extract for
treating hypercholesterolaemia[J]. Cochrane Database Syst Rev, 2002
(3):CD003335
[4] 熊杰,吕小芳,杨红英,等.RP-HPLC法测定朝鲜蓟中绿原酸的含
量[J].云南化工,2004,31(6):39-41
收稿日期:2010-11-27
样品称
样量/mg
121.6
120.1
120.8
表 3 加样回收率实验结果
Table 3 Results of recovery
标准物
加量/mg
5.1
6.5
7.8
样品中标准
物含量/mg
6.5
6.4
6.5
进样
次数
1
2
3
1
2
3
1
2
3
实际测得
的量/mg
11.1
11.2
11.8
12.9
13.3
13.4
14.0
13.8
14.0
回收
率/%
95.7
96.6
101.7
100.0
103.0
103.8
97.9
96.5
97.9
平均回
收率/%
98.0
102.3
97.4
RSD/
%
3.0 图2 朝鲜蓟叶提取物的HPLC图谱
Fig.2 HPLC profile of Artichoke leaf extract
AU
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HPLC法测定野蔷薇中金丝桃苷的含量
米丽班·霍加艾合买提,迪丽菲嘎尔·阿布都热一木,迪丽努尔·马里克*
(新疆师范大学化学化工学院,新疆乌鲁木齐 830054)
摘 要:建立一种简单、快速测定野蔷薇果中金丝桃苷含量的反相液相色谱方法。利用乙腈、0.05 %磷酸溶液,
以1 mL/min流速梯度洗脱,在361 nm波长下检测,金丝桃苷在3.38 min内即可达到基线分离。经与标准品对照,野蔷薇
果中含有金丝桃苷,含量为8.12 μg/g(以干重计)。经测定:此方法测定金丝桃苷回收率较好,为93.4 %;相对标准偏差
为1.23 %,方法重复性较好,可用于野蔷薇果中金丝桃苷的快速分析检测。
关键词:液相色谱;野蔷薇;金丝桃苷;含量测定
基金项目:国家自然科学基金(20865004)项目
作者简介:米丽班·霍加艾合买提(1965—),女(维吾尔),副研究员,本科,主要研究方向:天然产物。
*通信作者
检测分析
食品研究与开发
Food Research And Development
2011年 7月
第 32卷第 7期114