全 文 ：中国药房 2005年第 16卷第 23期 China Pharm acy 2005 Vol.16 No.23 · 1817·
·药品检验·
云南榧子中多糖的含量测定及其高效毛细管电泳指纹图谱分析 *
陈振德 1# ,谢 立 2 ,何 英 3 ,梁 强 3(1.深圳市人民医院药学部 ,深圳市 518020;2.广州市胸科医院药剂
科 ,广州市 510095;3.深圳市第二人民医院药剂科 ,深圳市 518035)
中图分类号 R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2005)23-1817-02
摘 要 目的:建立以苯酚-硫酸比色法测定云南榧子中多糖含量的方法 。方法:检测波长为 490nm ,狭缝宽度为 2nm ,记录纸范
围为 20nm/cm ;采用高效毛细管电泳法分析不同产地的云南榧子。结果:无水葡萄糖检测量在 0.0 114mg ～ 0.1 482mg 范围内与吸
收度线性关系良好(r =0.9 994),平均加样回收率为 98.3%(RSD=2.31%, n=5);不同产地云南榧子高效毛细管电泳指纹图
谱基本一致 ,且主要含 2种多糖 。结论:不同产地云南榧子中多糖含量及组成无明显差异 。
关键词 云南榧子;多糖;比色法;含量;高效毛细管电泳法;指纹图谱
*国家自然科学基金资助项目(39970893);广东省自然科学基金
资助项目(030992);深圳市科技基金资助项目(200204077)
#主任药师,教授 ,博士研究生。研究方向:医院药学管理、临床药
学、天然药物及中草药。电话:0755-25533018-3889。E-mail:zd-
tan@etang.com
Assaying of Polysaccharides in Torreya Yunnanensis and Analysis of HPCE Fingerprints
CHEN Zhende(Dept.of Pharmacy ,Shenzhen People s Hospi tal , Shenzhen 518020 ,China)
XIE Li(Dept.of Pharmacy , The Chest Hospi tal of Guang zhou ,Guangzhou 510095 ,China)
HE Ying , LIANG Qiang(Dept.o f Pharmacy ,Shenzhen No.2 Hospital ,Shenzhen 518035 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish phenol-vit rio lic color ime try fo r the assay ing of po lysaccharides in Tor reya yunna-
nensis.METHODS:Detec tion w aveleng th w as 490nm ,slit-w idt h w as 2nm and record paper range w as 20nm/cm ;Tor reya yun_
nanensis from diffe ren t o rigins w ere analyzed by HPCE.RESU LTS:The linear range of anhydrous dex trose w as 0.0 114mg ～
0.1 482mg(r =0.9 994);The average recovery ra te w as 98.3%(RSD=2.31%,n=5).The HPCE fingerprints of T or reya yu_
nnanensis from dif ferent orig ins w ere basically the sam e ,and 2 kinds o f polysaccharides were contained in w hcih.CONCLUS I_
ON :T he contents and compositions of polysaccharides of Tor reya yunnanensis from diffe rent o rig ins w ere o f no significant diff_
erence.
KEY WORDS Tor reya yunnanensis;Polysaccharides;Color ime try ;Content;HPCE;Fingerprint
红豆杉科(Taxaceae)榧属(Torreya)植物经笔者研究认为
有 8种和 8个栽培品种 [1 ] 。其中 ,我国有 5种 、8个栽培品种及
1个引进栽培品种 ,即榧树(T.G randis)、九龙山榧(T.jiulong_
shanensis(新组合))、长叶榧(T.Jackii)、巴山榧(T.Fargesii)、
云南榧(T.Yunnanensis)和香榧(T.grandis cv.Merrillii)等 8
个栽培品种以及 1个引进栽培品种日本榧(T.Nucife ra)。笔者
在对榧属植物进行较系统研究的同时 [1 ～15 ] ,首次提取了云南榧
子中的多糖并测定其含量 , 同时应用高效毛细管电泳法构建其
多糖的指纹图谱 , 为进一步综合开发利用榧属植物资源提供科
学依据 。
1 仪器与试药
1.1 仪器
UV -3000型紫外分光光度计(日本岛津公司);2F -1型
三用紫外分析仪 (上海顾村电光仪器厂);R200D 型电子天平
(德国 Sarto rius公司);BioFocus3000型毛细管电泳分析仪 ,包
括紫外扫描检测器(美国 Bio-Rad公司)。
1.2 试药
云南榧子分别采自云南省洱源县西山乡三旺彝族村 (编
号:A)、云南省丽江(编号:B)和云南省维西(编号:C),经第二
军医大学药学院郑汉臣教授鉴定为红豆杉科植物云南榧
(T or reya yunnanensis C heng et L.K.Fu)的成熟种子 ,凭证标
本存放于第二军医大学药学院生药教研室;无水葡萄糖对照
品 、苯酚 、浓硫酸为分析纯 。
2 方法与结果[ 16]
2.1 试验条件
2.1.1 多糖含量测定条件:狭缝宽度为 2nm , 记录纸范围为
20nm/cm ,检测波长为 490nm 。
2.1.2 电泳条件:熔融石英毛细管(75μm×60cm),电解缓冲
液为 300mmol/L 硼酸盐溶液(pH=8.5), 电压为 20kV ,温度
为 20℃,检测波长为 260nm ,重力进样时间为 5s。开机后先用
0.1mol/L 氢氧化钠冲洗毛细管 2min , 再用去离子水冲洗
5min ,然后用电解缓冲液冲洗至基线平稳后开始进样 。每 2次
进样间设定以电解缓冲液冲洗 2min 。
2.2 5%苯酚溶液的配制
称取苯酚 50g , 加铝片 0.05g 、碳酸氢钠 0.025g , 蒸馏 , 收
集馏分 。称取馏分 15g ,加水溶解并稀释至 300m l ,摇匀 ,置棕色
瓶中 ,备用 。
2.3 云南榧子中多糖的提取与精制
取云南榧子种仁适量 ,于 60℃下烘干 ,粉碎 ,过 20目筛 。称
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取 100g ,置于 1 000ml圆底烧瓶中 ,加 80%乙醇 900ml ,浸泡过
夜 ,于 90℃下回流 1h ,趁热过滤 。滤渣加水 800m l ,浸泡 1h ,于
90℃下温浸 1h , 过滤 。滤渣再加水 400ml , 于 90℃下温浸
30min ,过滤 。合并滤液 ,减压浓缩至 100ml ,用氯仿萃取 3次 ,
水液加 1%活性炭脱色 2次 , 抽滤 , 滤液加 85%乙醇使醇含量
达 80%,冰箱放置过夜 。过滤 ,滤渣先后用 85%乙醇 、无水乙醇
和丙酮洗涤 3次 。最后将所得样品置于真空干燥器中干燥 , 得
精制云南榧子多糖 。
2.4 对照品溶液的制备
准确称取于 105℃下干燥至恒重的无水葡萄糖对照品
28.5mg ,加水溶解并定容至 100ml ,即得 。
2.5 标准曲线的绘制
分别吸取“2.4”项下对照品溶液 1.0 、3.0 、5.0 、7.0 、9.0 、
11.0 、13.0m l , 各置于 50ml容量瓶中 ,加水稀释至刻度 。各准
确吸取 2.0ml , 置于具塞试管中 , 加入“2.2”项下 5%苯酚溶液
1.0ml ,再垂直加入浓硫酸 5.0ml ,静置 5min ,振摇 ,置于沸水中
保温 15min ,冷却 ,于 490nm波长处测定吸收度 。以葡萄糖检测
量(X)为横坐标 ,吸收度(Y)为纵坐标绘制标准曲线 ,得回归方
程 Y=36.3 388×10 -3X +1.1 645×10 -3(r =0.9 944)。结果
表明 , 无水葡萄糖检测量在 0.0 114mg ～ 0.1 482mg 范围内与
吸收度线性关系良好 。
2.6 换算因子的测定
准确称取多糖 23.0mg , 溶解并稀释至 100ml ,摇匀 。准确
吸取 2.0m l , 加入 0.5%苯酚溶液 1.0ml , 再垂直加入浓硫酸
5.0ml , 静置 5min , 振摇 , 置于沸水中保温 15min , 冷却 , 于
490nm 波长处测定吸收度 ,重复 4次 。根据回归方程求出供试
液中葡萄糖含量 ,按公式 J=W/C×D 计算换算因子 。其中 ,W
为实际多糖量 , C为供试液中葡萄糖量 ,D 为稀释因素(400)。
结果求得 J为 4.306g(RSD=0.011%, n=10)
2.7 样品溶液的制备与测定
准确称取不同产地云南榧子粉末 100mg ,各置于 100ml平
底烧瓶中 ,加入 80%乙醇 50ml ,回流 1h ,过滤 ,用蒸馏水洗涤 4
次 ,每次 5m l ,转移滤液于 100ml容量瓶中 ,冷却后定容 。准确
吸取 2.0m l , 置于具塞试管中 , 按“2.5”项下方法操作 , 测定吸
收度 , 按公式含量(%)=(C×D×J)/W ×100%计算多糖含
量 。其中 , C为样品溶液中葡萄糖含量(mg),D 为样品的稀释
因子(400), J为换算因子(4.306),W 为供试品量(mg)。含量
测定结果详见表 1。
表 1 不同产地云南榧子中多糖含量测定结果(n=5)
Tab 1 Assaying result s of polysaccharides in Torreya yu_
nnanensis from dif ferent origins(n=5)
编号 来源 多糖含量(%) (%) RSD(%)
A 云南省洱源 16.21
B 云南省丽江 16.04 16.34 1.88
C 云南省维西 16.76
x
2.8 加样回收率试验
准确量取 3份样品溶液各 1.0ml , 置于具塞试管中 , 分别
加入 5.0μg/ml葡萄糖对照品溶液 1m l ,其余操作同“ 2.7”项下
方法 。结果 , 多糖平均加样回收率为 98.3%, RSD=2.31%
(n=5)。
2.9 样品溶液高效毛细管电泳指纹图谱
按“2.1.2”所述电泳条件进行测定 。结果 ,不同产地云南榧
子所含多糖的高效毛细管电泳图谱基本一致 ,详见图 1。
由图 1可知 , 云南榧子主要含 2种多糖 , 其迁移时间分别
约为 3.25 、3.50min 。
3 讨论
有文献提及榧子含多糖 , 但未见有关榧属植物种子多糖含
量测定的报道 。笔者首次对不同产地云南榧子多糖进行了含量
测定 ,并对所提取的多糖进行高效毛细管电泳指纹图谱分析 。
云南榧子多糖含量较高及多糖组成较简单的结果 , 为进一
步提取分离云南榧子多糖并进行相关药理活性研究提供了科
学依据 。
参考文献
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(收稿日期:2005-02-20 修回日期:2005-05-12)