全 文 ：山西农业科学 2011，39（7）：629- 632 Journal of Shanxi Agricultural Sciences
大花萱草“东方不败”的组织培养技术研究
杨丽莉，张 晓，张彦琴
（山西省农业科学院旱地农业研究中心，山西太原 030006）
摘 要：以大花萱草“东方不败”的子房为外植体进行了组织培养的研究，结果表明，“东方不败”子房愈伤组
织诱导分化的最佳培养基为MS + 4 mg/L 6- BA，不定芽分化率可达 38.2%；在 6- BA质量浓度为 3 mg/L，IBA
为 0.5 mg/L时，繁殖系数可达 6.4；适宜的生根培养基为 1/2 MS＋NAA 0.2 mg/L＋IBA 0.2 mg/L＋蔗糖（或白
糖）20 g/L +琼脂粉 6.5 g/L，每株试管苗生根数可达 4～5条。组培过渡苗栽培基质为粗河沙，条件控制温度
为 24～28℃，相对湿度为 85%～90%，并逐渐增加光照，移栽成活率可达 92%。
关键词：大花萱草；外植体；愈伤组织诱导分化；培养基；组织培养
中图分类号：S681.9 文献标识码：A 文章编号：1002- 2481（2011）07- 0629- 04
Study on Tissue Culture and Industrial Seedling Raising Technique
in Hemerocallis hybrida“Dongfangbubai”
YANGLi- li，ZHANGXiao，ZHANGYan- qin
（Research Centre of Arid Farming，Shanxi Academy of Agricultural Sciences，Taiyuan 030006，China）
Abstract：In the article tissue culture was studied using ovary as explant and industrial seedling raising technique of“Dong-
fangbubai”H. hybrida. The results showed that the best culture medium for“Dongfangbubai”callus differentiation was MS,
the concentration range of 6- BA 4 mg/L and adventitious bud differentiation rate reaches 38.2%. When 6- BA concentration
was 3 mg/L and IBA 0.5 mg/L, propagation coefficient would be possible to reach 6.4. The suitable rooting medium was 1/2 MS＋
NAA 0.2 mg/L＋IBA 0.2 mg/L＋sucrose（white sugar）20 g/L＋agar 6.5 g/L, and the rooting number of each tube seeding reached
4～5 roots. The substrate for transitional cultivation of tissue culture seedling was thick riversand, the survival rate reached 98%,
when the temperature was 24～28℃, the relative humidity was 85%～90% and the light intensity increased gradually, survival
rate of tube seeding reached 92%.
Key words：Hemerocallis hybrida; explant; callus differentiation; culture medium; tissue culture
收稿日期：2011- 03- 02
基金项目：山西省科技攻关项目（041012- 3）
作者简介：杨丽莉（1964-），女，河北唐山人，副研究员，主要从事农业生物技术研究工作。
doi:10.3969/j.issn.1002-2481.2011.07.01
萱草（Hemerocallis hybrida）是百合科（Lili－
aceae）萱草属（Hemerocallis）多年生宿根草本植
物，主产于我国南、北方大部分地区，欧洲南部也
有分布。该属植物适应性广，对土壤要求不严，花
多为黄色、并可食用，在我国广为人知。大花萱草
通常称为多倍体萱草，因其具有既观花又观叶的
双重价值而被广泛用于切花、盆栽及园林绿化
等，主要用途是观赏。“东方不败”是从欧美引进
的多倍体品种，叶型修长似兰草，丛生；株丛高
35～45 cm。花葶粗壮，高 50 cm，花朵硕大，直径
可达 10 cm。花瓣外卷呈粉红色，花心带有金黄
晕，色泽娇艳，每葶可着花 20余朵。花期 6月中
旬至 9月中旬。其特点是：抗倒伏，复色花艳丽，
花多且大，可反复开花，除了作绿化种植外，还可
作切花。“东方不败”萱草整株姿态优雅，妩媚动
人，甚是惹人喜爱，是大花萱草中重要的新品种。
自然界中，大花萱草一般以分蘖的方式进行
繁殖，每年分蘖 3～4株，繁殖速度慢，远不能满
足商品化生产的需要。植物组织培养技术是指对
引进和培育的新品种在短期内进行种苗的大量
繁殖、用于生产建设的重要技术方法。科技工作
者对大花萱草的组织培养研究已有部分报道[1- 6]，
但是不同大花萱草品种、不同外植体的培养方法
和培养基配方存在较大差异，对“东方不败”萱草
的研究尚未见报道。
本试验对大花萱草“东方不败”组织培养技
术中的关键技术参数进行了研究，旨在为实现组
织培养工厂化育苗提供配套的技术服务。
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山西农业科学 2011年第 39卷第 7期
1 材料和方法
1.1 材料
“东方不败”是由北京紫鹿.艾维生种植园首
次从国外引进的大花萱草品种，我们对其进行了
引种和驯化栽培。供试材料来源于山西省农科院
旱地农业研究中心大花萱草试验田种植 3 a的
种苗，盛花期取花蕾作材料，以子房为外植体。
1.2 方法
1.2.1 愈伤组织诱导分化培养 采摘苗圃健壮
母株上发育正常的花蕾，用洗涤剂清洗表面后，
用流水冲洗干净。75%酒精消毒 1 min，0.1%
HgCl2灭菌 15～20 min，无菌水冲洗 4次。在无菌
条件下剥离子房，横切成片状接种于愈伤组织诱
导培养基（表 1）中，暗培养 35 d，温度（25±
1）℃，后进行光照培养 26 d，光照强度 2 000～
3 000 lx。统计愈伤组织诱导分化率。
诱导分化率＝分化的外植体数 /接种外植
体数×100%。
表 1 愈伤组织诱导培养基设置 mg/L
培养基号
6- BA
2，4- D
F1
1
F2
1
1
F3
2
F4
2
1
F5
3
F6
3
1
F7
4
F8
4
1
F9
5
F10
6
注：基本培养基为MS 全量＋30 g/L蔗糖＋7 g/L琼脂粉，pH值为 5.8。表 2同。
1.2.2 不定芽的增殖培养 愈伤组织分化的不
定芽接种于不同增殖培养基（表 2）上，每瓶
7 芽，每种培养基 10瓶。光照培养 26 d后，统计
苗数，计算繁殖系数。光照强度为 2 000～3 000 lx，
温度为（25±1）℃。
繁殖系数＝增殖苗数 /接种苗数。
表 2 不定芽继代繁殖培养基设置 mg/L
培养基号
6- BA
NAA
IBA
Y1
3
0.5
Y2
3
0.3
Y3
3
0.5
Y4
3
0.3
Y5
2
0.5
Y6
2
0.3
1.2.3 生根培养 无根小苗接种在不同的生根
培养基（表 3）上进行光培养，每瓶接 7株，每种
培养基接种 10瓶。第 10天起开始观察、记录生
根情况。第 27天测量根长，统计生根数，计算生
根率。光照强度为 2 000～3 000 lx，温度为（25±
1）℃。生根率＝生根苗数 /接种小苗数×100%。
表 3 生根培养基设置 mg/L
培养基号
IBA
NAA
G1
0.2
G2
0.4
G3
0.6
G4
0.2
G6
0.2
0.2
G5
0.4
注：基本培养基为 1/2 MS＋20 g/L蔗糖（或白糖）＋6.5 g/L琼脂粉，pH值为 5.8。
1.2.4 驯化栽培 在温室内打开瓶盖炼苗 3 d
后，取出小苗洗净根部的培养基；再用 0.1%多菌
灵药水洗根，移植在拱棚内不同基质的苗床上。
移栽完毕后浇透水，并用 0.1%的百菌清或多菌
灵喷雾保苗。前 1周遮盖 60%的遮阳网，并保持
一定的温度、湿度和光照。
2 结果与分析
2.1 子房愈伤组织的诱导分化培养
子房切片接种于 10种不同激素配比和浓度
配比的诱导分化培养基上，7～10 d子房切片开
始膨大，15 d开始出现白色、松散状愈伤组织。
随着培养时间的延长，白色、松散状愈伤组织逐
渐形成圆球状、致密型、淡黄色胚性愈伤组织块
（图 1）。在只有 6- BA的培养基上（F1，F3，F5，F7，F9，
F10），随着 6- BA质量浓度的升高（1～6 mg/L），这
种胚性愈伤组织越致密。在 6- BA和 2，4- D同时
存在的 F2，F4，F6，F8号培养基上的胚性愈伤组织
比单纯 6- BA培养基上的量大，结构紧密，色泽
更鲜亮。
将这些愈伤组织转入原号培养基进行继代
光照培养，观察发现，愈伤组织的颜色由黄色变
成黄绿色，并出现绿色的突起，继而分化出不定
芽（图 2）。
从 10种培养基愈伤组织分化率的结果（表
4）看，F1～F4号培养基在 6- BA 1～2 mg/L的条件
下，诱导分化率较低。F5～F8培养基 6- BA为 3～
4 mg/L的范围内，分化率提高，可达 30.7%～
630· ·
2.3 再生植株的生根培养
将继代培养的小苗转接入生根培养基，观察
小苗的生根时间、根的多少和根系的发育状况，
第 27天测量根长，计算平均根长和平均生根数
（图 4）。从表 6和观察结果可以看出，第 9天时，
除 G1，G2培养基外，其他培养基上试管苗均开始
出现大量白色根状突起，其中，G4和 G6号培养基
的苗根状突起最多，生根较早。第 14天时，所有
培养基中的苗都已生根，且根系粗壮。第
16，18，21天时，添加 NAA的 G4，G5，G6号培养基
上试管苗的生根数明显多于添加 IBA的 G1，G2，
G3号培养基。第 27天时，测量根长发现，NAA和
IBA质量浓度分别在 0.2，0.4 mg/L（G4和 G5，G1
和 G2）时，平均根长无显著差异。NAA的生根率
显著高于 IBA的生根率。G3号培养基 IBA质量
浓度达到 0.6 mg/L时，根长显著增加。在 NAA和
杨丽莉等：大花萱草“东方不败”的组织培养技术研究
表 5 “东方不败”萱草在不同激素培养基上的繁殖系数
培养基
接种苗数 /株
繁殖苗数 /株
繁殖系数
Y1
70
385
5.5
Y2
70
371
5.3
Y3
70
448
6.4
Y4
70
406
5.8
Y5
70
308
4.4
Y6
70
238
3.4
38.2%。F9～F10号培养基上，随着 6- BA质量浓度
的继续升高（5～6 mg/L），分化率有所下降。在含
有 2，4- D的培养基上，F2，F4，F6，F8形成的愈伤组
织比单纯含 6- BA的培养基 F1，F3，F5，F7量大，而
不定芽的分化率普遍有所下降。因此，子房愈伤组
织诱导分化最适宜的培养基为MS＋6- BA4mg/L。
表 4 “东方不败”萱草子房愈伤组织的诱导分化率
培养基
接种数 /个
分化数 /个
分化率 /%
F1
45
7
15.6
F2
52
7
13.5
F3
83
18
21.7
F4
80
15
18.7
F5
88
33
37.5
F6
86
28
32.6
F7
89
34
38.2
F8
79
24
30.7
F9
83
22
26.5
F10
96
15
15.6
2.2 芽增殖培养
切下芽块接种在不同的继代繁殖培养基上
进行光照培养，7 d左右开始形成丛生芽，25 d长
满 1瓶（图 3）。
从表 5可以看出，不定芽在 Y1，Y2，Y3和 Y4
号培养基上的繁殖率高于 Y5，Y6 号培养基。
Y1，Y2，Y3 和 Y4 号培养基的 6- BA 质量浓度
为 3 mg/L，Y5，Y6号为 2 mg/L，所以，继代繁殖最
适宜的 6- BA质量浓度为 3 mg/L。在添加同等浓
度的 IBA和 NAA的培养基 Y 3 和 Y1，Y4 和 Y2
上，含 IBA的 Y 3和 Y4号培养基的繁殖系数高
于含 NAA的培养基 Y2和 Y1，并且 IBA较高质
量浓度（0.5 mg/L）的 Y 3培养基比 IBA较低浓度
（0.3 mg/L）的 Y4培养基繁殖系数略高。因此，继
代繁殖适宜的培养基为 MS＋6- BA 3 mg/L＋IBA
0.5 mg/L，繁殖系数可达 6.4。
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山西农业科学 2011年第 39卷第 7期
2.4 苗的驯化与移栽
组培苗的过渡栽培环节是实现快繁的最后
一个重要环节，其关键是保持介质的保水和透气
性、保持较低的温度和较高的湿度。本试验在移
栽管理过程中发现，首先要用 0.1%多菌灵药水
洗根，并在每周喷施 1次 0.1%的百菌清抑制杂
菌；在介质的选择上，选用廉价的粗河沙并且配
以每周 1次的MS营养液补充；温度控制为 24～
28℃，相对湿度 85%～90%，逐渐增加光照的条
件下，移栽成活率均可达 92%。
3 讨论
（1）本研究中，以子房作为外植体，取花蕾作
为消毒材料，可有效降低初代接种培养的污染率，
而且取材量大。这与王晓娟等[5]的研究结果相同。
（2）在 6- BA为 1～2 mg/L时，愈伤组织诱
导率很低；随 6- BA质量浓度升高到 3～4 mg/L
时，愈伤组织发生和生长较快，结构致密，色泽鲜
黄。在光照条件下，伴随着愈伤组织的发生和生
长，分化出大量不定芽。从不同品种大花萱草的
研究来看，对 6- BA质量浓度的要求存在很大差
异 [6- 10]，所以，在研究大花萱草的组织培养技术
时，应该有针对性地研究不同品种的激素水平和
激素配比。
（3）在大花萱草“东方不败”的研究中，我们
也发现，初代诱导愈伤组织时，愈伤组织的形成
过程是先出现白色松软的愈伤组织，随着诱导时
间的延长，愈伤组织变为浅黄色或黄色，致密颗
粒状。但是，愈伤组织在继代分化培养时，不定芽
的分化是伴随着愈伤组织的生长同时进行的，不
存在愈伤组织全部分化不定芽和全部生长为愈
伤组织的情况，这与王晓娟等[5]的研究结果相同。
不定芽的分化率和愈伤组织生长量大小之间的
调节主要靠细胞分裂素的浓度进行。
参考文献：
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1985（5）：39.
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培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯，2002，38（5）：458.
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研究[J].湖南林业科技，2001，28（4）：41- 43.
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浙江农业学报，1993（3）：137- 141.
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植物研究，2009，29（6）：757- 762.
［8］张伟丽，金欣庆.大花萱草新品种“奶油卷”的组织培养和生
产应用[J].植物生理学通讯，2007，43（1）：129- 130.
［9］赵玉芬，储博彦，尹新彦，等.大花萱草工厂化快繁技术研究
[J].北方园艺，2011（2）：152- 155.
［10］黄花花，曹冬梅，魏爱丽.大花萱草“黄绣客”愈伤组织玻璃
化的初步研究[J].山西农业科学，2011，39（3）：213- 216.
表 6 “东方不败”在不同培养基、不同时间内的生根数及根长统计（70株）
培养基
G1
G2
G3
G4
G5
G6
第 9天
6
0
10
12
11
13
第 14天
28
25
63
70
155
105
第 16天
90
78
110
132
256
168
第 18天
116
98
143
168
291
211
第 27天平均生
根数 /（条 /苗）
2.0
1.8
2.5
2.9
4.7
3.7
第 21天
142
123
172
201
332
256
生根数 /条 第 27天平均
根长 /cm
2.22
2.20
2.70
2.40
2.45
2.73
IBA同时存在的 G6号培养基上，根长且粗壮。从
平均生根数来看，NAA质量浓度为 0.4 mg/L时，
平均生根数最高可达 4.7条。由于后续过渡栽培
成活率依赖于根数的多少、根长、根系粗壮度等
综合指标，所以，“东方不败”的最佳生根培养基
为 1/2 MS + 0.2 mg/L NAA + 0.2 mg/L IBA + 20
g/L蔗糖（或白糖）+ 6.5 g/L琼脂粉。
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