全 文 ：in different time and was determined by high performance liquid chromatography spectrometry． The parameters of pharmacokinetic have been
calculated by Kinetica software with statistical moment models，analyzed with SPSS． Ｒesults:The results showed that some parameters such
as the peak concentration(Cmax)and area under plasma concentration-time curve(AUC)were increased in rats treated with ZD，while clear-
ance rate(Cl)was reduced． Conclusion:Citrus Aurantium could improving the bioavailability of OMZ in rats． In consideration of the chemi-
cal components of Citrus Aurantium，OMZ probably could inhibit the activity of drug metabolism enzyme partly．
Key words Citrus aurantium(枳壳);omepazole;pharmacokinetics;HPLC
佛甲草对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及其免疫机制研究
周 青，连磊凡，吴丽珍，眭荣燕，曹性玲，黄志华*
(赣南医学院，赣州 341000)
摘 要 目的:观察佛甲草对 S180 荷瘤小鼠肿瘤生长、T淋巴细胞亚群及细胞因子水平的影响，进一步研究其抗肿瘤的免疫
机制。方法:采用小鼠右前肢腋部皮下接种 S180 细胞建立移植瘤模型，观察佛甲草提取物 4、8 g /kg 连续给药 14 天对荷瘤小鼠瘤
重、抑瘤率、胸腺及脾脏指数的影响; 应用流式细胞术( FCM) 分析荷瘤小鼠外周血 CD3 +、CD4 +、CD8 +细胞在 T 淋巴细胞中的百分
含量，并计算 CD4 + /CD8 +比值; 酶联免疫吸附法( ELISA) 检测荷瘤小鼠血清白细胞介素-6( IL-6) 、白细胞介素-10( IL-10) 、肿瘤坏死
因子-α( TNF-α) 水平。结果:佛甲草 4、8g /kg均可显著抑制小鼠 S180 肉瘤的生长，抑瘤率分别高达 84． 26%、62． 24%，明显高于环
磷酰胺组的抑瘤率 29． 28%，且能有效的调节荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数; 显著提高荷瘤小鼠 CD3 +、CD4 + T 细胞的百分含量，
降低 CD8 + T 细胞的百分含量，CD4 + /CD8 +比值明显升高; 显著提高荷瘤小鼠血清细胞因子 IL-6、IL-10 水平，对 TNF-α水平有升高
趋势。结论:佛甲草可通过增强荷瘤小鼠抗肿瘤免疫应答功能，发挥其抗肿瘤活性。
关键词 佛甲草;荷瘤小鼠;抑瘤率;免疫
我们近期研究结果显示佛甲草能够对抗急、慢性炎症反
应［1］，对大鼠的佐剂性关节炎具有治疗作用。现代药理研究证
实［2］，许多清热解毒中药具有抗肿瘤的作用;现代流行病学的
统计显示，大约有 15 ～ 20%的癌症发生与慢性炎症相关［3］，由
此，我们推测佛甲草可能具备抗肿瘤活性。本实验以小鼠 S180
移植性肿瘤为模型，以瘤重抑制率为观察指标，通过对小鼠外
周血 T 淋巴细胞亚群及血清细胞因子水平的检测，从细胞免疫
的角度分析佛甲草提取物的抗肿瘤作用机制，为佛甲草治疗恶
性肿瘤提供实验依据。
1 材料和方法
1． 1 试验药物 佛甲草购于赣州市医药公司，取适量佛甲草加
两倍量的蒸馏水煮沸 30 min后过滤，残渣再用蒸馏水加热提取
1 次。合并两次滤液，通过旋转蒸发仪浓缩至适量，3 倍量 95%
的乙醇放置 48 h，通过旋转蒸发仪和减压抽滤器过滤，回收滤液
中的乙醇至无醇味，并浓缩至 7． 2g /ml 生药液备实验用。注射
用环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号:12041125。
1． 2 动物与瘤株 SPF 级昆明小鼠，雄性，6 ～ 8 周龄，体重 18
～ 22g，由湖南省斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号:
SCXK(湘)2009-0004，合格证号:HNASLKJ20120217。鼠源 S180
肉瘤细胞，由中国医学科学院医药研究所提供，赣南医学院科
研中心传代培养。
1． 3 试剂 叶绿素蛋白(PerCP)标记的抗小鼠 CD3e 抗体(货
号:553067)、藻红蛋白(PE)标记的抗小鼠 CD8a 抗体(货号:
553032)、别藻青蛋白(APC)标记的抗小鼠 CD4 抗体(货号:
553051)均购自美国 BD 公司。小鼠 IL-6、IL-10、TNF-α ELISA
试剂盒购自博士德生物科技有限公司。
1． 4 仪器 BD Calibur流式细胞仪，美国 BD公司;连续光谱多
功能酶标仪，美国热电公司;Ｒ-210 /215 旋转蒸发仪，瑞士 Buchi
公司;MIKＲD22Ｒ型台式高速冷冻离心机，德国 Hettich 公司;
TS100-F型生物倒置显微镜，日本尼康公司。
1． 5 方法 参照文献［4］方法，无菌条件下抽取传第三代后接
种 7 天的 S180 瘤源小鼠的腹水(黄色清亮液体)，离心，弃上清
液，无菌生理盐水调至细胞浓度为 1 × 107 个 / rnl，每只小鼠右腋
部皮下接种 0． 2 rnl，建立小鼠实体瘤模型。正常组小鼠每只接
种 0． 2 ml生理盐水。24 h 后，将小鼠称重并随机分为正常组、
模型组、阳性对照组(环磷酰胺，50 mg /kg)、佛甲草提取物低(4
g /kg)、高(8 g /kg)剂量组，每组 10 只，环磷酰胺腹腔注射给药，
其余均灌胃给药，每日 1 次，连续 14 天。
1． 5． 1 抑瘤率、胸腺指数及脾指数的测定 末次给药 24 小时
后颈椎脱臼处死小鼠，迅速剥取瘤块，取出胸腺和脾脏分别称
重。计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数。
抑瘤率(﹪)=(模型组平均瘤重 －给药组平均瘤重)/模型
组平均瘤重 × 100%
胸腺(脾)指数 =胸腺(脾)质量(mg)/体重(g)
1． 5． 2 流式细胞术检测 T 淋巴细胞亚群 末次给药 24 h 后，
小鼠处死前摘眼球采血。取肝素抗凝血 20 μl，加入 180 μl 红
38中药药理与临床 2013;29(6)
* 通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2013.06.027
细胞裂解液，混匀后，静置 10 min，加入 2 ml PBS，600 × g离心 5
min，弃上清，100 μl PBS 重悬白细胞，加入 CD3、CD4 和 CD8 混
合抗体(2:1:1)8 μl，避光孵育 15 min，上机检测，收集数据，
Cellqeust软件分析 CD3 +、CD4 +、CD8 + T 细胞百分率，并计算
CD4 + /CD8 +比值。
1． 5． 3 酶联免疫吸附法检测血清细胞因子水平 另取血液静
置后，800 × g离心 10 min，分离血清，ELISA方法检测血清细胞
因子 IL-6、IL-10、TNF-α水平，具体检测方法严格按试剂盒说明
书操作。
2 结果
2． 1 佛甲草提取物对小鼠移植性肿瘤 S180 的抑制作用 佛甲
草提取物 4、8 g /kg 对小鼠 S180 肿瘤细胞均有显著的抑制作
用，抑瘤率分别高达 84． 26%，62． 24%，明显高于环磷酰胺组的
抑瘤率 29． 28%，且小鼠体重也明显高于环磷酰胺组。提示佛
甲草提取物对小鼠移植性肿瘤 S180 的抑制作用优于环磷酰胺，
而毒副作用却较环磷酰胺小，同时佛甲草提取物 4，8 g /kg 能上
调荷瘤小鼠的胸腺指数和下调脾脏指数，结果见表 1。
表 1 佛甲草提取物对小鼠移植性肿瘤 S180 的抑制作用(珋x ± s，n
= 10)
组别
剂量
(g /kg)
体重
(g)
瘤重
(mg)
抑瘤率
(%)
胸腺指数
(mg/g)
脾脏指数
(mg/g)
正常对照 33． 71 ± 2． 21* 1． 88 ± 0． 50＊＊ 5． 65 ± 1． 58＊＊
模型对照 28． 50 ± 2． 47 64． 16 ± 18． 50 0． 63 ± 0． 08 23． 20 ± 1． 64
环磷酰胺 0． 05 25． 43 ± 1． 92 49． 63 ± 17． 05 29． 28 0． 69 ± 0． 26 12． 42 ± 2． 70＊＊
佛甲草 4 31． 62 ± 3． 22 10． 10 ± 3． 827＊＊ 84． 26 1． 24 ± 0． 34* 17． 27 ± 2． 49*
佛甲草 8 30． 63 ± 3． 32 24． 23 ± 19． 80＊＊ 62． 24 0． 98 ± 0． 33 18． 94 ± 5． 34*
与模型组比较 * P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01(下同)
2． 2 佛甲草提取物对 S180 荷瘤小鼠外周血 T淋巴细胞亚群的
影响 从图 1、表 2 可知，佛甲草提取物 4、8g /kg 均能提高荷瘤
小鼠外周血 CD3 +、CD4 + T 细胞的百分含量及 CD4 + /CD8 +比
值，降低荷瘤小鼠外周血 CD8 + T 细胞的百分含量，表明经佛甲
草提取物治疗后，荷瘤小鼠的免疫功能得到显著改善。
图 1 佛甲草提取物对 S180 荷瘤小鼠外周血 T 淋巴细胞亚群的影响
( A: 正常组; B: 模型组; C:环磷酰胺组; D: 4 g /kg佛甲草; E: 8 g /kg佛甲草)
表 2 佛甲草提取物对 S180 荷瘤小鼠外周血 T 淋巴细胞亚群的影
响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
(g /kg)
CD3 + T
(%)
CD4 + T
(%)
CD8 + T
(%)
CD4 + /CD8 +
正常对照 68． 20 ± 1． 77＊＊ 66． 76 ± 3． 98＊＊ 19． 71 ± 1． 96＊＊ 3． 41 ± 0． 38＊＊
模型对照 58． 40 ± 2． 23 50． 96 ± 2． 75 34． 18 ± 3． 25 1． 51 ± 0． 23
环磷酰胺 0． 05 87． 55 ± 2． 92＊＊ 72． 63 ± 1． 26＊＊ 14． 07 ± 2． 36＊＊ 5． 27 ± 0． 93＊＊
佛甲草 4 66． 93 ± 1． 96＊＊ 60． 47 ± 1． 83＊＊ 24． 57 ± 2． 01＊＊ 2． 47 ± 0． 25*
佛甲草 8 67． 83 ± 4． 59＊＊ 62． 58 ± 3． 91＊＊ 23． 60 ± 0． 91＊＊ 2． 65 ± 0． 15*
2． 3 佛甲草提取物对 S180 荷瘤小鼠血清细胞因子水平的影
响 从表 3 可见，佛甲草提取物 4、8g /kg 均能提高荷瘤小鼠血
清 IL-6、IL-10 水平;对 TNF-α 水平有升高趋势，但无统计学意
义。
表 3 佛甲草对 S180 荷瘤小鼠血清细胞因子水平的影响(珋x ± s，n
= 10)
组别
剂量
(g /kg)
IL-6
(pg /ml)
IL-10
(pg /ml)
TNF-α
(pg /ml)
正常对照 91． 12 ± 25． 99 172． 36 ± 48． 01* 0． 66 ± 0． 16
模型对照 121． 12 ± 55． 85 7． 52 ± 6． 83 0． 70 ± 0． 17
环磷酰胺 0． 05 77． 84 ± 16． 56 260． 28 ± 89． 87＊＊ 1． 01 ± 0． 13＊＊
佛甲草 4 222． 06 ± 85． 81* 286． 91 ± 161． 82＊＊ 0． 73 ± 0． 10
佛甲草 8 202． 44 ± 111． 77* 304． 48 ± 113． 40＊＊ 0． 78 ± 0． 27
3 讨论
肿瘤的发生、发展和转归与机体的免疫功能，特别是与细
胞免疫功能密切相关。细胞免疫在机体的免疫监测及抗肿瘤免
疫中都起着重要的作用［5］。因此，正确评价荷瘤机体的免疫状
态是研究抗肿瘤药物作用机制的重要前提。
胸腺和脾脏是机体的重要的免疫器官，其脏器指数是衡量
机体免疫功能的基本指标。随着肿瘤的发展，脾脏逐渐从正免
疫调节转变为负免疫调节，脾脏的过度增大标志着其进入了负
免疫调节阶段。研究发现，绝大多数非淋巴系荷瘤小鼠(如
S180、H22、CA761)的脾脏均出现过度增大的现象，结果显示，荷
瘤机体的脾指数与脾脏的细胞总数呈显著正相关性，脾脏内细
胞的积累为脾脏发挥负免疫调节作用提供了细胞支持，这与各
类免疫细胞转移至脾脏后滞留有直接的关系，其中 CD8 + T 细
胞的积累最显著。脾脏的免疫抑制作用与 CD8 + Treg 细胞有密
切的关系，促进了肿瘤的发展和转移［6］。而胸腺严重萎缩，T、B
细胞增殖力下降等，也是导致肿瘤无限制增长和免疫逃避的重
要因素。本研究显示，小鼠荷瘤后机体的免疫系统功能低下，导
致胸腺萎缩，胸腺指数下降;脾脏肿大，脾指数升高。佛甲草提
取物明显改善了荷瘤小鼠脾指数的异常升高及胸腺指数的下
降，这可能与佛甲草提取物降低 CD8 + T 细胞的表达、提高
CD4 + /CD8 +的比值有关。提示佛甲草提取物对小鼠免疫器官
具有保护作用。
T 细胞是机体抗肿瘤免疫应答的主体，其中 CD3 + T 细胞
代表成熟淋巴细胞，是细胞免疫中主要的活性细胞。它按 CD
表型分为 CD4 +和 CD8 +两大亚群。CD4 +又称辅助性 T 细胞，
可识别肿瘤细胞分泌的可溶性抗原，参与 B 细胞、巨噬细胞、自
48 中药药理与临床 2013;29(6)
然杀伤细胞(NK)和细胞毒 T 淋巴细胞(CTL)的激活，进而发
挥抗瘤作用;另外，CD4 + T 细胞还可释放多种细胞因子如 IL-2、
IL-6、IL-10、IFN-γ等参与抗肿瘤效应［7，8］。CD8 + T 细胞主要是
杀伤性 T 细胞(TC)和抑制性 T 细胞(TS)，TC可直接特异性地
杀伤靶细胞，TS则具有免疫抑制作用。在 T 淋巴细胞网络中，
CD4 +和 CD8 + T 细胞处于调节枢纽地位，其数量和功能发生异
常时就可引起机体免疫功能紊乱，导致肿瘤的发生和抗肿瘤能
力的下降，表现为 CD3 + T 细胞总数和 CD4 + T 细胞减少，
CD4 + /CD8 +比值下降，这可能与肿瘤细胞分泌可溶性免疫抑制
因子有关［9］。本研究结果显示，荷瘤小鼠外周血 T 细胞亚群中
不同细胞比例出现异常，表现为 CD3 +、CD4 + T 细胞减少，
CD8 + T 细胞增多，这些变化通过 CD4 + /CD8 +的比值得到更敏
感的反映。经佛甲草提取物 4，8g /kg 治疗后的荷瘤小鼠
CD3 +、CD4 + T 细胞显著增多，CD8 + T 细胞明显降低;各剂量组
可以明显改善 CD4 + /CD8 +比值的失衡状态，表明佛甲草提取
物可增加荷瘤小鼠体内 T 细胞数量，并主要通过上调 CD4 + T
细胞促进抗肿瘤免疫功能。
细胞因子是一类具有免疫调节作用的重要蛋白质物质，在
机体免疫应答等诸多方面起着重要作用。越来越多的研究提
示，同一细胞因子在不同微环境下可以发挥不同的生物学效
应。IL-10 因其具有的免疫抑制功能而广为人知。新近研究报
道 IL-10 也具有免疫刺激作用，Mumm 等［10］实验表明，IL-10 是
诱导细胞毒性酶表达的关键调控因子，介导了肿瘤内 T 细胞浸
润和 CD8 + T 细胞的细胞毒性作用，其主要是凭借肿瘤浸润
CD8 + T 细胞高表达的 IL-10 受体和产生 IFN-γ 来诱导细胞毒
性酶反应的。Dobrzanski等［11］从癌症患者长期幸存者体中培养
转移 Th1 细胞发现，长期幸存者产生显著高水平的 IL-10，推测
持续的高水平 IL-10 可诱导 IFN-γ 的产生来促进免疫激活作
用，引起抗肿瘤反应，表明 IL-10 可以有免疫刺激作用，这依赖
于细胞因子的水平。IL-6 和 TNF-α 是被激活的巨噬细胞分泌
的两种重要的细胞因子，在参与机体的炎症反应和抗感染防
御、介导抗肿瘤和调节机体的免疫功能中发挥重要作用。有报
道，抗癌新和灯台叶等中药的抗肿瘤机制可能与升高荷瘤机体
细胞因子水平有关［12，13］。本实验结果显示，佛甲草提取物 4、
8g /kg均能提高荷瘤小鼠血清 IL-6、IL-10 和 TNF-α 水平，表明
佛甲草提取物可通过促进 CD4 + T 细胞分泌细胞因子如:IL-6、
IL-10 和 TNF-α等，以改善免疫系统状态从而达到抗肿瘤的目
的。
总之，我们应用 FCM、ELISA等技术，从瘤重的抑制率、免疫
器官的重量变化、T淋巴细胞亚群分布及细胞因子分泌等方面，
探讨了佛甲草提取物的抗肿瘤作用及免疫机制，研究结果表
明，佛甲草提取物具有较强的体内抗肿瘤活性，且在抑制肿瘤
生长的同时可保护和增强荷瘤机体的特异性和非特异性免疫
功能，与常规化疗药物比较，具有安全有效的优势，显示出佛甲
草作为一种抗肿瘤药物潜在的临床应用价值，值得今后进一步
深入研究。
参考文献
1 廖跃华，吴丽珍，程赣中，等．佛甲草抗炎作用研究． 中国实验方剂学
杂志，2011;17(3)∶ 142 ～ 144
2 刘磊磊，陈娟，师彥平．清热解毒中药抗肿瘤作用研究进展． 中草药，
2012;43(6)∶ 1203 ～ 1212
3 Bunt SK，Yang L，Sinha E et a1． Ｒeduced inflammation in the tumor mi-
croenvironment delays the accumulation of myeloid-derived suppressor cells
and limits tumor progression． Cancer Ｒes，2007;67(20)∶ 10019 ～ 10026
4 徐叔云，卞如濂，陈修． 药理实验方法学． 人民卫生出版社． 第 3 版，
2002∶ 1757
5 Kuss I，Hathaway B，Ferris Ｒ L，et a1． Imbalance in absolutecounts of T
lymphocyte subsets in patients with head and neck cancer and its relation to
disease． Adv Otorhinolaryngol，2005;7(62)∶ 161 ～ 172
6 董慧，郑国强，滕安国，等．荷瘤小鼠脾脏过度增大的机制． 肿瘤防治
研究，2012;39(8)∶ 940 ～ 943
7 Perez-Diez A，Joncker NT，Choi K，et a1． CD4 cells can be more efficient
at tumor rejection than CD8 cells． Blood，2007;109(12)∶ 5346 ～ 5354
8 Minami K，Yanagawa Y，Iwabuchi K，et al． Negative feedback regulation of
T helper typel(Thl)/Th2 cytokine balance via dendritic cell and natural killer
T cell interactions． Blood，2005;106(5)∶ 1685 ～ 1693
9 Casati C，Dalerba P，Ｒivoltini L，et al． The apoptosis inhibitor protein sur-
vivin induces tumor-specific CD8 + and CD4 + T cells in colorectal cancer pa-
tients． Cancer Ｒes，2003;63(15)∶ 4507 ～ 4515
10 Mumm JB，Emmerich J，Zhang XQ，et al． IL-10 elicits IFNgamma-de-
pendent tumor immune surveillance． Cancer Cell，2011;20(6)∶ 781 ～ 796
11 Dobrzanski MJ，Kathleen A，Khaliquzzaman A，et al． Immunotherapy
with IL-10 and IFN-gamma-producing CD4 effector cells modulate Natural
and Inducible CD4 TＲeg cell subpopulation levels:observations in four
cases of patients with ovarian cancer． Cancer Immunol Immunother，2012;
61(6)∶ 839 ～ 854
12 肖顺汉，刘明华，钟琳，等． 克癌新对荷瘤小鼠 IL-2、IL-6、IL-12 和
TNF-α水平的影响．中药药理与临床，2008;24(2)∶ 82 ～ 84
13 韩芳．灯台叶醇提物对 C57BL /6 荷瘤小鼠免疫功能的影响．西北药
学杂志，2013;28(2)∶ 168 ～ 170
Antitumor effect and immune mechanism of Sedum lineare on tumor-bearing mice
Zhou Qing，Lian Leifan ，Wu Lizhen，Sui Ｒongyan，Cao Xingling，Huang Zhihua
(Gannan Medical University，Ganzhou 341000)
Objective:To observe the effect of Sedum lineare on tumor growth and the level of T lymphocyte subsets and cytokines inS180 tumor-
bearing mice． Further explore the immune mechanism of anti-tumor． Methods:S180-bearing mice model were established by subcutaneously
inoculating S180 ascitic tumor into the right armpit． Sedum lineare (4，8 g /kg)continuous administration for 14 days． Calculated tumor
weight ，the inhibition rate of tumor，thymus and spleen index． Flow cytometry (FCM)were used to survey the percentage of CD3 +，CD4 +，
CD8 + positive cells in the T lymphocytes，and calculate the ratio of CD4 + /CD8 + ． The levels of serum interleukin-6 (IL-6)，interleukin-10
58中药药理与临床 2013;29(6)
(IL-10)and tumor necrosis factor alpha(TNF-α)were detected by Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)． Ｒesults:The inhibition
rate of the tumor growth in the SLT low and high dose groups (4 g /kg，8 g /kg)are 84． 26% and 62． 24%，obviously higher than CTX group
29． 28% ． After treated with SLT，the thymus index was up-regulated，while the spleen index was down-regulated The percentage content of
CD3 +，CD4 + lymphocyte T were improved，while the percentage of CD8 + lymphocyte T were reduced，and CD4 + /CD8 + was increased
markedly． The levels of serum IL-6 and IL-10 were up-regulated significantly，and the level of TNF-α has the tendency to rise． Conclusion:
Sedum lineare had an anti-tumor effect on S180-bearing mice，and its mechanism result of improving the immune response function．
Key words Sedum Lineare(佛甲草);tumor-bearing mice;the inhibition rate of tumor;immunologic mechanism
香青兰抗血小板聚集及抗血栓作用
*
阿迪拉木·阿比利米提，王新玲，热娜·卡斯木＊＊，阿衣努尔·热合曼，
派日黛姆·乌布勒，娜地拉·热依木，王晓梅，胡君萍
(新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830011)
摘 要 目的:评价香青兰提取物及不同萃取部位体外抗血小板聚集及抗血栓作用。方法:应用比浊法测定香青兰水提物、
醇提物及三个不同萃取部位体外抗血小板聚集作用，采用 FeCl3 诱导大鼠颈动脉血栓模型，小鼠肺血栓模型及大鼠下腔静脉血栓模
型 3 种实验性血栓模型，考察香青兰不同溶剂提取物抗血栓形成作用。结果:香青兰醇提物、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等萃取部位以
10μg / ml、100μg / ml、1000μg / ml 均具有不同程度的抑制血小板聚集作用，10μg / ml 为有效剂量; 香青兰不同提取物 100mg /kg、
400mg /kg延长 FeCl3 诱导大鼠颈动血栓形成时间，并减轻血栓湿质量; 提高胶原蛋白-肾上腺素混合诱导剂所致肺血栓小鼠的存活
率; 减轻结扎法所致下腔静脉血栓湿质量，且其中乙醇为溶剂剂量为 400 mg /kg的香青兰提取物效果最为显著。结论:香青兰醇提
物与正丁醇萃取部位具有较强的抗血小板聚集作用;香青兰醇提物具有显着的抗血栓作用。
关键词 香青兰;凝血酶;血小板聚集;抗血栓
香青兰(Dracocephalum moldavica L．)为唇形科青兰属植
物，以干燥的地上部分入药［1］。分布于我国东，北西，北及华北
等地区，特别是新疆，资源丰富［2］，主要含有黄酮、挥发油［3］等。
香青兰是民间用于治疗心脑血管疾病的常用维吾尔药［4］，研究
发现［5］香青兰水煎剂单方在维吾尔医用于预防和治疗冠心病
及血液质旺盛(高血压)、寒性神经头疼、寒性感冒、活血化瘀、
通路开窍及止痛解毒等。其作用机制可能与血小板聚集率、抗
质脂过氧化损伤及改善患者血液粘度、心肌缺血等因素有关。
本文拟对香青兰提取物及三个不同萃取部位的体外抗血小板
聚集实验与香青兰不同溶剂提取物对不同动物体内血栓形成
模型实验，对香青兰进行了活血化瘀作用研究，为临床运用香
青兰治疗心血管方面疾病研究奠定基础。
1 材料
1． 1 试验药物 香青兰地上部分 9． 8kg，由新疆医科大学药学
院生药教研室帕丽达教授鉴定。晒干，粉碎到 1 ～ 2cm，加水 8
～ 10 倍，回流提取 3 次，合并浓缩提取液所得的膏浸干燥。水
提浸膏与水混悬，依次用极性不同的有机溶剂氯仿、乙酸乙酯、
正丁醇萃取回收有机溶剂，收集各部分浸膏，备用。醇提物的制
备方法为香青兰地上部分 10kg，加 8 倍 95%乙醇溶液回流提取
3 次，合并浓缩提取液所得的膏浸干燥，实验时配成不同的浓
度。银杏叶片，哈药药业有限公司，批号:090303。
1． 2 动物 新西兰种兔，雄性，体重:1． 8 ± 0． 5kg。饲养环境:
每 12 h明暗交替，温度 21 ± 2℃，湿度 40 ～ 45%，由新疆医科大
学实验动物中心 2011-0004 提供。SD大白鼠，KM小鼠(疆维吾
尔自治区疾控中心实验动物中心提供，大鼠雌雄各半，300 ～
400g。温度:控制目标为 23℃ ± 2℃;相对湿度:控制目标为
40% ～60%，有空气净化装置;饲料:自由摄食经灭菌的啮齿类
动物颗粒饲料;饮水:自由饮水，由动物饲养人员添加;光照:人
工照明，每 12 h明暗交替;每 3 天更换垫料一次。
1． 3 试剂 凝血酶(Sigma公司进口分装);阿司匹林(Sigma公
司进口分装，批号:200064);胶原蛋白(Sigma 公司进口分装);
盐酸肾上腺素注射液(天津药业集团新郑股份有限公司，批号:
071101)。6-keto-PGF1α放免试剂盒(北京北方生物技术研究
所，批号 20130110 )，TXB2 放免试剂盒(北京北方生物技术研
究所，批号 20130110 )。
1． 4 仪器 BC-2300 准全自动三分群血液细胞分析仪(深圳迈
瑞生物医疗电子股份有限公司);490-4D血小板凝聚仪(CHＲO-
NO-LOG，USA);全自动酶标仪(BECKMAN AD340);冷冻干燥
机(北京博医康实验仪器有限公司，FD);半导体点式温度计(西
门子电子仪器厂);NU-6511E 超低温冰箱(日本 NUAIＲE 公
司)。
1． 5 方法
1． 5． 1 体外抗血小板聚集实验［6，7］ 从家兔耳缘静脉取血，3．
8%枸橼酸钠 1∶ 9 抗凝。先以 1000 rpm 离心 10 min 得到上层
68 中药药理与临床 2013;29(6)
* ［基金项目］2012 年国家科技支撑计划课题维吾尔，哈萨克药生物活性成分筛选和现代标准组分库建设 ( 2012B) ＊＊通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2013.06.028