全 文 ：271
反相高效液相色谱法
测定东方草莓中儿茶素的含量
李 蓉1，刘海青2，杨春涛1，江志勇1，郭俊明1，骆桂法2，黄相中1，*
( 1.云南民族大学民族药资源化学国家民委－教育部重点实验室，云南昆明 650500;
2.青海省食品药品检验所，青海西宁 810016)
摘 要:建立东方草莓中( + ) －儿茶素的含量测定方法。采用 Agilent ZOＲBAX SB－C18色谱柱( 4.6mm × 150mm，5μm)
分离;以乙腈－0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱，流速为 1mL /min，检测波长为 280nm，对 10 批东方草莓中的( + ) －
儿茶素进行了含量测定。结果表明: ( + ) －儿茶素的保留时间为 14.543min，其线性范围为 0.0512～0.6400μg ( Ｒ2 =
0.9999) ; 加样回收率为 99.70% ( ＲSD 2.67% ) 。所建方法操作简单，稳定可靠，可用于东方草莓的质量评价。
关键词:东方草莓，( + ) －儿茶素，反相高效液相色潽法，含量测定，质量控制
Content determination of catechin in
Fragaria orientalis Lozinsk. by ＲP－HPLC
LI Ｒong1，LIU Hai－qing2，YANG Chun－tao1，JIANG Zhi－yong1，GUO Jun－ming1，
LUO Gui－fa2，HUANG Xiang－zhong1，*
( 1.Key Laboratory of National Medicine Supported Jointly By State Ethnic Affairs Commission and
Ministry of Education，Yunnan Minzu University，Kunming 650500，China;
2.Qinghai Provincial Institute for Food and Drug Control，Xining 810016，China)
Abstract: The purpose was to establish the method of ( + ) － catechin in Fragaria orientalis Lozinsk.The samples
were performed on Agilent ZOＲBAX SB － C18 ( 4.6mm × 150mm，5μm ) column，eluted gradiently with mixture of
acetonitrile－0.1% phosphate solution at a flow rate of 1mL/min，and detected at 280nm.With this method，( + ) －
catechin in 10 batches of F.orientalis Lozinsk.was determined.Ｒesults showed that ( + ) － catechin retention time
was 14.543min.The calibration curves had good linearity within the range of 0.0512 ～ 0.6400μg ( Ｒ2 = 0.9999 ) .The
average recovery of ( + ) － catechin was 99.70% ( ＲSD 2.67% ) .The method was easy and stable，and could be
used for the quantitative analysis of F.orientalis Lozinsk.
Key words: Fragaria orientalis Lozinsk.; ( + ) －catechin; ＲP－HPLC; assay; quality control
中图分类号:TS207.3 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2014)17－0271－04
doi:10． 13386 / j． issn1002 － 0306． 2014． 17． 051
收稿日期:2013－12－25 * 通讯联系人
作者简介:李蓉( 1988－ ) ，女，硕士研究生，主要从事天然药物活性成
分及质量控制研究。
基金项目: 国家药典委员会项目 ( M11 ) ; 国家自然科学基金项目
( 21262047) ;云南民族大学传统傣药药用物质基础研究创
新团队。
东方草莓 Fragaria orientalis Lozinsk.为蔷薇科
(Ｒosaceae)草莓属植物，俗称野草莓，为药食同源性
药材。在我国主要分布于青海、甘肃、四川、陕西、山
西以及东北、华中各省，朝鲜、蒙古及苏联远东地区
也有分布［1］。东方草莓藏药名为“志达萨增”，干燥
全草入药，常用于血热性化浓症，肺胃瘀血，黄水病
脓疡［2］，为藏药经典验方“七十味珍珠丸(然钠桑
培)”［3］、“二十五味珍珠丸”［4］、“骨质增生乙组合(压
迫神经引起疼痛)”、“八味秦皮丸”［5］等的重要成分。
长久以来，东方草莓作为藏药中的常用重要品
种，缺少统一的质量标准衡定其质量，为保证其用药
安全与药效，本课题组对东方草莓的质量进行了深
入研究。目前尚未见有关东方草莓化学成分的具体
报道。本课题组对其进行化学成分研究，经分离、鉴
定发现(+)－儿茶素为东方草莓中的一主要化学成
分。(+)－儿茶素具有抗病毒、抗癌、降血糖、抗菌、
清除自由基等作用［6－10］。因此，可将(+)－儿茶素作
为东方草莓中的特征性成分。
近年来，已有文献报道用高效液相法测定绿茶、
杜仲、苦楝皮中儿茶素的含量［11－15］，但目前未见有关
东方草莓中儿茶素含量测定的相关报道。本实验用
高效液相色谱法建立了东方草莓中(+)－儿茶素的
含量测定方法，为东方草莓的质量控制研究提供科
学依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
(+)－儿茶素对照品 中国药品生物制品鉴定
272
所提供，批号为 11877－201203，纯度为 97.20%;药
材 本实验中使用了 7 个产地的 10 批药材，见表
1;乙腈、甲醇 色谱纯;磷酸 分析纯;水 超
纯水。
表 1 10 批不同来源的东方草莓药材
Table 1 F. orientalis Lozinsk. from 10 different sources
编号 种类 来源
1 东方草莓 西藏
2 东方草莓 西藏
3 东方草莓 成都荷花池药材市场
4 东方草莓 成都荷花池药材市场
5 东方草莓 青海八一路
6 东方草莓 青海八一路
7 蛇莓 青海海北
8 东方草莓 西藏自治区藏药厂
9 东方草莓 青海省藏区医院
10 蛇莓 青海互助北山
Agilent 1200 高效液相色谱仪、Agilent ZOＲBAX
SB－C18色谱柱(4.6mm × 150mm，5μm) 安捷伦科技
有限公司;DIONEX ULtiMate 3000 高效液相色谱
仪 戴安公司;Waters XTerra ＲP18 色谱柱(5μm，
3.9 × 150mm) Waters公司;S105DU电子分析天平、
AＲ224CN电子天平 瑞士梅特勒公司;AS20500A数
控超声波清洗器 云南科仪玻有限公司;JP－150A－8
高速多功能粉粹机 永康市久品工贸有限公司;
DW100.P 实验室超纯水机 上海和泰仪器有限
公司。
1.2 实验方法
1.2.1 对照品溶液的制备 精密称取(+)－儿茶素
对照品 1.28mg，置于 50mL 容量瓶中，加甲醇 －水
(1∶1)超声溶解，定容，摇匀，过 0.45μm 的滤膜，即得
0.0256mg /mL的对照品溶液。
1.2.2 供试品溶液的制备 经优选后的供试品溶液
制备方法:取本品粉末 0.30g，精密称定，置具塞锥形
瓶中，精密加入甲醇－水(1∶1)10mL，密塞后称定此时
具塞锥形瓶重量，放置 1h，超声处理 20min，放冷，再
称定质量，用甲醇－水(1∶1)溶液补足减失的重量，摇
匀，过滤，取续滤液过 0.45μm 的滤膜，即得供试品
溶液。
1.2.3 色谱条件 Agilent ZOＲBAX SB－ C18色谱柱
(4.6mm × 150mm，5μm)，柱温:35℃;流动相乙腈
(A)－ 0.1% 磷酸(B)，梯度洗脱(0 ～ 6min，6% A;
6～20min，6% ～8% A;20～25min，8% ～10% A);检测
波长 280nm;流速 1.0mL /min。
1.2.4 加样回收率测定样品的制备 精密称得(+)
－儿茶素对照品 2.45mg，置 10mL 容量瓶中，加甲
醇－水(1∶1)溶液适量，超声溶解并稀释至刻线，摇匀
即得对照品溶液(浓度为 0.2450mg /mL)。取已知含
量的东方草莓样品(8 号)6 份，每份 0.30g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇－水(1 ∶1)溶液
9mL、浓度为 0.2450mg /mL 的对照品溶液 1mL，共
10mL溶液，密塞后称定此时具塞锥形瓶重量，按照
1.2.2 方法制备供试品溶液。
2 结果与分析
2.1 提取工艺的确定
对提取溶剂的考察时，考虑到东方草莓中鞣质
丰富，在文献［11－13，15－19］的基础上，本实验不仅用水、乙
醇－水(1∶1)、甲醇－水(1∶1)、乙醇和甲醇作为提取溶
剂，还用了丙酮和乙醚，结果发现丙酮和乙醚在回流
和超声条件下几乎不能将东方草莓中的(+)－儿茶
素溶出，乙醇－水(1∶1)和甲醇－水(1∶1)对(+)－儿
茶素的提取效率较好且相当，从节省经济考虑，选择
甲醇－水(1∶1)为最佳提取溶剂。考察了超声和回流
2 种提取方法，结果表明两者的差别不大。由于儿茶
素有 4 个同分异构体，长时间受热易发生差向立体
异构化反应，转变为其同分异构体［20］，因此，本实验
用室温超声提取，以避免加热对样品测定的影响。
对药材的浸泡时间和超声时间进行了考察，结果表
明，药材用甲醇－水(1∶1)浸泡 60min 后室温超声提
取 20min，(+)－儿茶素的提取率较高。实验结果详
见表 2。
表 2 东方草莓中(+)－儿茶素的提取工艺
Table 2 Extraction process of(+)－catechin
in F. orientalis Lozinsk.
提取溶剂
浸药时间
(min)
提取方法及
时间(min)
提取率
(%)
水 60 超声，20 50.84
甲醇－水(1∶1) 60 超声，20 99.92
甲醇 60 超声，20 99.94
水 60 回流，60 50.37
甲醇－水(1∶1) 60 回流，60 97.87
甲醇 60 回流，60 99.98
甲醇－水(1∶1) 60 超声，10 98.29
甲醇－水(1∶1) 60 超声，30 99.96
甲醇－水(1∶1) 30 超声，20 89.02
甲醇－水(1∶1) 90 超声，20 96.62
2.2 色谱条件的选择
2.2.1 波长的选择 儿茶素类化合物属典型的黄烷
醇类化合物［10］，具有两个吸收带，即 E2 带和 B 带，分
别在 210nm 左右和 270～280nm 处［21］。本实验曾采
用双波长(210nm 和 280nm)检测，但由于 210nm 作
为检测波长时基线漂移严重，所以选用 280nm 单波
长检测。
2.2.2 流动相的选择 参考文献［11－14，19］，本实验曾采
用甲醇－0.1%磷酸水(10 ∶ 90)、乙腈－ 0.1% 磷酸水
(8∶92)等度洗脱，从供试品的分离情况和出峰时间
等综合分析，最后选择以乙腈－0.1%磷酸水按 1.2.3
项下优选的色谱条件可保证分离度并避免干扰。
2.3 标准曲线的建立
精密吸取对照品溶液 2、10、15、20、25μL 进样，
按照 1.2.3 项下的色谱条件进行分析。以对照品的进
样量(μg)为横坐标(X)，对照品峰面积为纵坐标
(Y) ，进行回归处理，得回归方程:Y = 510.23X －
1.0499(Ｒ2 = 0.9999)，线性范围为 0.0512～0.6400μg。
273
(见图 1)
图 1 (+)－儿茶素的标准曲线
Fig.1 Standard curve of(+)－catechin
2.4 方法学考察
2.4.1 耐用性考察 选择不同型号的高效液相色谱
仪(DIONEX ULtiMate 3000)、不同型号的色谱柱依
照 1.2.3 项下优选的色谱条件进行耐用性实验。理
论塔板数以(+)－儿茶素峰计算不低于 8000，此时
指标成分能与其他相邻峰分离，分离度 ＞ 1.5。此时，
对照品和供试品液相图谱见图 2。
表 3 精密度实验
Table 3 Precision of the measured results
组分名称
测定值(mg /mL)
1 2 3 4 5
平均值
(mg /mL)
ＲSD
(%)
(+)－儿茶素 0.0258 0.0257 0.0258 0.0256 0.0256 0.0257 0.30
表 4 重现性实验
Table 4 Ｒeproducibility of the measured results
组分名称
测定值(mg /mL)
1 2 3 4 5 6
平均值
(mg /mL)
ＲSD
(%)
(+)－儿茶素 0.0505 0.0471 0.0505 0.0500 0.0478 0.0501 0.0493 2.89
表 5 回收率实验
Table 5 Ｒecoveries of the measured results
取样量(mg) 本底值(mg) 加标量(mg) 测得值(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) ＲSD(%)
300.22 0.4885 0.2450 0.7218 95.25
300.24 0.4885 0.2450 0.7386 102.07
300.17 0.4884 0.2450 0.7329 99.81
300.18 0.4884 0.2450 0.7284 97.95
300.23 0.4885 0.2450 0.7374 101.62
300.22 0.4885 0.2450 0.7372 101.52
99.70 2.67
2.4.2 精密度考察 吸取 1.2.1 下的对照品溶液(浓
度为 0.0256 mg /mL)，按照 1.2.3 项下优选的色谱条
件测定，连续进样 5 次，每次 10μL，分别记录峰面积。
ＲSD 为 0.30%，表明系统的精密度良好。结果见
表 3。
2.4.3 重现性考察 取 8 号来源的东方草莓 6 份，按
1.2.2 项下优选的提取工艺制备供试品溶液，分别依
照 1.2.3 项下优选的色谱条件测定，进样量为 10μL，
计算药材中儿茶素含量。平均值为 0.0493mg /mL，
ＲSD为 2.89%。结果见表 4。
2.4.4 回收率的测定 取 1.2.4 项下供试品溶液依
1.2.3 项下优选的色谱条件分别测定，进样量为 5μL，
平均回收率为 99.70%，ＲSD为 2.67%。结果见表 5。
图 2 对照品溶液(A)及供试品溶液(B)的 HPLC图
Fig.2 The HPLC chromatogran of the
standard solution(A)and the sample solution(B)
2.4.5 稳定性实验 分别吸取同一供试品溶液，依
照 1.2.3 项下优选的色谱条件，在 0、2、5、8、12、15、
20、24、38、45、50、65h 进样 10μL，测定检定成分峰
面积。结果表明，供试品溶液 8h内 ＲSD为 0.27%，
12h 内 ＲSD为 1.25%，24h内 ＲSD为 1.37%，65h内
ＲSD为 1.38%，供试品溶液在 65h 内稳定。结果见
表 6。
2.5 样品的含量测定
取 7 个产地的 10 批药材粉末，每个样品平行 2
份，按照 1.2.2 优选的提取工艺制备供试品溶液，依
1.2.3 项下优选的色谱条件分别测定，进样量为 5～
30μL，测定结果见表 7。
274
表 6 稳定性实验
Table 6 Experiment results of the sample stability
测定时间(h) 测得值(mg /mL) ＲSD(%)
0 0.0252
2 0.0254
5 0.0253
8 0.0253
12 0.0258
15 0.0260
20 0.0259
24 0.0260
38 0.0262
45 0.0261
50 0.0259
65 0.0257
1.38(n = 12)
表 7 10 批不同来源的东方草莓药材中(+)－儿茶素的含量
Table 7 Content of(+)－catechin
in F. orientalis Lozinsk. from 10 different sources
编号 进样量(μL) (+)－儿茶素含量(mg /mL)
1 10 0.0608
2 10 0.0413
3 30 0.0023
4 30 0.0022
5 10 0.0285
6 10 0.0313
7 5 0.0651
8 10 0.0524
9 10 0.0248
10 5 0.0838
3 结论
本实验采用高效液相色谱法测定了东方草莓中
(+)－儿茶素含量，分别考察了不同提取溶剂、提取
方法及提取时间对东方草莓中(+)－儿茶素提取率
的影响，得出东方草莓中(+)－儿茶素提取工艺(详
见 1.2.2 项方法)，并建立了色谱分析条件(详见 1.2.3
项方法)。该方法操作简单易行，精密度高，重现性
和稳定性好，回收率为 99.70%，可用于东方草莓中
(+)－儿茶素含量测定。
经查阅文献［18］，儿茶素类化合物在加热条件下
不稳定。为保证测定结果的准确性，本实验所使用
的对照品溶液现配现用(如果不能在当天完成分析
测试，需将对照品溶液置于低温冰箱中保存，时间为
2～3d)。通过对供试品溶液的稳定性考察，结果表明
供试品溶液可在低温下存放 2～2.5d;由于供试品的
制备方法简便，测定周期短，建议现配制现用。
从表 6的测定结果说明，蛇莓中的(+)－儿茶素
含量明显高于东方草莓;不同产地的药材中(+)－儿
茶素含量有差别，西藏地区 ＞青海地区 ＞成都地区。
可见，(+)－儿茶素的含量与东方草莓生长的地理特
征有着直接关系，并且海拔越高东方草莓中的(+)－
儿茶素含量越高。
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