全 文 ：乌天麻块茎同原异位天麻素含量的研究
乔怀耀1 , 张兴国1＊ , 张大全2 , 郭 健1 , 党连慧1
　(1.西南交通大学药学院 ,四川峨眉 614202;2.四川省乐山市金口河区森宝野生植物开发有限公司 ,四川乐山 614700)
摘要　[目的]检测乌天麻块茎同原异位天麻素含量。[方法]采用中国药典-HPLC法。[结果] 乌天麻块茎天麻素含量大小顺序为中柱
>皮层>表皮 ,块茎各部位的天麻素含量大小顺序为上段>中段>下段>脐点>芽苞 ,天麻素含量高于天麻整体块茎的组织结构、部位
有中柱、皮层、上段 、中段。[结论]乌天麻是优良的天麻品种资源。该研究为乌天麻资源的开发利用提供了科学依据。
关键词　乌天麻;同原异位;天麻素;HPLC;含量
中图分类号　S567.23+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2008)18-07728-02
Study on Contents of Gastrodin in Different Parts of Gastrodia elata Bl.f.glauca S.Chow
QIAO Huai-yao et al　(School of Pharmacy, Southwest Jiaotong University, Emei , Sichuan 614202)
Abstract　[Objective] The study aimed to determine contents of gastrodin from different parts of Gastrodia elata Bl.f.glauca S.Chow.[Method] HPLC
in Ch.P.was adopted.[ Result] The content of gastrodin in different structures of Gastrodia elata Bl.f.glauca S.Chow was stele> cortex> epidermis.
The content of gastrodin in different parts of Gastrodia elata Bl.f.glauca S.Chow was segmentum>middle piece> segment inferior> hilar spot>
bractea.The contents of gastrodin in the stele, cortex , segmentum and middlewere higher than the average.[Conclusion] Gastrodia elata Bl.f.glauca S.
Chow was a superordinary breed variety.Scientific basis was provided for the further development of the resources of Gastrodia elata Bl.f.glauca S.Chow.
Key words　Gastrodia elata Bl.f.glauca S.Chow;Different parts;Gastrodin;HPLC;Content
基金项目　四川省乐山市重点科技项目(06SDZ096)。
作者简介　乔怀耀(1982-),男 ,河南南阳人 ,硕士研究生, 研究方向:
中药分析及资源开发利用。 ＊通讯作者 , zxg332@126.com。
收稿日期　2008-04-16
　　天麻是兰科植物天麻(Gastrodia elata Bl.)的块茎 ,具有
平肝 、熄风 、止痉的功效 ,其中有效成分主要为天麻素[ 1] ,临
床应用十分广泛 ,为我国传统名贵药材。乌天麻以其商品性
状好 、品质优良而被誉为天麻中的“极品” 。国内外关于天麻
品质的研究主要集中在块茎整体的评价方面[ 2-4] ,迄今未见
有关天麻块茎同原异位及其组织结构有效成分分布研究的
报道 。为合理 、有效地开发利用天麻块茎资源 ,笔者采用
HPLC法测定了乌天麻块茎同原异位天麻素的含量。
1　材料与方法
1.1　仪器　岛津 LC-20AT HPLC仪 ,超纯水机(国产)等。
1.2　试剂　乙腈(天津市科密欧化学试剂有限公司)、甲醇
(天津市科密欧化学试剂有限公司),均为光谱纯。
1.3　样品
1.3.1　对照品。天麻素 ,购自中国药品生物制品检定所(批
号:110807-200205)。
1.3.2　天麻样品。2007年 12月采自四川金口河寿坪山
1 500m的抚育乌天麻(Gastrodia elata Bl.f.glauca S.Chow)块
茎[ 5] 。选取无病害的健壮的成熟天麻块茎 ,洗净。块茎A用
于测定组织结构 , 重 197.25g ,长度 12.56 cm ,先取皮(A1),再
用块茎上中段按皮层(A2 ,由表皮向内环厚约 0.80 cm)和中
柱(A3)剥离取样;块茎 B用于测定不同部位天麻素含量 ,重
204.32 g ,长 14.13 cm ,按芽苞(B1 鹦哥嘴)、脐点(B5)和上
(B2)、中(B3)、下(B4)3段切割分离;块茎整体测定 ,为试验对
照(CK)。然后 ,将余下块茎主体部分按长度均分成切片 ,蒸
制 ,60 ℃烘干备用 。
1.4　天麻素含量的测定[ 1]
1.4.1　样品溶液的制备。将乌天麻样品粉碎 ,过 60目筛 ,备
用。精密称取天麻样品粉末 0.500 0 g ,重复 3次 ,加稀乙醇
40 ml ,称重 ,回流 3 h后 ,称定重量 ,稀乙醇补足 。摇匀后过
滤 ,滤液用 0.45 μm微孔滤膜过滤即得样品溶液 。
1.4.2　对照品溶液的制备。精密称取对照品 0.0070 g ,加流
动相溶解并定容至 50 ml ,混匀即得对照品溶液 。
1.4.3　色谱条件。色谱柱为Phenomenex C18柱(250 mm×4.6
mm ,5μm),柱温 30 ℃,流动相为乙腈∶0.05%磷酸溶液(3∶
97),检测波长 220 nm ,流速 1.0 ml/min。
1.4.4　标准曲线制作。吸取对照品溶液 2、4、6、8、10μl ,按上
述色谱条件进样 ,以进样量为横坐标 ,天麻素峰面积为纵坐
标 ,绘制标准曲线 ,标准曲线方程为:
y =152 884x +1 529 ,R=0.999 9 (1)
1.4.5　样品含量测定。取待测样品 ,按上法制成待测样品 。
精密吸取样品溶液 4 μl ,测定天麻素峰面积 ,计算天麻素含
量 ,取平均值。天麻素对照品 、乌天麻样品HPLC 分别见图
1、2。
图 1　天麻素对照品 HPLC
Fig.1 HPLCof gastrodin control
2　结果与分析
2.1　进样量对天麻素峰分离度的影响　分别精密吸取一定
量样品溶液注入色谱仪中 ,记录各样品天麻素峰面积和理论
塔板数(表 1)。
　　2005版药典规定天麻素峰理论塔板数不得低于 5 000 。
同一样品只有进样量为 2、4μl时达到药典要求 ,但是 2μl时
天麻素峰面积较小 ,该试验的适宜进样量为 4μl。
2.2　乌天麻中天麻素含量　按“1.4.5”方法测定乌天麻同原
异位天麻素含量。
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2008 , 36(18):7728-7729　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　刘月娟　责任校对　卢瑶
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.18.070
图 2　乌天麻样品 HPLC
Fig.2 HPLC of Gastrodia elata Bl.sample
表 1　进样量对天麻素峰分离度的影响
Table 1 Effects of injection volume on separation degree of gastrodin peak
进样量∥μl
Injection
volume
峰面积
Peak area
理论塔板数
Number of theore-
tical plates
面积∥%
Area
2 232 873.9 　　　13 164 40.36
4 464 465.0 65 983 39.92
6 797 917.6 2 202 21.85
8 870 682.6 1 296 33.17
10 701 590.7 3 257 28.93
表 2　天麻块茎中同原异位天麻素的含量 %
Table 2　Content of original ectopic gastrodin in gastrodiae tuber
乌天麻块茎
Gastrodiae tuber
天麻素
Gastrodin
整体Whole 0.427±0.021
结构 Structure 表皮 Epidermis 0.103±0.006
皮层 Cortex 0.445±0.023
中柱 Stele 0.482±0.024
部位Position 芽苞 Bud 0.084±0.004
上段 Upper segment 0.503±0.025
中段Middle segment 0.445±0.022
下段 Lower segment 0.352±0.017
脐点 Hilar spot 0.221±0.011
　　由表 2可知 ,乌天麻块茎的天麻素含量大小顺序为中柱
>皮层>表皮 ,以表皮含量最低;块茎各部位的天麻素含量
大小顺序为上段>中段>下段>脐点>芽苞 ,以上中段天麻
素含量最高 ,芽苞天麻素含量最低;天麻素含量高于天麻整
体块茎的组织结构 、部位有中柱 、皮层 、上段 、中段。
2.3　稳定性　精密吸取样品溶液 4μl ,每隔 4 h进样 1次 ,进
样 6次 , 6次测得的峰面积 RSD 为 0.31%,表明样品在 24 h
内稳定。
2.4　精密度　精密吸取对照品溶液 4 μl ,连续进样 6次 ,测
得 6次天麻素峰面积的 RSD 为 0.25%,表明该试验方法精密
度良好。
2.5　重现性　按样品制作流程 ,取同一天麻样品 ,平行制作
5份样品 ,测得天麻素含量 RSD 为 1.02%,表明重现性良好。
2.6　加样回收率　取已知含量的天麻样品适量 ,加入一定
量对照品 ,制作成待测样品 ,测定天麻素含量 ,测得平均回收
率为 98.70%(n =6),表明回收率较好。
3　小结
按照中国药典方法 ,在该试验条件下的适宜进样量为
2～ 4 μl。研究表明 ,乌天麻块茎主体的天麻素含量均显著高
于 2005版《中国药典》的标准(P<0.01),是优良的天麻种质
资源类型;天麻表皮和芽苞的天麻素含量显著低于中国药典
要求(P<0.01)。该研究为天麻资源的合理开发利用提供了
科学依据。
参考文献
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(上接第 7601页)
同时 ,多态信息含量关系到该座位的可用性和使用效率。多
态信息含量越大 ,该座位杂合子在一个群体中比例就越大 ,
提供的遗传信息就越高 。该研究中有 16个位点处于高度多
态 ,5个位点属于中度多态性位点 ,平均 PIC值为0.585 2 ,能
为分析遗传多样性提供充分的信息。
基因杂合度也称为基因多样度 ,一般认为它是度量群体
遗传变异的最适参数。泽格·欧特将多态位点定义为杂合度
至少为 0.10的位点[ 7] 。该研究中所分析的 23个微卫星标记
中 ,各位点均有较高的多态性 ,群体遗传多样性丰富 ,具有较
高的选择潜力 ,今后可将其作为候选遗传标记用于性状和标
记间的连锁分析。
平均基因杂合度的大小近似地反映出遗传结构变异程
度的高低。南昌中蜂群体 23个微卫星座位的平均基因杂合
度为 0.6329 ,说明这个群体具有较高的群体杂合度和丰富的
遗传多样性 ,应对其加强选育 ,充分利用其遗传资源 ,提高生
产性能。
参考文献
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