全 文 ：中 国 民 族 医 药 杂 志 2 ( ) 1 0年 10月 第 1 0期
呼伦贝尔地产波叶大黄中大黄素和大黄酚的含量测定分析
鲍劲松 ’
( 1
.呼伦 贝尔市人民 医院 ,
2
. 内蒙古 医学院药学院 ,
刘 德旺 “
内蒙古 呼伦 贝尔市 02 10 ;8
内蒙古 呼和浩特市 01 0 18 )
摘 要 : 目的 : 采 用 高效 液相 色谱法测 定 呼伦贝 尔地产波叶 大黄中 大黄素和 大黄酚 的含量 。 结 果 : 加样 回 收率为 97 . 94 % 和
l ()l
.
86 %
,
R SD 为 1 . 9 2 % 和 0 . 83 % 。 结论 : 方法可 行 , 重现性好 。
关键词 :反 相 高效 液 相 色潜 法 ; 波 叶大黄 ; 大黄素 ; 大黄酚含量 测定
中图分类号 : R295 .3 文献标识码 : B
波叶大黄为要科植物波叶大黄 Rh e 卜 m fra nz en bac hi
M 林 nt 的干燥根茎 。 据文献「’ ]记载 , 该药材中主要的有效活
性成分为葱醒类化学成分大黄素与大黄酚 , 参照 《中国药
典 》20 5 年版一部相关品种 12 }项下方法 , 建立高效液相色
谱法测定其含量 , 检测方法具有分离效果好 、 灵敏 、 准确
等优点 , 结果满意 。
l 对照 品与样 品来源
1
.
1 对照 品 :大黄素对照 品 (批号 : 07 5 6一20 1 10 , 供含量测定
用 ) 、 大黄酚对照品 (批号 : 1 07 9 6一 20 5 14 , 供含量测定用 ) ,
中国药品生 物制品检定所提供 。
1
.
2 样品 : l 号 、 2 号样 品 自采于呼伦贝尔市 ;3 号样 品自采
于满洲 里市 。
2 仪 器与试剂
2 一 仪器 : s H IM A D z v Le 一 l o A v p , L e 一 z o A T v p 型泵 , S C L一 l o A vP
型控制器 , SP D一 IOA VP 型检测器 , C L A sS 一 v P 色谱工作站 。
s art vo i协 , B P 12 l s ( d = o
.
l m g )
,
B咫 l l D ( d 二 0 . 0 1叫 )电 子分
析天平 。 H M 3 1 20B 超声波清洗器 ( 12 0w , 4 0K lZ ; 天津市东
科仪器设备有限公司 ) 。
.2 2 试剂 : 甲醇为色谱纯 ,水为高纯水 。 其它试剂为分析纯 。
3 色 谱条件
,
.
1流动相 : 参照 《中 国药典 》 2 0 0 5 年版一部 “ 大黄 ” 项下流
动相条件 , 以 甲醇 一 0 . 1% 磷酸溶液 (85 : 1 5) 作 为流动相 ,
柱温 2 5 ℃ , 流速 1 . o rnl/ 而n , 进样量 10 林 l 。
3
.
2 检测 波长 分别 取大黄 素和 大 黄酚对 照 品 溶液 , 在
19 0 一 7 0( 玩m 进行光谱扫描 , 结果大黄素和大黄酚在 254 nl
处均有最大吸收 , 故选择 25 4 lun 为检测波长 。
3
.
3 对照 品溶液的制备 :精密称取大黄素 , 大黄酚对照 品适
量 , 分别加 甲醇制成每 1耐 含大黄 素 10 协 g 、 大黄酚 40 协 g
的溶液 , 即得 。
3
.
4 供试品溶液的制备 :取本品粉末 (过四号筛 )约 0 . 3 9 , 精
密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加人甲醇 25 祖 , 称定重量 ,
加热 回流 1 小时 , 放冷 , 再称定重量 , 用 甲醇补 足减 失的重
量 , 摇匀 , 滤过 。 精密量取续滤液 5耐 , 置烧瓶 中 , 挥去溶
文章编号 : 10 0企6 8 10 ( 2 0 10 ) 1 0一 0 0 7 4一 0 2
剂 , 加 8% 盐酸溶液 10 rn l , 超声处理 2 分钟 , 再加三氯 甲烷
10 inl
, 加热回流 1 小时 , 放冷 , 置分液漏斗 中 , 用少量 三氯
甲烷洗涤容器 , 并人分液漏斗 中 , 分取三氯 甲烷层 , 酸液
再用三氯甲烷提取 3 次 , 每次 10 回 , 合并三氯甲烷液 , 减
压 回收溶剂至干 , 残渣加甲醇使溶解 , 转移至 10rn l 量瓶
中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液 , 即得 。
4 方法 学考察
4
.
1 线性关系考察
4
.
1
.
1 精密称取大黄素对照品 2 . 35 m g , 置 10 耐 量瓶中 , 加
甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 。 精密吸取 1 . o inl 、 2 . 0间 、
4
.
Oirl
、
8
.
O n l l
、
10m l
, 分别置 10 ha 量瓶中 , 加 甲醇至刻度 . 摇
匀 , 按上述色谱条件测定 。 以峰面积值对进样量进行回归
分析 , 结果大黄酚在 0 . 0 235 卜 g 一 0 . 235 林 g 范围 内呈 良好线
性关 系 。 回 归方程为 Y = 2 . 96 564 1 / l 0’X + 1 . 3 7 1 x 10 , , r = 1 ·
〔拟又〕( X 为进样量 卜 g , Y 为峰面积积分值 ) 。 结果 见表 1
4
.
1
.
2 精密称取大黄酚对照品 1 . 83 m g , 置 25 耐 量瓶 中 , 加
甲醇溶解稀释至刻度 , 摇匀 。 精密吸取 1 .加让 、 .2 Om l 、 3 . om l 、 .4 0
inl
、
.5 Om l分别置 5耐 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 , 按上述色谱
条件测定 。 以峰面积值对进样量进行回归分析 , 结果大黄酚在
0
.
14 64 卜 g 一 .0 73 20 协 g 范围 内呈 良好线性关系 。 回归方程为
Y = 4
.
7 4 2 0 10 x 1 0`X + 1 . 2 9 5 4 x 104 , 。 0 . 9 9 9 9 ( X 为进样量 卜 g ,
Y 为峰面积积分值 ) 。 结果见表 2 。
表 , 大黄素标准曲线数值表
对照品量 (卜 g ) 0 . 0 2 3 5 0 .以 7 0 0 . 09 4 0 0 . 1 8 52 0 . 2 35 0
峰面积积分值 69 06 6 14 26 9 3 2 8 0 7 3 9 5 5 8 9 5 0 6 9 83 14
表 2 大黄酚标准 曲线数值表
对照品量 (此 )
峰面积积分值
0
.
14 64 0
.
2 9 2 8 0
.
4 3 9 2 0 5 8 5 6 .0 7 3 2 0
7 1 1 3 9 3 13 8 5 9 9 5 2 09 8 4 67 2 8 1 36 5 6 34 6 8 7 14
4
.
2 稳定性试验 : 取用 l 号样品制备的供试品 溶液 , 分别
于 h0 、 Zh 、 4 h 、 s h 、 12 h 进样测定 。 结果见表 3 。
DOI : 10. 16041 /j . cnki . cn15 -1175. 2010. 10. 037
2 () 1) (年 0 1月 第 10期 中 国 民 族 医 药 杂 志
表 3稳定性试验结果
时间 2 小时 S D R (%)
进样 ro卜 l, 注人液相色谱仪 。 测得结果表明样品 中其他
组分对大黄素 、 大黄酚无干扰 。 见附图 。
大黄素
大黄酚
O小时
2 7 84 5 8 2 7 7 9 7
4 小时
2 7 7 6 9 1
8小时
2 7 8 7 2 1
12小时
2 75 2 35 0
.
5 0
1 7X() 2 89 16 9 2 7 7 6 1 6 8 1 1 7 3 16 8 4 2 46 16 9 7 5 5 8 0
.
4 9
从表中数据可见 , 大黄素和大黄酚在 12 小时内的峰
面积积分值基本稳定 。
4
.
3 精密度试验 :取 用 1 号样品制备的供试品溶液 5 份 ,
连续进样 5 次 , 测定 大黄素 和大黄 酚的峰面积积分值 。 测
定结果 R S D 分别为 0 . 5 0 , 0 , 4 9 。
4
.
4 贡复性试验 : 取 l 号样 品粉末 5 份 , 每份取样 0 . 3 9 , 精
密称定 , 分别按拟定方法制备供试品溶液与测定 。 结果大
黄素平均含量为 1 . 526 m吮 , R s D 为 .0 54 % ; 大黄酚平均
含量为 5 . 7 3 7 m吮 , R s D 为 1 . 89 % 。 重复性试验表明该方
法可行 。
4
.
5 加样回收试验 :取已知含量的样品 5份 , 各取约 。 . 159 , 精密
称定 ,分别精密加人对照品溶液 I inl (含大黄素 .0 2 4 0m岁inl 、大黄
酚 .0 93 5m以n il ) , 分别按拟定方法制备供试品溶液并测定每份含
量 , 计算 同收率 。 结果见表 4 、表 5 。
表 4 大黄素加样 回收试验结果
序 取样 供试品含 对照品加 测得总 回收 平均回 RS D
号 量 ( g ) 量 ( m g ) 人量 ( m g ) 量 (吨 ) 率 (% ) 收率 (% ) (% )
1 0
.
15 2 4 0 2 3 2 5 0
.
2 4 0 0
.
4 6 3 8 9 6
.
37
2 0
.
15 3 6 0
.
2 3 4 3 0 2 4 0 0
.
4 6 7 4 9 7
.
1 2
3 0
.
15 0 2 0
.
2 2 9 2 0
.
24 0 0
.
4 60 8 9 6
.
5 0 9 7
.
9 4 1
.
9 2
4 0
.
15 3 2 0
.
2 3 3 7 0
.
2 4 0 0
.
4 7 1 3 9 9
.
X()
5 0
.
14 9 1 0
.
2 2 7 5 0
.
2 4 0 0
.
4 6 9 3 l 0()
.
7 5
表 5 大黄酚加样回收试验结果
序 取样 供试品含 对照品加 测得总 回收 平均回 R SD
号 量`g ) 量 〔m g ) 入 量 ( m g ) 量 ( m g ) 率 ( % ) 收率 〔% ) (% )
1 0
.
1524 0
.
87 4 3 0
.
9 3 5 1
.
8 13 3 l 0()
.
4 2
2 仪 15 3 6 0 . 8 8 12 0 9 3 5 1一8 3 8 4 1 02
.
3 7
3 0
.
150 2 0
.
86 1 8 0
.
9 3 5 1
.
8 2 0 5 10 2
.
5 3 10 1
.
8 6 0
.
8 3
4 0
.
153 2 0
.
87 89 0
.
9 3 5 1
.
83 0 8 1 0 1
.
80
5 0
.
149 1 0
.
8 55 3 0
.
9 3 5 1
.
8 1 10 1 02
.
2 1
5 样品含量 测定
按拟定方法 与试验条件 , 对 3 份样品进行含量测定 。
结果 见表 6
表 6 样 品测定结果
序号 取样量 峰面积平均积分值 样品含量 (
m留g )
( g ) 大黄素 大黄酚 大黄素 大黄酚
0 3 0 9 2 2 8 155 4 170X() 7 8 1 5 5 5
.
9 1
0
.
30 0 5 2 7 4 57 5 164 88 6 1 1
.
57 5月2
0 3 0 0 3 2 85 5 4 4 16 09 4 4 6 1
.
6 0 5
.
7 7
总量
n z岁g
7
.
4 6
7
一
4 8
7
.
3 7
图 4 溶剂的 日户LC 图谱
6
.
2 在选定的条件下 , 大黄酚与大黄素和供试 品中其他组
分色谱峰基线分离 , 对照品与其相邻色谱峰的分离度大于
2
.
;0 按大黄酚峰计算 , 理论塔板数 ( N )为 4 (以 ) 以上 。
6
.
3 呼伦贝尔地产波叶大黄药源丰富 , 当地蒙医也经常习
用 。 本试验根据查阅到 的文献对其做了含量分析研究 。
根据三个产地样品的含量测定结果 , 表明 该品种确实具有
同法定标准收载品种相同的有效成分 。 为今后该药材 的
标准制定奠定了基础 。
参考文 献
[ 1〕王银 , 刘英俊 . 呼伦 贝 尔植物检索表 吉林科 学技术 出
版社 19 3 : 4 .
〔2」国家药典委员会 中国药典一部 .化学工业 出版社 20 5 : 16
讨 论
专属性考察 : 取供试 品溶液 、 对照品溶液 、 溶剂 , 分别 2 0 10 年 9 月 14 日收稿