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HPLC测定灯心草中去氢厄弗酚含量



全 文 :[收稿日期] 20110721(009)
[基金项目] 新世纪优秀人才支持计划
[第一作者] 段琼,从事中药化学成分结构及生物活性分析和
体 内 药 物 分 析,Tel: 010-84738619, E-mail:
huangjm@ mail. bucm. edu. cn
[通讯作者] * 黄建梅,教授,硕士生导师,从事中药化学成分
结构及生物活性分析和体内药物分析,Tel:010-
84738619,E-mail:huangjm@ mail. bucm. edu. cn
HPLC测定灯心草中去氢厄弗酚含量
段琼,王杨,林婷婷,孙道涵,简伟杰,黄建梅 *
(北京中医药大学中药学院,北京 100102)
[摘要] 目的:建立灯心草中去氢厄弗酚含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法,Agilent HC-C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm,5 μm) ,流动相甲醇-水(65∶ 35) ,流速 1. 0 mL·min - 1,检测波长 270 nm,柱温 23 ℃。结果:去氢厄弗酚线性范围为
0. 017 4 ~ 0. 870 4 μg,与峰面积线性关系良好。平均加样回收率为 98. 3%,RSD 0. 61%。结论:所建立的方法分离效果好、操
作简便、准确、灵敏度高、重复性好,可用于灯心草中去氢厄弗酚的含量测定。
[关键词] 高效液相色潽法;灯心草;去氢厄弗酚;菲类;含量测定
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2011)20-0092-03
Determination of Dehydroeffusol in Juncus effusus by HPLC
DUAN Qiong,WANG Yang,LIN Ting-ting,SUN Dao-han,JIAN Wei-jie,HUANG Jian-mei*
(School of Chinese Materia Medica,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102,China)
[Abstract] Objective:To establish a method of determined the content of dehydroeffusol in Juncus effusus.
Method:The content of dehydroeffusol was determined by HPLC. The separation employed Agilent HC-C18 column
(4. 6 mm × 250 mm,5 μm)in 23 ℃,using methanol-water (65∶ 35)as mobile phase at flow rate was 1. 0 mL·
min - 1 and UV detection at 270 nm. Result:The method of validation parameters indicate a linear range of between
0. 017 4-0. 870 4 μg. The recovery was 98. 3%(RSD 0. 61%). Conclusion:The method is simple,accurate and
sensitive. It is adoptable for quantitative analysis of dehydroeffusol in J. effusus.
[Key words] HPLC;Juncus effusus L.;dehydroeffusol;phenanthrene;determination
灯心草为灯心草科灯心草属植物灯心草 Juncus
effusus L. 的干燥茎髓,具有清心火、利小便之功效,
用于心烦失眠,尿少涩痛,口舌生疮[1]。其主要含有
9,10-二氢菲类、菲类、芘类、三萜类、甘油酯类等成
分[2-11],本课题组通过小鼠高架十字迷宫模型及洞
板实验模型,证实灯心草中菲类成分去氢厄弗酚
(dehydroeffusol)具有镇静、抗焦虑作用,为灯心草清
心除烦作用的物质基础之一[12]。通过前期对灯心
草化学成分及指纹图谱研究发现,去氢厄弗酚在灯
心草药材中含量较高[13]。本试验利用高效液相色
谱法,建立了灯心草中去氢厄弗酚的含量测定方法,
并对不同批次的灯心草药材中去氢厄弗酚含量进行
测定,为灯心草药材的质量控制及开发利用提供了
依据。
1 仪器与试药
SARTORIUS AG BS110S 型电子天平(德国赛多
利斯公司) ,METTLER AE-240 型电子天平(德国梅
特勒-托利多公司) ,TU-1901 型双光束紫外-可见分
光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司) ,BL-
100 型高速多功能粉碎机(浙江省永康市五金有限
公司) ,岛津 LC20A 型高效液相色谱仪(LC-20AT 高
效泵,SPD-20A 检测器,LC solution 工作站,日本岛
津公司) ,Agilent HC-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm,5
μm) ,去 氢 厄 弗 酚 对 照 品 (实 验 室 自 制,含 量
·29·
第 17 卷第 20 期
2011 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17,No. 20
Ope.,2011
97. 20%) ,甲醇为色谱纯,水为去离子水,从各地药
材市场购买灯心草药材共 11 批,经北京中医药大学
中药学院生药系杨瑶珺副教授鉴定均为灯心草 J.
effusus 的干燥茎髓。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent HC-C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm,5 μm) ,流动相甲醇-水(65 ∶ 35) ,流速 1. 0
mL·min - 1,检测波长 270 nm,柱温 23 ℃,进样量
10 μL。
A. 对照品;B. 供试品;1. 去氢厄弗酚
图 1 去氢厄弗酚 HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取去氢厄弗酚对
照品 21. 76 mg,加甲醇适量使溶解,置 250 mL 量瓶
中甲醇定容,得 87. 04 mg·L - 1的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取供试品粉碎后过 60 目
筛,混匀,称取粉末 0. 3 g,精密称定,置 100 mL 具塞
锥形瓶中,精密加入甲醇 25 mL,密塞,称定质量,超
声处理(功率 240 W,频率 40 kHz)30 min,放冷,称
定质量,甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤
液,即得。
2. 4 线性关系考察 精密量取去氢厄弗酚对照品
溶液 0. 2,0. 5,1,3,5,8 mL 分别置于 10 mL 量
瓶,定 容 稀 释 至 刻 度 线,得 1. 74,4. 35,8. 70,
26. 11,43. 52,69. 63,87. 04 mg·L - 1的 7 份去氢厄
弗酚溶液。按照拟定的色谱条件测定,以峰面积积
分值为纵坐标,去氢厄弗酚对照品量为横坐标绘制
标准曲线,计算得回归方程 Y = 9. 075 × 106X +
19003(r = 0. 999 7) ,去氢厄弗酚的线性范围是
0. 017 4 ~ 0. 870 4 μg。
2. 5 精密度试验 取去氢厄弗酚溶液(26. 11 mg·
L - 1) ,依上述方法,连续进样 5 次,测定峰面积,RSD
1. 076%,表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一对照品及供试品(购自贵
州贵阳)溶液,按照所确定的测定方法分别于 0,3,
6,9,12,18,24 h 按照上述方法进行测定,记录去
氢厄弗酚峰面积积分值,测得对照品 RSD 2. 357%,
供试品 RSD 1. 089%,表明对照品及供试品溶液在
24 h 内稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取同一批供试品(购自贵州贵
阳)粉末 0. 24,0. 30,0. 36 g 各 3 份,精密称定,按
2. 3 项下的方法操作,制成供试品溶液,按上述检测
方法测定,供试品的平均含量为 2. 40 mg·g - 1,
RSD 1. 27%。
2. 8 加样回收率试验 取供试品(购自贵州贵阳)
精密称定 9 份,每份 0. 15 g,每 3 份为 1 组,分别加
入高、中、低质量浓度的去氢厄弗酚对照品溶液,按
2. 3 项下的方法制备,制成供试品溶液,按上述检测
方法测定,根据测得量和加入量计算回收率。结果
去氢厄弗酚的平均回收率 98. 3%(RSD 0. 61%)。
表 1 去氢厄弗酚加样回收试验
称样量
/ g
供试品中含量
/mg
加入量
/mg
实测量
/mg
回收率
/%
0. 150 0 0. 360 0 0. 203 8 0. 560 0 98. 1
0. 150 0 0. 360 0 0. 203 8 0. 561 1 98. 6
0. 150 0 0. 360 0 0. 203 8 0. 559 9 98. 1
0. 150 5 0. 361 2 0. 336 5 0. 688 1 97. 1
0. 150 9 0. 362 2 0. 336 5 0. 691 6 97. 9
0. 148 9 0. 357 4 0. 336 5 0. 690 4 99. 0
0. 149 9 0. 359 8 0. 474 0 0. 825 3 98. 2
0. 150 4 0. 361 0 0. 474 0 0. 829 7 98. 9
0. 150 9 0. 362 2 0. 474 0 0. 830 6 98. 8
2. 9 供试品含量测定 取购自不同购买地的灯心草
样品按前述 2. 3 项下的方法操作,制成供试品溶液,
按上述检测方法测定,计算供试品的含量(表 2)。
表 2 灯心草供试品去氢厄弗酚含量测定(n = 2) mg·g - 1
No. 购买地 产地 去氢厄弗酚
1 江西 江西 2. 12
2 安徽亳州 四川 2. 10
3 广东广州 广东 2. 60
4 黑龙江齐齐哈尔 河南 5. 47
5 湖南张家界 湖北 0. 54
6 河北安国 江西 1. 32
7 贵州贵阳 四川 2. 44
8 陕西西安 安徽 0. 75
9 云南 未知 3. 49
10 福建古田 福建 2. 01
11 四川成都 四川 0. 69
3 讨论
去氢厄弗酚为 9,10-二氢菲类,具有联苯骨架结
·39·
段琼,等:HPLC 测定灯心草中去氢厄弗酚含量
构。通过 UV-vis 全波长扫描对去氢厄弗酚标准品
进行测定,最大吸收波长为 270 nm 左右,故选择 270
nm 作为检测波长。
考察了甲醇-水(80 ∶ 20) ,(70 ∶ 30) ,(66 ∶ 34) ,
(65∶ 35) ,(64 ∶ 36)5 种溶剂系统,当流动相为甲醇-
水(65 ∶ 35)时,去氢厄弗酚与其他物质色谱峰分离
度为 2. 0,保留时间 13. 8 min,理论塔板数大于 3
000,具有较好分离度及较短的保留时间,故选择甲
醇-水(65∶ 35)作为最终的流动相。
市售灯心草中去氢厄弗酚的含量变动范围比较
大,从 0. 54 mg·g - 1到 5. 47 mg·g - 1。尽管含量不一,
但主要集中在 2 个范围内,分别为(2. 25 ± 0. 25)mg
·g - 1和(0. 66 ± 0. 11)mg·g - 1。灯心草中去氢厄弗
酚的含量差异可能与灯心草生长环境、采收时间及
存放方法及时间有关,其影响因素有待进一步的
研究。
[参考文献]
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[责任编辑 蔡仲德]
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第 17 卷第 20 期
2011 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17,No. 20
Ope.,2011