全 文 ：基金项目:1. 贵州省中医药管理局项目，项目编号:［2011］QZYY 55 号 ;2. 大学生创业基金项目，项目编号:［2012］03 号。
作者简介:唐秀胜，男，贵阳中医学院 2014 级在读硕士研究生，研究方向:中药质量控制与新药开发。
通讯作者:靳凤云，女，教授，硕士研究生导师，研究方向:中药质量控制与新药开发，E － mail:jinfengyun01@ 163. com
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中药
研究
HPLC法测定贵州苗药铁筷子中东
莨菪内酯的含量
唐秀胜，靳凤云，章 誉，王祥培，白英鸽
(贵阳中医学院，贵州贵阳 550002)
摘 要:目的:建立反相高效液相色潽法(HPLC)测定铁筷子中东莨菪内酯含量的方法。方法:色谱
柱为 Agilent HC － C18 (4. 6 × 250 mm，5μm);流动相为甲醇 －水(25:75);检测波长为 345 nm;流速为
1mL /min;柱温为 30℃。结果:东莨菪内酯在 0. 0484 ～ 0. 4356μg 范围内线性关系良好，r = 0. 9996，平均
加样回收率为 99. 71。结论:该方法操作简便、准确，可测定铁筷子中东莨菪内酯的含量。
关键词:铁筷子;东莨菪内酯;高效液相色潽法
Doi:10. 3969 / j. issn. 1002 － 1108. 2015. 06. 005
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:B 文章编号:1002 － 1108(2015)06 － 0024 － 04
Determining the Content of Scopoletin in Chimonanthus
Praecox of Miao Ethnomedicine by HPLC
TANG Xiu-sheng，JIN Feng-yun，ZHANG Yu，WANG Xiang-pei，BAI Ying-ge
(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，Gyuzhou China)
Abstract:Objective:To establish the method for determining the content of scopo-letin in Chimonanthus
praecox by ＲP HPLC. Methods:Column:AgilentHC － C18(4. 6x250mm，5um);mobile phase:methyl alco-
hol ———water(25:75). The detection wavelength was 345 nm;the flow rate was 1mL /min;and the column
temperature was 30℃ . Ｒesults:Nice linear correlation existed when the scopoletin was within the range of
0. 0484 ～ 0. 4356 μg，r = 0. 9996. The average recovery rate was 99. 71%. Conclusion:This method is simple
and precise，which can be used to determine the content of scopoletin in Chimonanthus praecox
Key words:Chimonanthus praecox;Scopoletin;HPLC
铁筷子为蜡梅科蜡梅属植物蜡梅 Chimonan-
thus praecox(L. )link. 及山蜡梅 C. nitens oliv的干
燥细根，为贵州省苗药，收载于 2003 年版《贵州省
中药材、民族药材质量标准》中，又名岩马桑，臭蜡
梅，野蜡梅等，具清热解毒、活血散淤、消肿止痛之
功效。主治哮喘、劳伤咳嗽、胃痛、膀肮炎、尿道
·42·
第 37 卷 第 6 期
2015 年 11 月
贵阳中医学院学报
Journal of Guiyang College of TCM
No. 6 Vol. 37
November 2015
炎、疮疖肿毒及跌打损伤等症［1］。记载始于《救荒
本草》，谓:“多生南方，今北土亦有之，其树枝条颇
似季，其叶似桃叶而宽大，纹微粗，开淡黄花。”《纲
目》亦载入药，曰:“解暑，生津。”对其描述为:“蜡
梅小树，丛枝尖叶……腊月开小花而香淡。”［2］在
文献报道中发现苗药铁筷子中含有香豆素成
分［3］，东莨菪内酯能快速解决动脉粥样硬化引起
的心肌缺血症状，并能促进抗血管生成作用，减少
关节炎大鼠滑膜组织中血管内皮生长因子数量而
且有利于控制碱性纤维细胞生长因子的生成，临
床上主要用于治疗心血管疾病、抗肿瘤、抗关节炎
等，疗效突出，应用前景广阔［4］。由于《贵州省中
药材、民族药材质量标准》中铁筷子仅有显微鉴别
和薄层鉴别两项，未建立含量测定项，质量可控性
较差。近年来以铁筷子为原料开发的药品逐渐增
加，为促进我省民族药的研究和开发，本实验采用
HPLC法测定铁筷子中东莨菪内酯成分的含量，方
法简捷稳定，现报道如下。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
Agilent1100 高效液相色谱仪(美国 AGILEN-
WC公司、Agilent1100)，超声波清洗机(天津奥泰
公司、HS10260D)，电子分析天平(瑞士梅特公司、
XS205)，水浴锅(常州澳华仪器有限公司 HH －
4)。
1. 2 试药
东莨菪内酯对照品(中国生物制品鉴定所，批
号 110768 － 200504)，甲醇为色谱纯，水为哇哈哈
纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)。
1. 3 样品
收集不同产地的铁筷子药材 10 份，由贵阳中
医学院生药教研室王祥培教授鉴定为蜡梅科植物
蜡梅 Chimonanthus praecox(L. )link. 的根茎。药
材晾干后粉碎，过 65 目筛，粉末放置备用。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:Agilent HC － C18 (4. 6 × 250 mm，
5μm)，流动相:甲醇 －水(25:75)，检测波长为 345
nm，流速为 1 mL /min，柱温:30℃，进样量:5 μL。
2. 2 对照品溶液制备
精密称取东莨菪内酯对照品 9. 547 mg 置于
50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，制成每 mL 含
0. 19094 mg的对照品浓溶液备用。精密吸取对照
品浓溶液 2. 5mL 于 10mL 容量瓶中，加入甲醇稀
释至刻度，制成每 mL含 0. 0484 mg 的东莨菪内酯
对照品溶液，即得。
2. 3 供试品溶液制备
精密称取铁筷子药材粉末 1. 0g，置于 100 mL
圆底烧瓶中，精密加入 25 mL 甲醇，称定重量，
70℃回流提取 30min，放冷，用甲醇补足减失重量，
摇匀，过滤，取续滤液，过微孔滤膜(0. 45μm)，
即得。
2. 4 系统适用性实验
分别抽取东莨菪内酯对照品溶液、供试品溶
液和空白对照溶液注入高效液相色谱仪，记录色
谱图。结果见图 1、2、3。
图 1 东莨菪内酯对照品色谱图
·52·第 6 期 唐秀胜，靳凤云，章 誉，等． HPLC法测定贵州苗药铁筷子中东莨菪内酯的含量
图 2 供试品色谱图
图 3 空白对照色谱图
2. 5 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液 1μL、3μL、5μL、
7μL、9μL进样，在“2. 1 色谱条件”下测定，以峰面
积积分值为纵坐标(Y)，以东莨菪内酯进样量
(μg)为横坐标(X)进行线性回归，回归方程为 Y
= 172. 21X － 4. 41，Ｒ2 = 0. 9996(n = 5)，东莨菪
内酯在 0. 0484 ～ 0. 4356μg 范围内线性关系良好。
见图 4。
图 4 东莨菪内酯对照品标准曲线图
2. 6 精密度试验
精密吸取对照品溶液 5μL，注入高效液相色
谱仪，重复进样 6 次，测定峰面积，ＲSD 为
1. 37%。结果表明本方法精密度良好。
2. 7 重复性试验
取同一批药材(P1)6 份，按照供试品溶液制
备方法制备样品液，连续进样 6 次，测得峰面积，
ＲSD为 0. 38%。结果表明该方法重复性良好。
2. 8 稳定性试验
精密吸取供试品溶液，在室温条件下放置，分
别于第 0、2 、4 、8 、12 、16 、24 h 各测定 1 次每次
进样 5μL，计算其峰面积的 ＲSD 为 0. 68%。结果
表明供试品溶液在室温下 24 h内稳定。
2. 9 加样回收率试验
平行取同一批(P5)药材粉末 6 份，每份 0. 5 g
精密称定，分别精确加入 0. 1936mg /mL 的东莨菪
内酯对照品溶液 3mL，再加入甲醇 22mL，按“2. 3
项”下方法制备各供试品溶液，测定东莨菪内酯的
含量，回收率为 99. 71%，ＲSD 为 1. 4%。回收率
=(实测值 －样品中含量)/ 对照品加入量，结果
见表 1。
·62· 贵阳中医学院学报 第 37 卷
表 1 回收率试验结果
编号
称样量
(g)
样品中含量
(mg)
对照品加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
ＲSD
(%)
1 0. 5000 0. 5639 1. 1408 99. 34
2 0. 4998 0. 5636 1. 1302 97. 54
3 0. 4998 0. 5636
0. 5808
1. 1437 99. 88
99. 71 1. 4
4 0. 5002 0. 5641 1. 1549 101. 73
5 0. 4997 0. 5635 1. 1401 99. 27
6 0. 5001 0. 5640 1. 1476 100. 49
2. 10 样品测定
依选定的供试品制备方法处理 10 批铁筷子
药材(P1 － P10)，在上述色谱条件下测定药材中东
莨菪内酯的含量，结果见表 2。
表 2 铁筷子中东莨菪内酯含量测定结果
样品 产地
含量
(mg /g)
百分含量
(%)
平均百分
含量 (%)
P1 贵州麻江 1. 1266 0. 113 0. 089
P2 贵阳花溪 0. 9104 0. 091
P3 贵州龙里 1. 7187 0. 172
P4 贵州修文 0. 5479 0. 055
P5 贵州大方 0. 6085 0. 061
P6 贵州凤冈 1. 0580 0. 106
P7 贵州关岭 0. 3584 0. 036
P8 贵州黔西 0. 5708 0. 057
P9 贵阳乌当 1. 4186 0. 142
P10 贵州清镇 0. 5519 0. 055
3 讨论
提取溶剂考察了甲醇和无水乙醇两种提取溶
剂，甲醇的提取效果较好，故最终选用甲醇为提取
溶剂，并对提取方式、提取时间、提取次数等进行
了考察。色谱条件考察了不同比例的甲醇 －水系
统，由于甲醇 －水(25:75)可以使东莨菪内酯对照
品得到较好分离，且峰型较好，故确定该比例流动
相，并对检测波长、柱温等进行了考察，最终确定
了本实验方法。
实验中共测定了贵州省内 10 个不同产地的
铁筷子药材中东莨菪内酯的含量，结果表明，不同
产地铁筷子中东莨菪内酯含量有所差异，其原因
有待进一步研究。
本实验首次将东莨菪内酯作为铁筷子的含量
测定，为铁筷子提供了一个新的质量控制指标，并
为铁筷子的质量标准的提升提供了实验依据。
参考文献
［1］ 贵州省药品监督管理局 . 贵州省中药材、民族药材
质量标准［S］. 贵阳:贵州科学技术出版社，
2003:236.
［2］ 邱德文，杜江，夏同珩，等 . 中华本草苗药卷彩色图
谱［M］. 北京:中医古籍出版社，2006:457.
［3］ 李东 . 贵州中草药铁筷子和鹿蹄草化学成分研究
［D］. 贵阳:贵州大学，2008.
［4］ 尹国兴，尹海鹏，郭宝芳，等 . 东莨菪内酯的药理活
性和药动学研究进展［J］. 中国医药指南，2014，12
(5):46.
(收稿日期:2015 － 05 － 11)
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