全 文 ：第 27卷 第 1期
2 0 0 9年 1月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 27 No. 1
Jan. 2 0 0 9
中华中医药
学刊
毛茛总苷对离体蛙心和大鼠胸主动脉环张力的作用研究
王榕乐,江 欢,谭毓治
(广东药学院药理教研室, 广东 广州 510006)
摘 要:目的: 研究毛茛总苷对离体蛙心和大鼠胸主动脉环张力的影响。方法: 制备离体蛙心, 观察毛茛总苷
对蛙心基础张力和异丙肾上腺素诱导的心脏收缩力的影响; 制备大鼠离体胸主动脉环, 观察毛茛总苷对主动脉基
础张力、去甲肾上腺素诱导主动脉环收缩和对异丙肾上腺素诱导主动脉环舒张的影响。结果: 1Lg /m L和 10Lg /
mL毛茛总苷可以降低离体蛙心的基础张力,并具有抑制异丙肾上腺素诱导蛙心收缩作用, 但对心率没有影响;
1m g /mL和 2m g /mL的毛茛总苷对主动脉环的基础张力和对异丙肾上腺素诱导的主动脉环舒张均没有影响;
2m g /mL的毛茛总苷能够明显拮抗由去甲肾上腺素诱导的主动脉环收缩作用, 与生理盐水组相比有明显的差异
(P < 0. 01) ,与酚妥拉明组相比没有明显差异 (P > 0. 05); 1m g /mL的毛茛总苷也能拮抗去甲肾上腺素诱导的血
管环收缩作用, 但与生理盐水组相比无明显的差异 (P > 0. 05)。结论:毛茛总苷具有抑制异丙肾上腺素诱导的蛙
心收缩作用;毛茛总苷具有抑制去甲肾上腺素诱导的大鼠胸主动脉环收缩作用, 但对主动脉环的基础张力和异丙
肾上腺素诱导的动脉舒张均无影响。
关键词:毛茛总苷;离体蛙心; 主动脉环;去甲肾上腺素; 异丙肾上腺素
中图分类号: R285. 5; R - 33 文献标识码: A 文章编号: 1673 -7717( 2009) 01 - 0091 - 03
Effec t o f Tota lG lycos ides of Ranunculus Japonicus( TGOR) on
Tens ion of F rog Heart and RatChest Aort ic R ing in V itro
WANG Rong-le, JIANG H uan, TAN Yu-zhi
( Departm en t of Pharm acology, Gu angdong Pharm aceu ticalUn iversity, Gu angzhou 510006, Guangdong, Ch in a)
Abstrac t: Ob jective: To study e ffect o f to ta l g ly co sides of Ranuncu lus japonicus ( TGOR) on tension of frog hea rt and
ra t chest ao rtic ring in vitro. Methods: Iso lated frog hear tsw ere prepared to study effect of TGOR on e lem en ta ry con trac tion
fo rce and isoprena line - induced myoca rdia l contractility. Effe ct of TGOR on e lem entary tension, tension o f of iso lated rat
thoracic aor tic ring in response to artereno l o r isoprena line we re fur therly obse rved. R esults: Show tha t 1g /mL and 10g /m L
TGOR w as ab le to unde rlied e lem en tary contraction force o f iso la ted flog hearts and prevented m yocard ia l con trac tility
from rising in re sponse to isoprena line, bu t did no t affec t hear t ra te. 1mg /mL o r 2m g /mL TGOR had no effe ct on the ele-
m entary tension of a rte rial c ircle or isoprena line - induced va sore laxation. 2m g /mL TGOR obv iously inh ibited noradrena-
line - induced vasoconstriction, vs sa line (P < 0. 01), v s phen to lam ine (P > 0. 05); 1mg /mL TGOR w as a lso able to in-
habit norad rena line - induced vasoconstriction, P > 0. 05, vs sa line. Conclusion: TGOR inhibited effect o f isoprenaline -
induced frog heart con trac tion. TGOR unde rlied effec t of no radrena line - induced rat che st a rteria l circle and had not af-
fec ted e lem en ta ry tension and isoprena line - induced vaso re laxa tion.
Keyw ords: tota l g lyco sides o fRanunculus japon icus; iso la ted frog hea r;t a rte rial c irc le; no radrenaline; isoprenaline
收稿日期: 2008 - 08 - 15
基金项目:广东省科技厅资助项目 ( 2004B30101002 ) ;广东中医药
局资助项目 ( 1040083)
作者简介:王榕乐 ( 1982 - ) ,男, 硕士研究生,研究方向:药物筛选
与新药开发。
通讯作者:谭毓治 ( 1956 - ) ,男, 教授,硕士研究生导师,主要从事
药物筛选与新药研究。
毛茛 (Ranunculus japon icus Thum b )是多年生草本毛茛
科 ( Ranunculaceae)毛茛属 ( Ranuncu lus)植物, 分布广泛。
该植物具有消炎、镇痛、抗菌、抗肿瘤等多种活性。在民间
广泛用于治疗黄疸、结核、肝炎等病 [1 ]。迄今为止, 国内外
鲜见对其化学成分和药理作用的研究报道。本文采用化学
和柱分离方法得到毛茛总苷, 研究其对离体蛙心和大鼠胸
主动脉环张力的影响。
1 材 料
1. 1 试验药物
毛茛总苷由广东药学院药理教研室提供,用生理盐水
配制。
1. 2 动物
虎皮青蛙, 60~ 90g左右, a ` 兼用, 30只,由广州市穗
北动物中心提供; SD大鼠, SPF级, 200g左右, a ` 兼用, 30
只,由广东省医学实验动物中心提供许可证号: SCXK (粤 )
2003 - 0002粤监证字 2006A015。
1. 3 试剂与药材
盐酸普萘诺尔片,陕西永寿制药有限责任公司, 批号:
20051028;盐酸异丙肾上腺素注射液, 上海禾丰制药有限公
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DOI：10.13193/j.archtcm.2009.01.93.wangry.047
第 27卷 第 1期
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中华中医药
学刊
司,批号: 5E20004; 重酒石酸去甲肾上腺素注射液, 天津金耀
氨基酸有限公司,批号: 0503221;氯化乙酰胆碱,上海三爱思
试剂有限公司,批号: 20030620;甲磺酸酚妥拉明注射液, 旭
东海普, 批号: 060201。生物信号采集系统 ( M edlab - U /
4C501型 ),南京美易科技公司; 10g张力换能器, 北京新航兴
业科贸有限公司;超级恒温器 ( 501型 ),上海市实验仪器厂。
1. 4 统计分析
所有数值均表示为 €x ? s, 采用 t检验进行统计学处理,
P < 0. 05作为显著性差异的临界值。
2 方法与结果
2. 1 蛙心插管
参照文献 [ 2 ]制备斯氏离体心脏标本, 然后用蛙心夹
夹住心尖,经张力换能器连接生物信号采集系统,每个套管
加 1m L的任氏液, 描计一段正常心跳曲线, 并按下述分组
进行试验。
2. 2 毛茛总苷对离体蛙心基础张力的影响
分别往套管中加入 10Lg /mL普萘洛尔, 1Lg /m L和
10Lg /mL的毛茛总苷, 描计效应曲线, 计算加药前后收缩
幅度 ( g)比值 (加药后收缩幅度 /基础收缩幅度 ), 用 D /F表
示,见表 1。
2. 3 毛茛总苷对异丙肾上腺素诱导蛙心收缩的影响
任氏液中加入 10Lg /m L异丙肾上腺素 ( Iso )溶液, 待
作用明显后, 再分别加入 10Lg /mL普萘洛尔、1Lg /mL和
10Lg /mL的毛茛总苷, 描计效应曲线, 计算加药前后收缩
幅度 ( g)比值 (加药后收缩幅度 /加 Iso后收缩幅度 ), 用 D /
I表示。见表 1。
表 1 毛茛总苷对蛙心收缩力的影响 ( n= 8, €x ? s)
组别 剂量 (Lg /mL) D /F D /I
心得安 10 0. 506 ? 0. 071 0. 712 ? 0. 098
TGOR 0. 1 0. 898 ? 0. 058* * 0. 919 ? 0. 058* *
TGOR 10 0. 836 ? 0. 115* * 0. 885 ? 0. 056* *
注:与心得安组相比, * * P < 0. 01。
2. 4 大鼠离体胸主动脉环的制备 [3]
大鼠断头处死, 迅速分离胸主动脉, 置于通混合气体
( 95% O2 + 5% CO2 ) 的 K rebs液中去除血管周围结缔组
织,将血管剪成 4mm长的环, 悬挂于充有 10mL改良 Krebs
液 37e 恒温浴槽中, 一端固定于拉钩上, 另一端通过张力
换能器与计算机相连, 采用 m edlab生物信号采集处理系统
进行数据记录和分析。浴槽中持续通入含体积分数 95%
O2和 5% CO2的混合气体,每隔 15m in换液 1次,动脉环在
1. 5g负荷下平衡 1. 5h,先用 1 @ 10- 6mo l /L去甲肾上腺素
收缩血管然后再用 ACh检测内皮完整性。带内皮组, 在平
台相加入 ACh( 100Lm ol /L ), 随后血管舒张可达到 60%者
视为内皮完整,可进行实验,否则弃之。
2. 5 实验分组
2. 5. 1 毛茛总苷对血管环基础张力的影响 在给血管环
通氧气下,施加前负荷 1. 5g, 平衡 1. 5h,实验分为 3组: ( 1)
空白对照组, ( 2) 1mg /m L毛茛总苷组, ( 3) 2mg /mL毛茛总
苷组,分别往浴槽中加等体积的生理盐水, 1m g /mL和 2m g /
mL的毛茛总苷,连续观察 30m in。药物剂量均以浴槽中的
终浓度表示。结果见表 2, 表明 1mg /mL和 2m g /mL TGOR
对主动脉环的基础张力没有影响。
表 2 毛茛总苷对大鼠胸主动脉环基础
张力的影响 ( n= 8, €x? s)
组别 前负荷
( F1, g)
加药后的负荷
( F2, g)
F
2
/F
1
生理盐水 1. 318 ? 0. 072 1. 310 ? 0. 072 0. 994 ? 0. 010
心得安 1. 188 ? 0. 160 1. 188 ? 0. 169 1. 000 ? 0. 031
1m g /m L TGOR 1. 261 ? 0. 139 1. 258 ? 0. 131 1. 000 ? 0. 017
2m g /m L TGOR 1. 222 ? 0. 154 1. 237 ? 0. 158 1. 013 ? 0. 071
2. 5. 2 毛茛总苷对 NE引起血管环收缩的影响 在给血
管环通氧气下, 施加前负荷 1. 5g, 平衡 1. 5h后给予 10- 6
m o l /L去甲肾上腺素引起血管收缩到平台期, 实验分为 4
组: ( 1)空白对照组, ( 2) 1m g /m L毛茛总苷组, ( 3) 2mg /m L
毛茛总苷组, ( 4 )酚妥拉明组。分别往浴槽中加等体积的
生理盐水, 1m g /m L、2m g /mL的毛茛总苷和 5 @ 10- 6m o l /L
的酚妥拉明,连续观察至低谷平台期。药物剂量均以浴槽
中的终浓度表示。结果见图 1, 表明高剂量组毛茛总苷显
著抑制 NE诱导的动脉环收缩。
注:与生理盐水组相比, * * P < 0. 01。
图 1 毛茛总苷对去甲肾上腺素引起动脉环收缩的影响
( n= 8, €x ? s)
2. 5. 3 毛茛总苷对异丙肾上腺素引起大鼠主动脉环舒张
的影响 在给血管环通氧气下, 施加前负荷 1. 5g, 平衡 1. 5h
后, 分别往浴槽中加入生理盐水, 普萘洛尔, 1mg /m L和 2m g /
mL的毛茛总苷,再此基础上往各浴槽加入去甲肾上腺素,达
坪后再往各浴槽加入 0. 01%异丙肾上腺素,描记效应曲线。
药物剂量均以浴槽中的终浓度表示。见图 2。
注:与生理盐水组相比, * * P < 0. 01。
图 2 毛茛总苷对异丙肾上腺素诱导的血管舒张的影响
( n= 8, €x ? s)
3 讨 论
本文研究结果表明: 1Lg /mL和 10Lg /mL毛茛总苷可
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收稿日期: 2008 - 07 - 04
基金项目:江苏省中医药局重点科研项目 ( 01074)
作者简介:张文曦 ( 1971 - ),女,江苏苏州人,副主任中医师,博士,
主要从事中西医结合内科临床工作。
通讯作者:奚肇庆 ( 1949 - ) ,男,江苏无锡人,教授、主任医师。
以降低离体蛙心的基础张力, 并且抑制异丙肾上腺素增强
的蛙心收缩作用,对心率基本无影响;毛茛总苷对大鼠离体
胸主动脉环基础张力和异丙肾上腺素引起主动脉环的舒张
效应均无影响,但能降低由去甲肾上腺素诱导的主动脉环
张力升高作用。
异丙肾上腺素是 B受体的激动剂, 激动时能引起血管
舒张,这种舒张效应主要由 B
2
受体介导的。蔡飒等 [4 ]研究
发现毛茛醇提取液对正常子宫的自发收缩活动无影响,却
能显著抑制由缩宫素所致的子宫平滑肌兴奋作用, 表现为
收缩幅度的减小和频率的减慢, 同时, 在使用 B肾上腺素
受体阻断剂普萘洛尔后,该松弛作用未被完全阻断。对子
宫平滑肌而言,刺激肾上腺能 B受体可引起子宫平滑肌的
松弛,其中 B2受体主要介导产生松弛作用。说明毛茛醇提
取液引起子宫平滑肌的舒张作用与激动 B2受体无密切关
系。本文的研究结果表明毛茛总苷对异丙肾上腺素引起主
动脉环的舒张效应无影响, 这提示毛茛总苷对血管平滑肌
的舒张效应可能与 B2受体无关。
去甲肾上腺素是 A受体的激动剂, 激动血管的 A1受体
使血管平滑肌收缩。大鼠的主动脉上的 A
1
受体主要属于
A1D亚型, 血管 A1受体激动时通过 Gq /11 y PLC信号转导通
路从而影响血管的张力, 参与血压调节。血管的正常生理
功能的维持和异常病理学改变与血管上的离子通道的状态
密切相关,在调节血管张力和收缩力方面起着重要作用的
离子通道主要是 Ca2+通道和 K +通道。血管平滑肌细胞上
存在受体依赖性 ( ROCC ) Ca2+离子通道, 可被细胞外高浓
度的去甲肾上腺素激活, C a2+由 ROCC进入细胞,触发细胞
内钙库释放钙,使细胞内 Ca2+浓度增加, 血管平滑肌收缩。
毛茛总苷对大鼠离体胸主动脉环的基础张力无影响, 但能
降低去甲肾上腺素诱导的主动脉环张力升高作用,这提示
毛茛总苷可能通过阻断血管平滑肌 A
1
受体的作用, 从而抑
制细胞内钙库释放钙,达到使血管平滑肌舒张的作用。
本论文探讨了毛茛总苷对内皮完整的大鼠胸主动脉环
的影响,其对去内皮的胸主动脉环的作用是否跟内皮完整
的一致; 毛茛总苷减弱变温动物心肌收缩力, 对哺乳动物的
心脏 (例如大鼠离体心脏 )是否也是抑制作用, 这些还有待
验证。
参考文献
[ 1 ] 江苏新医学院.中药大词典 (上册 ) [M ].上海:上海科学技术
出版社, 1993: 437 - 438.
[ 2 ] 谭毓治.药理学实验指导 [M ]. 3版.广州:广东高等教育出版
社, 2003: 50.
[ 3 ] 徐叔云,卞如濂,陈修.药理学实验方法学 [M ]. 3版.北京:人
民卫生出版社, 2005: 1037.
[ 4 ] 蔡飒,谭毓治.毛茛提取液对离体子宫平滑肌作用及其机制
的研究 [ J].广东药学院学报, 2004, 20( 1 ) : 37 - 39.
第 27卷 第 1期
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中华中医药
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复方薤白胶囊对 H2 O2 诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的研究
张文曦 1,奚肇庆2
( 11南京中医药大学, 江苏 南京 210029; 21南京中医药大学附属医院,江苏 南京 210029)
摘 要:目的:研究复方薤白胶囊对过氧化氢 ( H2O2 )诱导的凋亡内皮细胞的保护作用,及相关凋亡基因表达
的影响,以明确其作用机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞 ( HUVEC ),以 H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加
入不同浓度的复方薤白胶囊提取液作用 24h。以 MTT法检测细胞增殖率, H oechst染色观察细胞凋亡, 流式细胞
仪检测凋亡率, W este rn B lot检测抗凋亡基因 Bc l - 2含量变化。结果: H2O2造模后, 细胞增殖明显受抑, H oechst
染色见大量凋亡细胞, 流式细胞检测出明显凋亡峰,抗凋亡基因 Bc l- 2含量降低,与正常组相比 P < 0101,具有明
显的统计学意义。而各中药组提高了造模后细胞增殖率, 降低了凋亡细胞及凋亡峰, 提高了 Bc l - 2含量表达, 且
与浓度呈正相关, 具有明显的统计学意义。结论: 复方薤白胶囊能上调抗凋亡基因 Bc l - 2的表达, 保护内皮细
胞,抗内皮细胞凋亡。
关键词:复方薤白胶囊;人脐静脉内皮细胞; 过氧化氢;凋亡; Bc l -2基因
中图分类号: R285. 6 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2009) 01 -0093 - 04
S tudy ofCompound Macrostem Onion Capsu le on Apoptos is Induced by H2O2 in HUVEC
ZHANG W en-x i1, X I Zhao-qing2
( 11N an jing Un iversity of Ch ineseM ed icin e, Nan jing 210029, J iangsu Ch ina;
21The A ffiliatedH osp ita l ofNan jing University ofC hineseM ed icihe, N an jing 210029, Jiangsu Ch ina)
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