全 文 ：形成含艾叶挥发油空气清新剂的不同浓度梯度，再分别加入已稀
释后的菌液，观察细菌的生长情况，此法较容易测得艾叶挥发油
空气清新剂的最低抑菌浓度。
表 2 不同浓度的艾叶挥发油空气清新剂对 6 种不同细菌的抑制作用
菌种
3． 2
mg·ml － 1
1． 6
mg·ml － 1
0． 8
mg·ml － 1
0． 4
mg·ml － 1
0． 2
mg·ml － 1
0
mg·ml － 1
大肠杆菌 － － + + + +
伤寒杆菌 － + + + + +
金黄色葡萄球菌 － － － － － +
铜绿假单孢菌 － － + + + +
土生克雷伯菌 － + + + + +
肺炎克雷伯菌 － + + + + +
研究表明，艾叶挥发油空气清新剂在清新环境的同时，能有
效抑制空气中金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌等致病
菌，艾叶挥发油可用于清新和抑菌的空气清新剂的制备。
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收稿日期:2010-07-05; 修订日期:2010-10-20
基金项目:滨州医学院科技计划项目(No． BY2007KJ09)
作者简介:李珂珂(1976-) ，女(汉族) ，安徽蚌埠人，现任贵州医学院药学
院讲师，硕士学位，主要从事药物制剂及生物体内药物分析的研究工作．
拳参提取物对小鼠免疫功能的影响
李珂珂1，王青青2
(1．滨州医学院·药学院，山东 烟台 264003; 2．山东省滨州市人民医院 256610)
摘要:目的 探讨拳参提取物对正常小鼠的免疫功能的影响。方法 通过测定胸腺、脾脏质量并计算脏器指数，碳粒廓清
法测定单核巨噬细胞吞噬功能，MTT法检测 T 淋巴细胞增殖功能，鸡红细胞免疫后小鼠血清溶血素抗体水平的测定及
ELISA测定血清中 IL － 2 含量。结果 拳参提取物能够显著增加正常小鼠免疫器官的胸腺指数和脾脏指数，增强正常小
鼠单核巨噬细胞的吞噬能力，促进 T淋巴细胞增殖，提高血清溶血素水平及血清 IL － 2 水平。结论 拳参提取物对正常小
鼠的免疫功能具有增强作用。
关键词:拳参提取物; 免疫功能; 小鼠
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 09． 059
中图分类号:R 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)09-2180-03
拳参又名紫参、草河车，蓼科植物拳参 Polygonum bistorta
L． 的干燥根茎，具有清热解毒，消肿止血的功效，用于赤痢、
热泻、肺热、咳嗽、痈肿、口舌生疮、吐血、痔疮出血、毒蛇咬伤
等证［1］。文献报道拳参具有抗炎［2］、抗突变［3］、抗癌［4］、抗心
律失常［5］等作用，并从拳参中分离得到了没食子酸、丁二酸、
槲皮素、原儿茶酸、阿魏酸、山萘酚等化合物，但有关拳参的免
疫活性研究在国内外还未见报道。本文着重研究拳参乙醇提
取物和水提取物对正常小鼠免疫功能的影响，为进一步研究
其免疫药理作用提供实验依据。
1 材料与仪器
1． 1 材料 拳参购于烟台市药材公司，经滨州医学院中药研究室
鉴定为拳参的根茎。拳参醇提取物:以 95%乙醇溶液浸泡 24h
后，回流提取 30 min，共 3 次，将滤液合并，减压浓缩回收溶剂得
浸膏，再用适量蒸馏水将其溶解制成含生药 100，200，400 mg /ml
的拳参醇提取液，4℃冰箱保存。拳参水提取物:拳参用水煎煮 3
次，过滤后，将滤液合并，浓缩成含生药 100，200，400 mg /ml 的拳
参水提取液，4℃冰箱保存。
1． 2 动物 昆明种小鼠，雌雄兼用，6 ～ 8 周龄，体质量(20 ± 2)g;
豚鼠，雄性，6 ～ 8 周龄，体质量(300 ± 30)g，滨州医学院实验动物
中心提供。
1． 3 细胞株 K562 细胞，由滨州医学院生物化学教研室提供。
1． 4 仪器与试剂 DNM － 9602 酶标分析仪(北京朗新技术有限
公司) ;1500 型 CO2 恒温培养箱(Heraeus 公司) ;TU － 1901 型双
光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司) ;CK
X41 型倒置显微镜(Olympus公司)。盐酸左旋咪唑(山东省莒南
制药厂，批号 070505) ，用前以蒸馏水溶解，配成相应浓度的悬浊
液) ;MTT(Amresco 公司) ;ConA(Sigma 公司) ;改良型 RPMI －
1640 培养基(赛默飞世尔生物化学制品有限公司) ;IL － 2 ELISA
试剂盒(北京赛尔斯生物技术有限公司)。
2 方法
2． 1 小鼠碳粒廓清实验［6］ 取小鼠 32 只，雌雄各半，随机分成 4
组，每组 8 只:空白对照组(生理盐水) ，拳参醇提物(1 g /kg)给药
组，拳参水提物(1 g /kg)给药组，阳性对照组(盐酸左旋咪唑0． 03
g /kg) ，分别灌胃给药，1 次 /d，连续给药 14 d，各组小鼠称质量并
记录。末次给药 1 h 后，各鼠尾静脉注射无菌的印度墨汁 0． 1
ml /10 g，分别在注射后的第 3 分钟和第 13 分钟，眼球取血，肝素
抗凝，取 50 μl 血液，溶入 5． 0 ml 0． 1% Na2CO3 溶液中摇匀，于
600 nm波长处测定吸光度(A 值)。末次取血后，立即脱臼处死
小鼠，摘取肝脏、脾脏，剪去连带的脂肪和结缔组织，称其湿质量，
按公式计算廓清指数 K值［K =(logA1 － logA2)/(t2 － t1) ］和吞噬
指数 α值［α =［体质量 /(肝质量 +脾质量) ］× K1 /3］。
2． 2 免疫器官指数测定［7］ 取小鼠 80 只，雌雄各半，随机分为 8
组，每组 10 只:空白对照组(生理盐水) ，拳参给药组 1、2、3 组
(拳参醇提物 0． 5，1，2 g /kg) ，拳参给药组 4、5、6 组(拳参水提物
0． 5，1，2 g /kg) ，阳性对照组(盐酸左旋咪唑 0． 03 g /kg)。各组均
灌胃给药，1 次 /d，连续 21 d。末次灌胃后 6 h，称量小鼠体质量
并记录;颈椎脱臼处死，无菌取出脾脏、胸腺，精密称重。按公式
分别计算脾脏和胸腺的脏器指数。免疫器官指数 =免疫器官质
量(g)/体质量(g)。
2． 3 T 淋巴细胞增殖反应测定(MTT 法)［8，9］ 实验动物分组及
给药参照“2． 2”项所述，末次给药后 6 h将各组小鼠脱臼处死，无
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9
菌操作取出脾脏，常规制备脾细胞悬液，并调整细胞浓度至 5 ×
106个 /ml，加入 96 孔细胞培养板中，每孔 100 μl，每只动物设 3
个复孔，再分别加入 100 μl RPMI － 1640 培养液。实验孔加入
ConA(10 μg /ml)10 μl，并设空白对照孔，置 37 ℃，5% CO2 培养
箱中培养 66 h。取出培养板，每孔加入 MTT(5 mg /ml)20 μl，继
续培养 4 ～ 6 h，2 000 r /min 离心 5 min，吸弃上清液，每孔加入
DMSO 150 μl，振荡、充分混匀后，在酶标仪 492 nm波长处读取 A
值。计算刺激指数 SI值［SI =(实验孔 A 均值 －本底 A 值)/(对
照孔 A均值 －本底 A值) ］。
2． 4 血清溶血素的测定［10］ 实验动物分组及给药参照“2． 1”项
所述，于给药第 7 天每鼠腹腔注射 5%鸡红细胞(CRBC，V /V)悬
液 0． 2 ml /d进行免疫，免疫 7 d，末次给药 2 h摘眼球取血，2 000
r /min离心 10 min分离血清，用生理盐水稀释 100 倍。取稀释血
清 2 ml，与 5%CRBC 1 ml、10%补体 1 ml混合，在 37℃恒温箱中
孵育 30 min后，置 0℃冰浴中 10 min终止反应。离心取上清液于
分光光度计 540 nm波长处测定 A 值，以 A 值读数作为判定血清
溶血素的指标，比较各组的差异。
2． 5 血清 IL － 2 含量测定 取小鼠 36 只，雌雄各半，随机分为 6
组，每组 6 只:空白对照组(生理盐水) ，拳参给药组 2、3 组(拳参
醇提物 1，2 g /kg)、拳参给药组 5、6 组(拳参水提物 1，2 g /kg)、阳
性对照组(盐酸左旋咪唑 0． 03 g /kg)。分别灌胃给药 1 次 /d，连
续给药 21 d，按上述方法制备血清，用 ELISA 法测定血清 IL － 2
含量。操作方法按试剂盒说明书进行。
2． 6 统计学处理 所有数据以 珋x ± s 表示，采用医学统计软件处
理，两组间均数差异的比较采用 t检验。
3 结果
3． 1 拳参提取物对小鼠碳粒廓清功能的影响 结果见表 1。与
生理盐水空白对照组相比较，盐酸左旋咪唑组、拳参醇提物和水
提物给药组均可明显提高碳粒廓清指数和吞噬指数(P ＜ 0． 01 或
P ＜ 0． 001)。以拳参水提物给药组(1 g /kg)增强单核巨噬细胞吞
噬功能最明显。
表 1 拳参提取物对小鼠碳粒廓清功能的影响(珋x ± s)
组别 n
给药剂量
C /g·kg － 1
廓清指数 K值 吞噬指数 α值
空白对照 7 0 0． 017 2 ± 0． 002 9 3． 544 7 ± 0． 418 5
盐酸左旋咪唑 7 0． 03 0． 027 0 ± 0． 003 9＊＊＊5． 156 0 ± 0． 276 5＊＊＊
拳参醇提物给药 8 1 0． 027 1 ± 0． 004 0＊＊＊5． 443 7 ± 0． 467 9＊＊＊
拳参水提物给药 7 1 0． 024 1 ± 0． 003 5＊＊ 5． 878 1 ± 0． 563 9＊＊＊
与空白对照组比较，＊＊P ＜0． 01，＊＊＊P ＜0． 001
3． 2 拳参提取物对免疫器官质量的影响 结果见表 2。与空白
对照组相比较，盐酸左旋咪唑组、拳参醇提物和水提物的 6 个剂
量给药组均可明显提高正常小鼠的脾指数和胸腺指数(P ＜ 0． 01
或 P ＜ 0． 001)。拳参提取物中 1 g /kg 剂量组对脾指数的增加较
显著，当给药剂量增加至 2 g /kg 时，脾指数的增加有显著性降
低。醇提物与水提物相比较，1 g /kg的水提物给药组对脾指数的
增加最为显著(P ＜ 0． 05)。拳参醇提物对胸腺指数和水提物对
脾指数、胸腺指数的增加在 3 个剂量组间比较差异均无统计学意
义(P ＞ 0． 05)。
表 2 拳参提取物对免疫器官质量的影响(珋x ± s)
组别 n
给药剂量
C / g·kg －1
脾质量
m / g
脾指数
C / g·g － 1
胸腺质量
m / g
胸腺指数
C / g·g － 1
空白对照 8 0 0． 073 ± 0． 012 2． 990 ± 0． 373 0． 064 ± 0． 014 2． 605 ± 0． 323
盐酸左旋咪唑 8 0． 03 0． 149 ± 0． 030＊＊＊ 5． 576 ± 1． 222＊＊ 0． 148 ± 0． 025＊＊＊ 5． 528 ± 0． 963＊＊＊
拳参给药 1 10 0． 5 0． 101 ± 0． 020＊＊ 3． 899 ± 0． 562＊＊ 0． 093 ± 0． 012＊＊＊ 3． 659 ± 0． 226＊＊＊
拳参给药 2 9 1 0． 110 ± 0． 015＊＊＊ 4． 135 ± 0． 362＊＊＊ 0． 109 ± 0． 028＊＊＊ 4． 120 ± 0． 673＊＊＊
拳参给药 3 10 2 0． 088 ± 0． 013* 3． 672 ± 0． 465＊＊▲ 0． 096 ± 0． 016＊＊＊ 3． 838 ± 0． 528＊＊＊
拳参给药 4 10 0． 5 0． 112 ± 0． 013＊＊＊ 4． 481 ± 0． 485＊＊＊ 0． 101 ± 0． 014＊＊＊ 4． 137 ± 0． 326＊＊＊
拳参给药 5 8 1 0． 124 ± 0． 032＊＊ 4． 955 ± 0． 937＊＊＊▲ 0． 107 ± 0． 032＊＊ 4． 198 ± 0． 974＊＊
拳参给药 6 10 2 0． 112 ± 0． 017＊＊＊ 4． 590 ± 0． 383＊＊＊ 0． 102 ± 0． 012＊＊＊ 4． 284 ± 0． 235＊＊＊
与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01，＊＊＊P ＜ 0． 001;与拳参给药 2 组比较，▲P ＜ 0． 05
3． 3 拳参提取物对 T 淋巴细胞增殖反应的影响 结果见表 3。
与空白对照组相比较，盐酸左旋咪唑组、拳参醇提物和水提物的
6 个剂量给药组均可明显促进正常小鼠的 T 淋巴细胞增殖反应
(P ＜ 0． 01 或 P ＜ 0． 001) ，且随醇提物、水提物给药剂量的增加而
逐步提高，其中 0． 5 g /kg 的醇提物剂量组与 1，2 g /kg 的醇提物
剂量组比较差异有高度显著性(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01) ;0． 5 g /kg
的水提物剂量组与 1，2 g /kg的水提物剂量组比较差异有高度显
著性(P ＜ 0． 01) ;而醇提物和水提物各自的 1 g /kg与 2 g /kg剂量
组间比较差异均无显著性(P ＞ 0． 05) ，表明淋巴细胞增殖反应随
拳参提取物剂量的增加而有增高，但增加到一定剂量后，增加减
缓甚至有所降低。
表 3 拳参提取物对 T淋巴细胞增殖反应的影响(珋x ± s)
组别 n
给药剂量
C / g·kg －1
刺激指数 SI
空白对照 10 0 1． 133 ± 0． 082
盐酸左旋咪唑 10 0． 03 1． 551 ± 0． 172＊＊＊
拳参给药 1 10 0． 5 1． 375 ± 0． 188＊＊1)
拳参给药 2 9 1 1． 663 ± 0． 127＊＊＊
拳参给药 3 10 2 1． 555 ± 0． 135＊＊＊
拳参给药 4 10 0． 5 1． 382 ± 0． 113＊＊＊2)
拳参给药 5 10 1 1． 557 ± 0． 149＊＊＊
拳参给药 6 10 2 1． 420 ± 0． 110＊＊＊
与空白对照组比较，＊＊P ＜ 0． 01，＊＊＊P ＜ 0． 001;与拳参给药 2 组比
较，1)P ＜ 0． 01，与拳参给药 3 组比较，P ＜ 0． 05;与拳参给药 5 组比较，2)P
＜ 0． 01
3． 4 拳参提取物对小鼠血清溶血素的影响 与空白对照组相比
较，盐酸左旋咪唑组、拳参醇提物和水提物给药组均可明显上调
正常小鼠的血清溶血素水平(P ＜ 0． 001) ，尤其以 1 g /kg 的拳参
醇提物剂量组的效果最为明显。结果见表 4。
3． 5 拳参提取物对小鼠血清 IL － 2 含量的影响 ELISA检测结果
表明，拳参提取物可显著上调正常小鼠血清 IL － 2 含量，与空白对
照组比较有统计学意义(P ＜0． 05或 P ＜0． 01)。结果见表 5。
表 4 拳参提取物对小鼠血清溶血素的影响(珋x ± s)
组别 给药剂量 C / g·kg －1 A值(450 nm波长)
空白对照 0 0． 407 3 ± 0． 017 6
盐酸左旋咪唑 0． 03 0． 553 2 ± 0． 041 7＊＊＊
拳参醇提物给药 1 0． 693 3 ± 0． 087 4＊＊＊1)
拳参水提物给药 1 0． 539 8 ± 0． 054 1＊＊＊
与空白对照组比较，＊＊＊P ＜ 0． 001;与拳参水提物给药组比较，1)P ＜
0． 001;n = 8
表 5 拳参提取物对小鼠血清 IL － 2 含量的影响(珋x ± s)
组别 给药剂量 C / g·kg －1 IL － 2 /pg·ml －1
空白对照 0 33． 07 ± 5． 38
盐酸左旋咪唑 0． 03 47． 88 ± 8． 56＊＊
拳参给药 2 1 43． 74 ± 3． 87＊＊
拳参给药 3 2 42． 75 ± 3． 29＊＊
拳参给药 5 1 46． 56 ± 6． 55＊＊
拳参给药 6 2 40． 11 ± 4． 23*
与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;n = 6
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期
4 讨论
单核巨噬细胞系统，也即网状内皮系统(reticuloendothelial
system，RES)是机体非特异性免疫系统的重要组成部分，单核巨
噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一。
当颗粒状异物注入血液后，主要迅速被在肝和脾脏的单核巨噬细
胞所清除。小鼠碳粒廓清实验中所测得的廓清指数 K 可以反映
RES的吞噬功能，吞噬指数 α 可以反映单核巨噬细胞的吞噬能
力，因此有助于观察其健康状况，也可用于判断某些生物反应调
节剂的强度。本实验测定停药 1 h 后药物对网状内皮细胞吞噬
活性的即刻性影响。实验结果表明，拳参醇提物和水提物均能够
非常显著提高小鼠的碳粒廓清水平(P ＜ 0． 01) ，以拳参水提物给
药组(1 g /kg)增强单核巨噬细胞吞噬功能最明显，提示拳参醇提
物和水提物对小鼠机体的单核巨噬细胞系统的功能有一定的增
强作用。
胸腺和脾脏指数的改变能够反应机体免疫功能的状
态［11，12］。免疫器官的质量在一定程度上可反映免疫器官内淋巴
细胞的数量，从而间接了解体内淋巴细胞总体水平。如果脾指数
和胸腺指数均增加，说明药物对细胞免疫和体液免疫都有促进作
用［13］。因此，脾指数和胸腺指数在一定程度上能够比较客观的
反映机体免疫功能的一个方面。本实验结果表明，高、中、低 3 个
剂量的拳参醇提物和水提物对小鼠脾脏、胸腺指数有明显的提高
作用(P ＜ 0． 01 或 P ＜ 0． 001) ，其中对脾指数的作用以 1 g /kg 醇
提物更显著，提示拳参提取物能够增强脾脏和胸腺的免疫功能。
淋巴细胞增殖是反映细胞免疫最直接的指标，T细胞受到抗
原物质刺激后能辅助 B细胞分裂增殖、介导体液免疫、产生抗体，
检测药物对 T细胞功能的影响是探讨其免疫活性的首选对象。
实验结果表明随拳参提取物剂量的增加刺激指数有所增高，但增
到一定剂量(1 g /kg)后，增加减缓甚至有所降低。
体液免疫是特异性免疫的重要组成部分，在抗感染免疫中与
细胞免疫相辅相成。血清中溶血素(抗体)的生成反映了体液免
疫水平的指标［14］。溶血素的含量与机体体液免疫能力呈正相
关［15］。实验结果显示，拳参醇提物(1 g /kg)和水提物(1 g /kg)剂
量组可提高正常小鼠血液中抗体含量，尤其以醇提物给药组的效
果最为显著，提示拳参提取物可提高正常小鼠的体液免疫功能。
IL － 2 是免疫应答过程中重要的细胞因子，可刺激 T 淋巴细
胞生长、分化及增强细胞毒 T 淋巴细胞(CTL)的功能，在胸腺细
胞分化过程中起着重要作用。实验结果显示，1，2 g /kg拳参提取
物剂量组可显著性提高正常小鼠的血清 IL － 2 含量，这一结果与
上述 T细胞增殖结果一致。
拳参具有抗炎、抗突变、抗癌、抗心律失常等作用的报道较
多，本研究首次报道了拳参提取物对正常小鼠的免疫调节作用，
实验结果表明在一定剂量范围内对正常小鼠的免疫调节作用有
增强作用，这为拳参在临床的合理应用提供了有力的科学依据，
但对于拳参免疫调节作用的具体有效成分及其详细的作用机制
还有待于进一步研究。
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