全 文 ：琐琐葡萄多糖颗粒剂中多糖的含量测定＊
袁 羿＊＊, 刘 涛 , 马 龙＊＊＊, 王 勇 , 李瑞萱
(新疆医科大学 , 新疆 乌鲁木齐 830011)
摘要:目的 建立测定琐琐葡萄多糖颗粒剂中多糖的含量方法。方法 采用苯酚-硫酸法测定。结果 葡
萄糖的检测浓度在 20.00～ 100.00μg/ ml范围内与吸光度呈良好线性关系(r =0.999 8);平均回收率为 98.36%,
RSD=0.85%(n =3)。结论 该方法简便 、准确 、重现性好 ,可用于该制剂的质量控制。
关键词:琐琐葡萄;多糖;颗粒剂;苯酚-硫酸法;含量测定
中图分类号:R9 文献标识码:A 文章编号:1009-5551(2010)05-0512-02
Study on determination of Polysaccharide in Polysaccharides
from vitis viniferal L.Granules
YUAN Yi , LIU Tao , MA Long , et al
(X inj iang Medical Universi ty , Urumqi 830011 , China)
Abstract:Objective To develop a method for de termination of Po ly saccharide in Po lysaccharides f rom vitis
viniferal L.Granules.Methods The determination w as perfo rmed by pheno l-sulfuric acid method.Results
Glucose consistency o f w hich the testing range is f rom 20.00 ～ 100.00 μg/ml showed a good linear rela-
tionship w ith gluco se abso rbency(r =0.999 8), w ith an average recovery rate of 98.38%(RSD=0.85%,
n =3).Conclusion T his method w as simple , accurate and reproducible , and avai lable for quali ty cont ro l
of the granules.
Key words:vitis viniferal L;Polysaccharides;Granules;phenol-sulfuric acid method;content determination
琐琐葡萄多糖颗粒剂是以维药琐琐葡萄为原料
经提取加工制备而成 ,多糖是其有效活性成份 。多
糖具有增强免疫 、抗氧化 、抗肿瘤 、降血压 、降血脂 、
降血糖 、抗衰老 、抗辐射等多方面的药理作用 ,是近
年来天然药物研究的热点课题之一[ 1] 。多糖类药物
将是一类新型 、高效 、低毒药物 ,具有广泛的应用前
景[ 2] 。本文利用苯酚 —硫酸法测定琐琐葡萄多糖颗
粒剂中多糖的含量 ,具有快速 、灵敏 、准确等优点 ,可
为其质量控制提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 UV —2550PC 紫外分光光度计(日本
岛津公司);AB265-S 1/10万电子分析天平(瑞士)。
1.2 试药 葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定
所);苯酚 、硫酸均为分析纯;琐琐葡萄多糖颗粒剂
(自制)。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 取 105℃干燥 3 h 的葡
萄糖 ,精密称定 50.00 mg ,以蒸馏水定容至 500 m l
容量瓶中 ,作为对照品溶液 。
2.1.2 供试品溶液的制备 称取琐琐葡糖多糖颗
粒剂 2.5 g ,加蒸馏水 100 m l充分溶解 ,加入 4倍体
积的无水乙醇。置冰箱 12 h , 离心分离 15 min
(4 000 r/min),沉淀加蒸馏水 100 ml充分溶解后依
法再处理 2次 ,最后所得沉淀用 80%乙醇洗涤两
次 ,80℃下真空干燥 , 用适量蒸馏水溶解并转移至
500 m l容量瓶中 ,用蒸馏水定容至刻度 ,摇匀备用。
2.2 测定波长的确定 分别吸取一定量的葡萄糖对
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基金项目:国家自然科学基金项目(30660157);高等学校博士学科点专项科研基金项目(200807600002)。
作者简介:袁 羿(1980-),男 ,硕士研究生 ,研究方向:食品毒理。
通讯作者:马 龙 ,男(回族),教授 ,博士生导师。 E-mail:ml@xjmu.edu.cn。
照品溶液和已处理好的供试溶液经苯酚–硫酸显色
后 ,随行做空白对照 ,分别在 400 ～ 600 nm 波长范围
内扫描。结果表明 ,葡萄糖对照品和供试品的最大吸
收峰均在 488 nm处 ,故选 488 nm作为检测波长。
2.3 标准曲线的绘制[ 3] 精密量取葡萄糖对照品
溶液 0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、1.0 m l ,分别置 25 ml具塞
试管中 ,加水稀释至 1.0 m l。精密加入 5%苯酚液
1.0 ml摇匀 ,迅速加入浓硫酸 5.0 ml ,摇匀 ,静置
30 min ,以同样处理的 1.0 ml蒸馏水为对照 ,在488
nm 处测定吸光度。测得吸光度分别为 0.294 6 、
0.499 0 、0.707 1 、0.898 0 、1.120 2 ,以吸光度(A)对
葡萄糖检测浓度(C)进行线性回归 ,得回归方程为C
=10.251 24A +0.088 71(r =0.999 8)。结果表
明 ,葡萄糖检测浓度在 20.00 ～ 100.00 μg/ml范围
内与吸光度呈良好的线性关系 。
2.4 精密度试验 精密吸取 1.0 ml葡萄糖对照品
溶液 ,按照标准曲线绘制项下方法测定 ,重复测定 6
次 ,吸光度分别为1.052 4 、1.052 7 、1.052 5 、1.052 7 、
1.052 4 、1.052 4 ,结果 RSD=0.14%,说明本法精
密度良好。
2.5 重现性试验 精密吸取对照品溶液 0.6 m l 5
份置试管中 ,分别加水至 1.0 ml ,按 2.3 测定方法 ,
测定吸光度为 0.680 0 、0.654 7 、0.659 2 、0.665 5 、
0.615 5 ,结果 RSD为 3.67%。
2.6 稳定性试验 取供试品溶液 0.2 ml ,加水至
1.0 m l ,同 2.3测定方法在 60min内每隔 10 min测
定一次吸光度 ,测得吸光度分别是 0.453 4 、0.457 8 、
0.457 5 、0.457 2 、0.456 1 、0.454 5 、0.453 7 ,结果
RSD=0.41%(n =6)。
2.7 加样回收率测定 精密称取琐琐葡萄多糖颗
粒剂 3份 ,每份 2.5 g ,加入葡萄糖 50.00 mg ,按照
2.1.2供试品溶液制备方法加以处理 ,后按照标准
曲线下测定的方法操作测定 ,并按 2.7 中的公式进
行计算 ,考察其加样回收率 ,结果见表 1 。
表 1 加样回收率试验结果
取样量(g) 相当于葡萄糖的含糖量(mg) 加入对照品的量(mg) 测得葡萄糖量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
2.500 7 606.67 50.02 647.76 98.64
2.501 1 606.77 50.05 639.87 97.42 98.36 0.850
2.500 3 606.57 50.01 650.01 99.02
2.8 样品含量测定 取制备得到的供试品溶液0.2
ml 3份分别置于 25 ml的具塞试管中 ,加水至1.0
ml ,充分混匀 ,按 2.3测定方法 ,测定供试品溶液的
吸光度 ,由回归方程计算多糖的浓度(C ,以葡萄糖
计),并由下公式计算多糖颗粒剂中多糖的含量 ,结
果见表2。颗粒剂中多糖的含量(%)=C×D/(W×
103)×100 。上式中 C 为测得样品液中葡萄糖的浓
度(mg/ml);D 为多糖的稀释因素;W 为供试颗粒
剂的重量(g)。
表 2 琐琐葡萄多糖颗粒剂中总多糖含量测定
样品
号
吸光度
(A)
对应葡萄糖
浓度(mg/ml)
样品液多糖
含量(mg)
样品多糖
含量(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 0.456 7 0.035 9 628.25 25.13
2 0.424 9 0.032 8 574.00 22.96 24.26 4.72
3 0.450 8 0.035 3 617.00 24.68
3 结论
3.1 琐琐葡萄多糖颗粒剂是由琐琐葡萄粗多糖与
辅料均匀混合后制粒而成 ,所用辅料均为单糖 。在
反复醇沉的过程中 ,利用单糖与多糖在乙醇和水中
溶解度的差异可分离出颗粒剂中的全部辅料 ,从而
获得难溶于水的多糖沉淀物 。
3.2 在向混匀的供试液与苯酚液中加入硫酸时 ,应
沿管壁缓缓加入 ,避免水与硫酸剧烈反应产生爆沸 ,
之后振荡试管 ,使硫酸充分水解多糖 ,从而保证测定
的准确性。
3.3 本方法测定琐琐葡萄多糖颗粒剂中多糖的含
量 ,操作简单且显色稳定 , 重现性好 , 在 20.00 ～
100.00 μg/ml 范围内线性关系良好 , 加样回收率
高 ,是检测琐琐葡萄多糖颗粒中多糖含量的一种简
便可靠的方法 ,可用于琐琐葡萄多糖颗粒剂的质量
控制。
参考文献:
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中国药品标准 , 2002 , 4(3):21-22.
[ 收稿日期:2009-11-12]
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