全 文 ：中 药 研 究
玻璃苣水提物对荷瘤小鼠免疫调节作用
的实验研究
刚宏林1，于雅楠2，马英南2，刘相辉1，唐先明1
(1．哈尔滨市食品药品检验检测中心，黑龙江 哈尔滨 150525;
2．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:通过建立 H22荷瘤小鼠模型，探讨玻璃苣水提物(Borago officinalis Aqueous Extracts)对 H22
荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对免疫调节作用的机制。方法:以 H22荷瘤小鼠为实验研究对象，检测玻璃苣
水提物对移植瘤生长的抑制率，采用荧光免疫法对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖反应、小鼠 NK细胞活性测
定及小鼠腹腔巨噬细胞活性进行测定，观察玻璃苣水提物对免疫功能的影响。结果:玻璃苣水提物具有
显著的抑瘤作用，且与剂量呈正相关。玻璃苣水提物能明显提高 ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能
力的作用，玻璃苣水提物各剂量组均能明显提高小鼠 NK细胞活性和增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能
的作用。结论:玻璃苣水提物对 H22荷瘤小鼠肿瘤生长具有明显的抑制作用，具有良好的免疫增强作
用;玻璃苣可能通过调节细胞免疫发挥其抗肿瘤作用。
关键词:玻璃苣;荷瘤小鼠;细胞免疫机制
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2016)01 － 0025 － 04
Experimental Study on the Immunomodulatory Effect of Borago
Officinalis Extracts on Tumor － bearing Mice
GANG Hong － lin1，YU Ya － nan2，MA Ying － nan2，LIU Xiang － hui1，TANG Xian － ming1
(1． Harbin Food and Drug Inspection Center，Harbin 150525，China;
2． Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China)
Abstract:Objective:This paper studies the anti － tumor effect of Borago officinalis aqueous extracts (BoAE)
and its mechanism of immunomodulatory function by constructing H22 tumor － bearing mice models． Methods:
To test the tumor inhibitive rate of BoAE，we adopted H22 tumor － bearing mice as the experimental objects． We
used immunofluorescence to determine the proliferative responses of mice spleen lymphocytes，the NK cells ac-
tivity in mice，the peritoneal macrophage activity in mice． Observe the effect of BoAE on immune function．
Ｒesults:The research indicates that the anti － tumor effect of BoAE is evidently intensified and the effect was
positively related to the dose． BoAE could obviously improve the reproductive activity of spleen lymphocyte in-
duced by ConA and the activity of NK cells and the phagocytosis of peritoneal macrophage． Conclusion:BoAE
can significantly inhibit the growth of H22 tumor cells and has a good effect of immunopotentiation，and the anti-
tumor effects may be related to regulating the cellular immunity．
Key words:Borago officinalis;Tumor － bearing mice;Cellular immunity
基金项目:黑龙江省青年科学基金项目(No． QC2009C71);黑龙江省博士后科研启动资金资助项目(No． LBH － Q12053) ;哈尔滨市科技攻关项目(No．
2011AA3BS034)
作者简介:刚宏林(1975 －)，男，博士后，主任药师，硕士研究生导师，主要研究方向:中药药效物质基础及作用机制研究。
收稿日期:2015 － 03 － 10
修回日期:2015 － 04 － 05
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玻璃苣是一年生或多年生草本植物，属玻璃苣属，
紫草科，在欧洲已经被当作草药使用了 700 多年，在英
国，玻璃苣的花也被当作癌症募捐活动的符号。现代
药理学研究表明，玻璃苣具有改善动脉粥状硬化心脏
病、抗衰老、抗氧化、降低胆固醇和抗癌等作用。我们
课题组研究发现，玻璃苣醇提取物能够提高慢性应激
抑郁模型小鼠脑内单胺类神经递质的含量，具有良好
的抗抑郁作用［1］。玻璃苣醇提取物可使实验性哮喘
豚鼠引喘潜伏期延长，减轻支气管黏膜的水肿和阻塞，
对支气管哮喘症状具有一定的缓解作用［2］。玻璃苣
水提取物还具有显著的抗炎镇痛作用。本项主要研究
玻璃苣水提取物对 H22肉瘤的抑制作用，并探讨其可
能的作用机制，从而为玻璃苣更广泛的应用于临床提
供理论依据。
1 实验材料
1． 1 玻璃苣提取物的制备
玻璃苣水提取物(BoAE):将玻璃苣全草切成约 1
cm的小段，称取 500 g，加 5000 ml蒸馏水浸泡 2 h后，
煎煮 3 次，每次 30 min，加水总量 15000 ml，合并 3 次
滤液，水浴锅蒸发干燥，然后烘干箱干燥，制得干燥粉
末，得膏率为 31． 2%，备用。H22肉瘤细胞由哈尔滨医
科大学附属肿瘤医院提供，YAC － 1 细胞购于上海细
胞所。
1． 2 实验动物
本次实验选用健康、清洁级、体质量 18 ～ 22g 的昆
明种小鼠，雌雄各半，由黑龙江中医药大学动物中心提
供。动物合格证号:医动字第 1024 － 03 号。实验动物
均预先饲养 2 天，适应实验室饲养条件。
1． 3 实验主要仪器与设备
电子天平 PL602 － S(梅特勒—托利多仪器(上
海)有限公司);离心机 LDZ4 － 1． 29(北京医用离心机
厂);TU21810 型紫外可见分光光度计(北京普析通用
仪器有限公司);FC204 型电子分析天平(上海精密科
学仪器厂);WJ － III细胞培养箱;酶标仪(北京普朗);
MTT(sigma)。
2 实验方法
2． 1 实验动物分组与模型制备
取 40 只 KM小鼠随机分为 5 组，每组 8 只，分别
为玻璃苣水提物高、中、低剂量组、阳性对照组、空白对
照组。取传代后的 S180 肉瘤细胞株，用 PBS 悬浮至
1 × 106个 /0． 1 ml，抽取 1 ml 细胞悬液接种于腋下，观
察肿瘤生长情况。
2． 2 分组与给药
造模成功后，各模型小鼠灌胃给药，玻璃苣水提物
高剂量组剂量为 17． 6 g /(kg·d)，玻璃苣水提物中剂
量组剂量为 8． 8 g /(kg·d)，玻璃苣水提物低剂量组
剂量为 4． 4 g /(kg·d)，环磷酰胺(阳性对照)组剂量
为 0． 32 g /(kg·d)，各组连续灌胃给药 4 周，生理盐水
(空白对照)组给予同体积的生理盐水。
2． 3 脾重及脾指数的测定
各组实验小鼠称重，颈椎脱臼处死小鼠后无菌取
脾脏，称重。
免疫器官指数 =免疫器官重量(g)/小鼠体重(g)
2． 4 玻璃苣提取物对荷瘤小鼠瘤重及抑瘤率的测定
各组给药 4 周后，颈椎脱臼处死小鼠，剥出肉瘤，
称取重量，按下列公式计算抑瘤率［3］。
抑瘤率(%)=(对照组平均瘤质量 －给药组平均
瘤质量)/对照组平均瘤质量 × 100%
2． 5 脾淋巴细胞增殖反应的测定
参照文献［4］制备小鼠脾脏的单细胞悬液，低温环
境下保存并计数，将细胞混悬液的浓度调整为 2 × 106
个 /ml，将每个样本液分别两个孔加入 96 孔板，其中一
个孔加入 5 μl ConA溶液(相当于 5 μg /ml)作为反应
孔，另一个孔加等体积 1640 培养液作为对照孔，以上
各孔均设 3 个复孔，置 5% CO2细胞培养箱中，37 ℃环
境下培养 72 h，培养结束前 4 h 每孔滴加 50 μl MTT
(5 mg /ml)。培养结束后逐个孔滴加入 100 μl酸性异
丙醇，充分溶解紫色结晶颗粒，在酶标仪 570 nm 波长
处测定光密度值。淋巴细胞增殖能力用加入 ConA 溶
液孔的 OD值减去对照空的 OD值来表示。
2． 6 小鼠 NK细胞活性的测定
实验前 24 h将靶细胞 YAC － 1 进行传代培养，将
靶细胞计数并调整浓度为 4 × 105个 /ml。
用台酚蓝染色的方法检测小鼠脾脏单细胞悬液的
活度，保证活细胞占 95%以上，调整细胞浓度至 2 ×
107个 /ml，此时效靶比为 50∶ 1。于 96 孔板反应孔中滴
加效应细胞和靶细胞各 100 μl，靶细胞自然释放孔中
加培养液和靶细胞各 100 μl，靶细胞最大释放孔中滴
加 2． 5% Triton和靶细胞各 100 μl，以上各孔均设 3 个
复孔，以上待测孔加入 100 μl LDH 基质液后，充分震
荡后，在 37 ℃ 5%CO2保温箱中培养 10 min，然后每孔
滴加入 30 μl 盐酸溶液(1 mol)，置 96 孔板于酶联免疫
检测仪 490 nm波长处测 OD值。按下列公式计算 NK
细胞活性［5］。
NK细胞活性(%)=［(反应孔 OD －自然释放孔
OD)/(最大释放孔 OD －自然释放孔 OD)］× 100%
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2． 7 小鼠腹腔巨噬细胞活性测定
鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心 2 次，然后根
据获得红细胞的体积加入适量生理盐水，调至鸡红细
胞浓度为 1%。小鼠颈椎脱臼处死后，腹腔注射 Hanks
液 4 ml，轻揉腹部 5 min以便充分将巨噬细胞洗出，然
后将腹壁剪开一个小口，用胶头滴管吸取腹腔液置于
试管内保存。取一只新试管，向其中加入 0． 5 ml腹腔
巨噬细胞洗液和 0． 5 ml鸡红细胞液，充分混匀。用加
样器吸取 0． 5 ml混合液加入玻璃片的琼脂圈内，将其
至于 37 ℃保温箱中反应 15 min。孵育结束后迅速用
生理盐水将未贴壁的细胞冲掉，用甲醇液固定 1 min，
Giemsa染色 15 min，用蒸馏水冲洗干净，晾干后显微
镜下计数。按下列公式计算吞噬率［6］。
吞噬率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数 /计数
的巨噬细胞数 × 100%
吞噬指数(g /g)=被吞噬的鸡红细胞总数 /计数
的巨噬细胞数
2． 8 统计学处理
采用 SPSS 18． 0 统计软件对实验结果进行单因素
方差分析和多个实验组与 1 个对照组间均数的两两比
较方法进行统计学处理，实验数据结果采用(珋x ± s)表
示，差异显著性通过 P值判定。
3 结果
3． 1 BoAE对荷瘤小鼠瘤重及抑瘤率的影响
实验研究结果显示，与生理盐水组相比，BoAE 的
高剂量组和环磷酰胺对照组的瘤重均处于较低水平，
具有显著差异(P ＜ 0． 01)。玻璃苣水提物中剂量组和
低剂量组的瘤重也明显减轻，具有差异(P ＜ 0． 05)，且
BoAE各剂量组之间存在剂量依赖性关系，即 BoAE 的
三个剂量对 H22肉瘤的生长均有抑制作用。结果见
表 1。
表 1 玻璃苣水提物对荷瘤小鼠瘤重
及抑瘤率的的影响(珋x ± s)
分组 n 剂量(g /kg) 瘤重(g) 抑瘤率(%)
BoAE高剂量组 8 17． 6 0． 6575 ± 0． 81772＊＊ 65． 21
BoAE中剂量组 8 8． 8 1． 0094 ± 0． 79859* 46． 59
BoAE低剂量组 8 4． 4 1． 0293 ± 1． 18802* 45． 53
环磷酰胺组 8 0． 32 0． 6059 ± 0． 38123＊＊ 67． 94
生理盐水组 8 — 1． 8900 ± 1． 08403 —
注:与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
3． 2 BoAE对荷瘤小鼠脾重及脾脏指数的影响
实验研究结果显示，BoAE 高、中、低剂量组与生
理盐水相比，差异极其显著(P ＜ 0． 01)，说明 BoAE 三
个剂量组均能明显促进小鼠脾脏重量的增加。BoAE
对荷瘤小鼠脾指数的影响如下所述，BoAE 高、中剂量
组与生理盐水组比较差异显著(P ＜ 0． 01)，BoAE 低剂
量组与生理盐水组比较无显著差异。结果见表 2。
表 2 BoAE对荷瘤小鼠脾重及脾指数的影响(珋x ± s)
分组 n
剂量
(g /kg)
脾重(g) 脾指数(g /g)
BoAE高剂量组 8 17． 6 0． 2392 ±0． 0180＊＊ 0． 0095 ±0． 00065＊＊
BoAE中剂量组 8 8． 8 0． 1981 ±0． 0191＊＊ 0． 0077 ±0． 00060＊＊
BoAE低剂量组 8 4． 4 0． 1859 ±0． 0247＊＊ 0． 0072 ±0． 00109*
环磷酰胺组 8 0． 32 0． 1223 ±0． 0238* 0． 0048 ±0． 00103*
生理盐水组 8 — 0． 1425 ±0． 0198 0． 0063 ±0． 00108
注:与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
3． 3 BoAE对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响
实验研究结果显示，BoAE 各个剂量组对 Cona 诱
导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞转化能力有显著影响，BoAE
高、中、低剂量组与生理盐水组比较差异均非常显著
(P ＜ 0． 01)。即 BoAE各个剂量组均能明显提高 ConA
诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力，结果见表 3。
表 3 BoAE对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响(珋x ± s)
组别 n 剂量(g /kg) 淋巴细胞增殖能力
BoAE高剂量组 8 17． 6 0． 5760 ± 0． 04912＊＊
BoAE中剂量组 8 8． 8 0． 3928 ± 0． 02700＊＊
BoAE低剂量组 8 4． 4 0． 3599 ± 0． 05385＊＊
环磷酰胺组 8 0． 32 0． 4123 ± 0． 06453＊＊
生理盐水组 8 — 0． 2225 ± 0． 03055
注:与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
3． 4 BoAE对荷瘤小鼠 NK细胞活性的影响
实验研究结果显示，经灌胃给予小鼠三个剂量的
BoAE 4 周，测定 BoAE 对小鼠 NK 细胞活性的影响。
通过下表的实验结果和统计数据可以发现，BoAE 高
剂量组、生理盐水组和环磷酰胺组比较，均有非常显著
性差异(P ＜ 0． 01)，BoAE 中、低剂量组与生理盐水组
和环磷酰胺组比较都有统计学意义(P ＜ 0． 05)。即
BoAE在各剂量组均能提高小鼠 NK 细胞活性。结果
见表 4。
表 4 BoAE对荷瘤小鼠 NK细胞活性的影响(珋x ± s)
组别 n 剂量(g /kg) NK细胞活性(%)
BoAE高剂量组 8 17． 6 41． 645 ± 6． 82358＊＊
BoAE中剂量组 8 8． 8 37． 785 ± 1． 77484*
BoAE低剂量组 8 4． 4 37． 955 ± 3． 20319*
环磷酰胺组 8 0． 32 34． 7600 ± 8． 75398*
生理盐水组 8 — 17． 2700 ± 2． 75772
注:与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
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3． 5 BoAE对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响
实验研究结果显示，在给予小鼠三个剂量的
BoAE 4 周后，进行小鼠巨噬细胞鸡红细胞吞噬率和吞
噬指数的检测，BoAE对荷瘤小鼠吞噬率影响较大，其
中 BoAE高、中剂量组与生理盐水组和环磷酰胺组比
较，差异均有极显著性(P ＜ 0． 01)，BoAE 低剂量组与
生理盐水组和环磷酰胺组比较都有统计学意义(P ＜
0． 05)。即 BoAE各剂量组均具有增强小鼠腹腔巨噬
细胞吞噬功能的作用。结果见表 5。
表 5 BoAE对荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(珋x ± s，n = 8)
分组 n 剂量(g /kg) 吞噬率(%) 吞噬指数(g /g)
BoAE高剂量组 8 17． 6 38． 634 ± 2． 8267＊＊ 0． 54 ± 0． 1253＊＊
BoAE中剂量组 8 8． 8 36． 726 ± 1． 6581＊＊ 0． 49 ± 0． 1537＊＊
BoAE低剂量组 8 4． 4 30． 393 ± 6． 7537* 0． 47 ± 0． 1726*
环磷酰胺组 8 0． 32 18． 122 ± 1． 0238* 0． 36 ± 0． 2147*
生理盐水组 8 — 22． 030 ± 2． 8632 0． 39 ± 0． 1362
注:与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
4 讨论
现代医学表明，人体肿瘤在发生﹑发展过程中产
生或分泌免疫抑制因子，从而导致肿瘤患者免疫功能
紊乱，脾脏是机体最大的免疫器官，占全身淋巴组织总
量的 25%，含有大量的淋巴细胞和巨嗜细胞，是机体
细胞免疫和体液免疫的中心。故脾脏发育情况及系数
是衡量机体免疫功能的重要指标。
自然杀伤(NK)细胞是重要的免疫细胞，能够诱导
靶细胞凋亡，介导抗体依赖细胞毒性，对杀伤肿瘤细胞
起重要作用，其通过血液循环全天候监控并杀死肿瘤
细胞，有效抵制肿瘤细胞的发生、发展和转移，NK 细
胞杀伤活性是评价机体免疫功能强弱的重要指标。同
时伴刀豆蛋白 A(ConA)可诱导脾淋巴细胞增殖，虽然
不能反应细胞的全部功能，但其转化率高低可以反映
细胞的活化程度。T细胞在体外受到非特异性有丝分
裂原如 ConA的作用后能转化、增殖为淋巴母细胞，细
胞体积增大，代谢旺盛，蛋白和核酸的合成增加，其转
化率的高低可以反映机体的细胞免疫功能。而巨噬细
胞是来自血液中的单核细胞，内含溶酶体，吞噬力和黏
附力都很强，常用于免疫增强药物的活性评价，故测定
巨噬细胞吞噬功能可反映机体非特异性免疫功能的强
弱［7 － 10］。
通过对玻璃苣体内的化学成分进行了初步分析发
现［11］，在服用玻璃苣水提取物中含有有印度天芥菜
碱、加拿大麻糖、仰卧天芥菜宁、穿心莲内酯、华丽蛇鞭
菊素等 5 种成分，其中加拿大麻糖、华丽蛇鞭菊素、印
度天芥菜碱都具有抗肿瘤作用［12］。因此本实验对玻
璃苣水提物抗肿瘤及其作用机制机型初步研究，研究
结果发现，玻璃苣水提物对 H22荷瘤小鼠具有一定的
抑瘤作用，能够有效提高脾脏系数，在改善脾脏免疫功
能方面，玻璃苣既对脾淋巴细胞的增殖起活化作用又
提高了脾 NK细胞的杀伤活性，且脾脏的免疫功能在
一定范围内随着剂量增大而增强。其作用机理可能是
因为玻璃苣水提取物中具有丰富的营养促进了脾脏的
发育，另一方面，可能与玻璃苣水提物中具有多种免疫
活性物质，调节了脾脏的免疫功能有关，这有待于进一
步深入研究。
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