全 文 ：玻璃苣醇提取物对去势小鼠行为学的影响
刘晓辉，陈晓明，刚洪林，苏云明*
(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:初步考察玻璃苣醇提取物对去势小鼠的行为学指标的影响，探讨玻璃苣对更年期模型小
鼠的作用及其机制。方法: 建立小鼠更年期模型，分别观察小鼠的记忆功能、自主活动、握力、戊巴比妥
钠诱导睡眠时间。结果:玻璃苣改善去势小鼠记忆功能、减少小鼠自主活动次数、延长小鼠的抓握时间、
缩短模型小鼠的睡眠潜伏期、延长睡眠时间;玻璃苣各组均有升高去势小鼠脑内 NA、DA 含量的趋势。
结论:玻璃苣醇提物能够在一定程度上改善更年期去势小鼠记忆功能;改善更年期去势小鼠的狂躁、失
眠等症状。
关键词:玻璃苣;更年期;对去势小鼠的行为学
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2014)05 － 0037 － 03
收稿日期:2014 － 03 － 17 修回日期:2014 － 04 － 26
基金项目:黑龙江省青年科学基金资助项目(QC2009)
作者简介:刘晓辉(1963 －)，男，高级实验师。研究方向:中药现代药理
学研究。
* 通讯作者:苏云明(1949 －)，男，教授，博士研究生导师。研究方向:
中药现代药理学研究。
女性 40 岁以后，由于卵巢功能逐渐衰退，卵巢分
泌的激素明显减少，导致神经内分泌平衡失调。约有
1 /3 的更年期妇女能通过神经内分泌的自我调节达到
新的平衡而无自觉症状。2 /3 的妇女则出现一系列神
经内分泌失调的症状，包括血管动力性、精神神经性、
萎缩性及代谢障碍性等方面，称为更年期综合征(Cli-
macteric syndorme，CS)［1］。临床上主要表现为月经紊
乱、记忆力减退、失眠，潮热、出汗、排尿困难、性欲减退
以及易怒、抑郁、焦虑等。
人类出现绝经的年龄相对稳定，从公元前至今
2 000余年的文献记载，妇女普遍在 50 岁左右绝经。
平均绝经年龄因地区与国家不同而有差异，发达国家
的绝经年龄在 50 ～ 52 岁，发展中国家亚非拉地区约在
47 岁左右，我国 80 年代的调研资料显示绝经年龄平
均为 47． 5 ～ 49． 5 岁。影响绝经年龄的因素有遗传、营
养、体重、居住地区的海拔高度、嗜烟等。营养差可能
使绝经年龄提前，如非洲新几内亚，营养差的地区，绝
经年龄平均为 43 岁左右，而营养不差的地区为 47 岁
左右。嗜烟可能使绝经提前 1． 5 年左右。身材瘦、海
拔高、可能使绝经年龄提前［2］。也有报道［3］产次多及
口服避孕药可以使绝经年龄后延，原因可能是多次妊
娠减少了排卵周期，避孕药抑制了排卵，使卵母细胞耗
竭延后而绝经晚。
随着社会的发展、生活节奏的加快及竞争意识的
增强，更年期综合征的发生率日渐增高;而且随着人们
寿命显著延长，妇女绝经后平均生命过程大大延长。
我国妇女目前己有五分之一步入更年期，其中约有三
分之二的妇女会出现症状。绝经是女性生命的转折
点，是人生的必经之路。因此对更年期综合征的研究
治疗有重要的社会意义和现实意义。
1 实验材料
1． 1 实验动物
KM小鼠，清洁级，雌性，体质量 18 ～ 22g，由黑龙
江中医药大学药物安全性评价中心提供，实验动物合
格证号:SYXK黑 2012001。实验室环境饲养。
1． 2 受试药的制备
本实验采用玻璃苣全株作为原料药，由哈尔滨市
药品食品检验检测中心提供玻璃苣醇提物:将玻璃苣
全草切成约 1cm的小段，称取 500g，使用浓度为 75%
的乙醇于 95℃热回流 3 次，每次 30 min，合并提取液，
减压以便于回收乙醇，减压干燥，制得干燥粉末，提取
物得率为 16． 15%，备用。
1． 3 阳性对照药
更年安胶囊:规格 0． 3g /粒，批号:20120802，吉林
省博维药业有限公司。
1． 4 主要试剂
水合氯醛(昆山市石浦年沙助剂厂);青霉素(哈
药集团制药总厂);0． 9%生理盐水(哈尔滨三联药业
有限公司);戊巴比妥钠(上海化学试剂采购供应站试
剂厂);75%乙醇(哈药集团制药总厂)。
1． 5 主要仪器
H． H． S 11 － 4 型电热恒温水浴锅(上海医疗器械
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五厂 DGX －9143B － 1);电热恒温箱(上海一恒科学仪
器有限公司);电热鼓风干燥箱(上海福玛实验设备有
限公司);XSZ － H 型光学显微镜(重庆光学仪器厂);
MG － C Y 型迷宫刺激器(小鼠用，上海杰韦弗实业有
限公司);XZC －4A小动物自主活动测定仪(牡丹江市
高新技术开发公司);高压灭菌器(宁波市镇海玻璃器
厂)。
2 实验方法
2． 1 模型建立
选健康 KM雌性小鼠，以 200mg /kg水合氯醛腹腔
注射麻醉，待翻正反射消失后，腹位固定，腹部中线膀
胱上侧处剪毛，75% 酒精消毒，切开皮肤和腹肌约
1cm，在膀胱下方有一呈 Y 字型的器官就是小鼠的子
宫，沿着一侧子宫末端与输卵管连结的可见到粉红色、
黄红色的卵巢。在卵巢下端穿一丝线，结扎，剪去卵巢
及余线，将组织推回腹腔，缝合切口，同法摘取另一侧
卵巢，缝合切口，切口处给予青霉素干粉防止感染。实
验室环境下，饲养一周。假手术组只开腹腔不结扎输
卵管和摘除卵巢(造模后单笼饲养)。手术后第 2 天
进行阴道涂片检查，连续 5 天，以不出现角化上皮细胞
为造模成功。
阴道涂片检查:以左后背位固定，右手取一预先吸
有生理盐水 0． 1 ～ 0． 2mL 的钝头吸管，细心插入小白
鼠阴道内 2mm，反复抽吸 3 次，滴一滴于载玻片上，置
显微镜下进行细胞学检查，检查去势是否完全，动情周
期从阴道涂片细胞学变化克分为四期，按下述标准
判断:
Ⅰ 动情间期:主要是大量的多核细胞，也有少量
的上皮细胞。Ⅱ 动情前期:有大量的上皮细胞呈粒状
胞浆，尚有少量角化的上皮细胞，但无白细胞。Ⅲ 动
情期:主要是大量角化上皮细胞，形状大而不规则，间
有少量上皮细胞。Ⅳ 动情后期:有大量白细胞，亦有
融合的角化上皮细胞。
2． 2 动物分组及给药
选取造模成功的小鼠 60 只，随机分成 6 组，分别
为玻璃苣醇提物高剂量组 13． 3g /kg、玻璃苣醇提物中
剂量组 6． 65g /kg、玻璃苣醇提物低剂量组 3． 33g /kg，
阳性对照组 0． 35g /kg，模型对照组。另取 10 只小鼠，
只开腹腔不摘除卵巢，作为假手术组。于术后一周开
始灌胃给药，各组每天给药 1 次，假手术和模型组给予
同体积蒸馏水。于给药第 7 天开始进行指标检测。
2． 3 握力测定
从给药第 7 天开始，连续 3 天，每天将小鼠的前爪
放在高 1m、长 1． 5m、直径 1mm的铁丝上训练小鼠，于
给药第 10 天，将小鼠放在铁丝上，记录其力竭落地时
时间。
2． 4 记忆功能的测定
握力实验结束后，进行 Y 型迷宫的测定，实验开
始时，选用电流强度 0． 7mA，电压 38V，电击延时 5s。
让小鼠在起步区(小鼠开始所在的臂)适应 3min，然后
按Ⅰ→Ⅱ→Ⅲ→Ⅰ臂转换琴键开关以变换安全区与电
击区的位置，在电击作用下最终才跑至安全区。待其
进入安全区时开始计时，15s 后切换光源。如此进行
切换 20 次，每次切换光源相当于小鼠学习一次，每天
每只小鼠如此学习 20 次，第 20 次切换后待小鼠进入
安全区后适应 30s后将其取出。
将各组小鼠分别进行训练，规定小鼠受电击后
10s内从起步区直接逃至安全区为“正确反应”(Cor-
rect reaction)，否则为“错误反应”。实验分 3 个训练
时段 (training Stage)进行，第 1 时段和第 2 时段间隔
24h，第 2 时段和第 3 时段间隔 48h。
①学习训练阶段:第 1、2 时段，每天每只小鼠学习
训练 20 次，记录“正确反应”次数，此阶段连续进行
2 天。
②记忆保持测试阶段:在第 2 时段训练完毕 48h
后，再以同样的方法进行 Y 型迷宫电击测试反应，记
录正确反应次数。
2． 5 自主活动的测定
Y型迷宫第 3 时段测定完毕后，将小鼠放入自主
活动仪中，先适应环境 5min，然后测定 5min 内小鼠活
动的次数。
2． 6 睡眠时间的测定
测完自主活动后，各组动物腹腔注射戊巴比妥钠
35mg /kg(本试验条件下，动物产生翻正反射消失的催
眠剂量)，观察小鼠睡眠潜伏期(从给药开始至翻正反
射消失的时间)和维持时间。
2． 7 统计学处理
实验数据用 SPSS17． 0 统计软件包处理，样品测定
数据以均数 ±标准差(珋x ± s)表示以 one － wayANOVA
模型进行分析，两组间的差别用 LSD Post Hoc Tests检
验，所有检验结果以 P ＜ 0． 05 作为评定差异有显著性
的标准。
3 实验结果
3． 1 对握力的影响
实验结果显示，与假手术组比较，模型组小鼠的抓
握时间明显减少，差异具有统计学意义(P ＜ 0． 05);醇
提物高剂量组、更年安组与模型组相比，差异具有统计
学意义(P ＜ 0． 05)。其它各给药组与模型组比较，均
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没有统计学意义。结果表明，醇提物高剂量组、更年安
组均能延长小鼠的抓握时间。结果见表 1。
表 1 对握力的影响(珋x ± s，n = 10)
组别 剂量(g /kg) 抓握时间(s)
模型对照组 — 179． 80 ± 81． 97▲
假手术组 — 309． 60 ± 77． 69
醇高 13． 30 256． 90 ± 46． 36*
醇中 6． 65 236． 30 ± 68． 22
醇低 3． 33 218． 80 ± 56． 60
更年安组 0． 35 241． 70 ± 61． 54*
注:与假手术组比较，▲P ＜ 0． 05;与模型组比较，* P ＜ 0． 05。
3． 2 对去势小鼠记忆功能的影响
结果显示:第 1 个时段各组并未显示出差异性。
第 2 个时段，与假手术组比较，模型组的正确反应次数
显著降低，具有统计学意义(P ＜ 0． 05);醇高、醇中、醇
低、更年安组与模型组相比，均无显著性差异，不具有
统计学意义(P ＞ 0． 05)，说明玻璃苣醇提物及更年安
并未有很显著的影响作用。第 3 个时段，与假手术组
相比，模型组的小鼠正确反应次数明显减少，差异具有
统计学意义(P ＜ 0． 01);醇高、醇中、更年安组与模型
组相比，小鼠的正确反应次数明显增加，且差异具有统
计学意义(P ＜ 0． 01)，醇低剂量组与模型组相比，小鼠
的正确反应次数也有所增加，差异具有统计学意义
(P ＜ 0． 05);实验结果表明，各组均可以改善去势小鼠
学习训练 48h后的记忆保持能力，但是对逃避反射学
习能力的影响并不显著，结果见表 2。
表 2 对去势小鼠记忆功能的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
(g /kg)
第 1 时段
(次)
第 2 时段
(次)
第 3 时段
(次)
模型组 — 11． 30 ± 1． 49 13． 60 ± 1． 90▲ 11． 70 ± 1． 42▲▲
假手术组 — 12． 90 ± 1． 66 16． 10 ± 1． 20 15． 30 ± 1． 57
醇高 13． 30 11． 90 ± 1． 66 14． 80 ± 1． 48 14． 10 ± 2． 42＊＊
醇中 6． 65 12． 30 ± 1． 64 14． 60 ± 1． 43 14． 10 ± 1． 45＊＊
醇低 3． 33 11． 40 ± 1． 90 13． 70 ± 2． 00 12． 90 ± 1． 20*
更年安组 0． 35 12． 20 ± 1． 87 14． 80 ± 1． 48 14． 30 ± 1． 06＊＊
注:与假手术组比较，▲P ＜ 0． 05，▲▲P ＜ 0． 01;与模型组比较，* P ＜
0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
3． 3 对自主活动的影响
实验结果表明，与假手术组比较，模型组小鼠的活
动次数明显增多，具有统计学意义(P ＜ 0． 05);与模型
组相比，醇高剂量组能够降低去势小鼠自主活动的次
数，差异具有显著性(P ＜ 0. 01);醇中、更年安剂量组
与模型组比较也能降低去势小鼠自主活动次数，差异
具有统计学意义(P ＜ 0. 05)。说明玻璃苣醇提物对更
年期小鼠具有一定的镇静作用。结果见表 3。
表 3 对自主活动的影响(珋x ± s，n = 10)
组别 剂量(g /kg) 活动次数(珋x ± s)
模型对照组 — 247． 80 ± 53． 59▲
假手术组 — 139． 50 ± 40． 89
醇高 13． 3 160． 20 ± 43． 15＊＊
醇中 6． 65 196． 30 ± 71． 59*
醇低 3． 33 225． 70 ± 47． 60
更年安组 0． 35 187． 30 ± 76． 53*
注:与假手术组比较，▲P ＜ 0． 05;与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜
0． 01。
3． 4 对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响
实验结果表明，醇高、醇中剂量组与模型组比较，
均能不同程度的缩短模型小鼠的睡眠潜伏期、延长睡
眠时间，其中醇高剂量组与模型组比较差异具有显著
性(P ＜ 0． 01);提示玻璃苣醇提物可能有助于改善更
年期小鼠的睡眠情况。结果见表 4。
表 4 对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响(珋x ± s，n = 10)
组别 剂量(g /kg) 潜伏时间(min) 维持时间(min)
模型组 — 9． 20 ± 1． 62▲ 11． 80 ± 4． 54▲
假手术组 — 4． 20 ± 1． 03 26． 50 ± 6． 74
醇高 13． 3 6． 70 ± 1． 42＊＊ 18． 70 ± 4． 47＊＊
醇中 6． 65 7． 10 ± 1． 85＊＊ 17． 60 ± 7． 07*
醇低 3． 33 8． 10 ± 1． 52 14． 60 ± 4． 27
更年安组 0． 35 6． 40 ± 1． 84＊＊ 20． 20 ± 4． 78＊＊
注:与假手术组比较，▲P ＜ 0． 05;与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜
0． 01。
4 讨论
从绝经前期开始，妇女情绪变化很大，常易激动，
多泪，焦虑;易消沉，对生活失去信心，失去兴趣，过度
自尊或自卑，不能摆脱烦恼;多疑;失眠;记忆力减退，
注意力不集中;思维和言语分离，重者甚至发生轻生
念头。
学习记忆是大脑最基本也是最重要的高级神经功
能之一，是衡量人类智能发育的重要指标。动物对刺
激产生感知之后，在撤除刺激后能将已经感知的内容
追想起来的一种心理过程即所谓的记忆。动物能记忆
过去所获得的经验并以此为其基础，使之能在所处的
环境中的行为转变为适应性活动的机能就是学习。本
实验中采用 Y －型电迷宫测试训练来检测小鼠逃避条
件反射能力，包括被动逃避和主动逃避反射学习能力，
较为准确的衡量小鼠的近期及远期记忆水平的高低。
围绝经期由于雌激素水平的下降，植物神经功能
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紊乱，容易出现烦躁、失眠、易疲劳等症状，故测定玻璃
苣提取物的镇静、催眠功效以及牵引力实验。记忆力
减退、失眠、狂躁、抑郁等精神心理状态的改变是更年
期综合征最常见的变化。失眠是神经官能症的主要症
状，是大脑皮层处于兴奋状态之故。对戊巴比妥钠催
眠时间的影响实验是常用的筛选影响睡眠药物的方
法，对中枢兴奋药抑制作用也是常用的检验方法。通
过对去势小鼠的自主活动以及戊巴比妥钠诱导睡眠时
间的实验可以证明，玻璃苣提取物对更年期综合征具
有一定的镇静催眠作用。对去势小鼠牵引力的实验证
明 ，玻璃苣提取物有延长去势小鼠的牵引力时间的趋
势，表明玻璃苣提取物具有一定抗疲劳的作用。
参考文献:
［1］ 李美蓉．更年期和老年期妇女常见病的现代诊断与治疗［M］． 北
京:中国医药科技出版社，2001:8．
［2］ 曹泽毅．中华妇产科学［M］．北京:人民卫生出版社，1999:2274．
［3］ 叶碧绿，林巧燕．温州地区妇女绝经状况的调查［J］．中华妇产科
杂志，1997，32(9):557 － 558．
清火解毒法对实验小鼠的镇痛抗炎作用研究
钮晓红1，陆春红2，张晓洁2，许惠琴2*
(1．南京中医药大学附属南京市中西医结合医院，江苏 南京 210014;2．南京中医药大学，江苏 南京 210023)
摘 要:目的:从药理角度探讨清火解毒法的镇痛抗炎作用。方法:乙酸刺激至小鼠疼痛扭体实验、小鼠
热板实验，观察中药对小鼠疼痛的抑制作用;二甲苯致小鼠耳肿胀法，比较各组用药后小鼠耳壳肿胀度;
醋酸诱发小鼠毛细血管通透性增加，观察中药对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响。结果:可明显减少乙
酸所致小鼠的扭体反应次数( P ＜ 0． 01) 。明显提高小鼠的痛阈值( P ＜ 0． 01) 。能减轻小鼠耳壳肿胀度
及肿胀率( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) ;降低由醋酸引起的小鼠毛细血管通透性的增加( P ＜ 0． 05) 。结论:清热
解毒法具有一定的镇痛抗炎作用。
关键词:下肢丹毒; 清火解毒法; 药效学;镇痛;抗炎
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2014)05 － 0040 － 03
收稿日期:2014 － 04 － 10 修回日期:2014 － 05 － 17
基金项目:江苏省中医药科技项目(编号:LZ09092);南京市医学重点科
技发展项目(编号:ZKX09040)
作者简介:钮晓红(1959 －)，女，教授，主任医师。主要研究方向:中医
外科(丹毒、瘰疬、发颐、瘿瘤、乳痨)。
* 通讯作者:许惠琴(1961 －)，女，博士，教授。主要研究方向:中药药理。
清火解毒法是作者治疗下肢丹毒的经验之
法［1 － 3］，能迅速消肿止痛，减轻患者痛苦，减少复发。
本实验从药理角度探讨该疗法的作用机制，为临床应
用提供实验依据。
1 材料
1． 1 药品与试剂
清火解毒法内服方，临床人日用量为 156g /60kg，
为棕黑色液体，药液浓度按生药量计算为 0． 55g /mL，
临用前隔水浓缩成 2． 6g /mL 的药液。实验前用蒸馏
水稀释成 1． 3g /mL、0． 65g /mL 两种浓度作为中剂量、
小剂量给药用，大剂量采用 2． 6g /mL 的药液。4℃保
存备用。由南京市中西医结合医院提供。
清火解毒法熏蒸方，临床人用量为 139g /60kg，为
黄棕色液体，药液浓度按生药量计算为 0． 39g /mL，临
用前隔水浓缩成 2． 3g /mL 的药液。实验前用蒸馏水
稀释成 1． 15g /mL、0． 575g /mL 两种浓度作为中剂量、
小剂量给药用，大剂量采用 2． 3g /mL 的药液。4℃保
存备用。由南京市中西医结合医院提供。
阿司匹林肠溶片，100 片，25mg /片，南京白敬宇制
药有限责任公司，批号:101210。阿司匹林溶液:镇痛
实验每 1 片配成 12． 5mL 溶液，浓度 2mg /mL;抗炎实
验每 1 片配成 6mL溶液，浓度 4． 17mg /mL。
氯化钠，西陇化工股份有限公司，批号:100102。
生理盐水溶液:0． 9 克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，
稀释到 100mL，成 0． 9%生理盐水。
二甲苯，上海实验试剂有限公司，批号:20060519。
伊文思蓝，上海蓝秀科技发展有限公司，批号:
100308。伊文思蓝溶液:伊文思蓝蓝色结晶 0． 5g，溶
解在少量蒸馏水中，稀释到 100mL 成 0． 5%伊文思蓝
溶液。
冰醋 酸，南 京 化 学 试 剂 有 限 公 司，批 号:
10020810161。冰醋酸溶液:由冰醋酸 0． 6g，溶解在少
量蒸馏水中，稀释到 100mL成 0． 6%冰醋酸溶液。
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2014 年 10 月第 42 卷第 5 期
Vol. 42，No. 5，Oct． 2014