全 文 ：书天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2016，28: 1343-1350
文章编号: 1001-6880( 2016) 9-1343-08
收稿日期: 2016-02-17 接受日期: 2016-06-08
基金项目:中国科学院“百人计划”
* 通讯作者 Tel: 86-871-65223265; E-mail: chenjj@ mail． kib． ac． cn
LC-MS导向分离灯心草中激动 5-HT1A
和 MT2 受体的活性成分
杨通华1，2，耿长安1，黄晓燕1，马云保1，颜得秀1，2，陈纪军1*
1中国科学院昆明植物研究所 植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，昆明 650201;
2中国科学院大学，北京 100049
摘 要:本文对灯心草 Juncus effusus的活性部位进行研究，在 LC-MS导向下，利用多种色谱技术( 硅胶、氧化铝、
Sephadex LH-20 和 HPLC) 从中分离得到 9 个化合物，根据波谱学数据鉴定其化学结构为厄弗酚( 1) 、去氢厄弗
酚( 2) 、灯心草酚( 3) 、juncuenin G( 4) 、dehydrojuncuenin D( 5 ) 、5-( hydroxymethyl) -1-methylphenanthrene-2，7-diol
( 6) 、齐墩果酸( 7) 、5-羟甲基-2-呋喃糠醛( 8) 、麦芽酚-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷( 9) 。化合物 8、9 为首次从灯心草
属植物中分离得到并且化合物 9 为首次从天然来源获到。在 1． 0 mM浓度下，化合物 1、3、4 对 5-HT1A受体的激
动率分别为 65． 35 ± 6． 70%、71． 33 ± 7． 39%和 64． 11 ± 5． 33% ; 对 MT2 受体的激动率分别为 62． 77 ± 12. 06%、
67． 28 ± 9． 26%和 56． 21 ± 11． 43%。该研究首次利用 LC-MS与活性追踪相结合的方法，快速分离灯心草中激动
5-HT1A和 MT2 受体的活性成分，为其进一步开发与利用奠定了基础。
关键词:灯心草;化学成分; 5-HT1A受体; MT2 受体; LC-MS
中图分类号: Ｒ284． 1; Ｒ284． 2 文献标识码: A DOI: 10． 16333 / j． 1001-6880． 2016． 9． 001
LC-MS-Guided Isolation of Chemical Constituents from Juncus effusus
with 5-HT1A and MT2Ｒeceptors-Agitating Activity
YANG Tong-hua1，2，GENG Chang-an1，HUANG Xiao-yan1，MA Yun-bao1，Yan De-xiu1，2，CHEN Ji-jun1*
1State Key Laboratoryof Phytochemistry and Plant Ｒesources in West China，Kunming Institute of Botany，Chinese Academy
of Sciences，Kunming 650201，China; 2University of Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China
Abstract: Phytochemical studies on the active part of Juncus effusus resulted in the isolation of nine compounds using
LC-MS and chromatographic techniques ( Silica gel，Al2O3，Sephadex LH-20 and HPLC) ． Their structures were identi-
fied as effusol ( 1) ，dehydroeffusol ( 2) ，juncusol ( 3) ，juncuenin G ( 4) ，dehydrojuncuenin D ( 5) ，5-( hydroxymethyl) -
1-methylphenanthrene-2，7-diol ( 6) ，oleanic acid ( 7 ) ，2-formyl-5-hydroxymethylfuran ( 8 ) and maltol-3-O-β-D-gluco-
pyranoside ( 9) by HＲ-ESI-MS and NMＲ methods． Compounds 8 and 9 were obtained from the genus Juncus for the first
time，and compound 9 was firstly isolated from natural resource． Compounds 1，3 and 4 showed significantly activity on 5-
HT1A receptor with agitating rates of 65． 35 ± 6． 70%，71． 33 ± 7． 39% and 64． 11 ± 5． 33%，and on MT2 receptor with
agitating rates of 62． 77 ± 12． 06%，67． 28 ± 9． 26% and 56． 21 ± 11． 43% at the concentration of 1． 0 mM． Compounds
2，5 and 6 possessed moderate activities agitating 5-HT1A and MT2 receptors． These results provided valuable information
for the further study and utilization of J． effusus．
Key words: Juncus effusus; chemical constituents; 5-HT1Areceptor; MT2 receptor; LC-MS
5-HT1A受体是 5-羟色胺受体中的重要亚型之
一，与其相关的生理学和行为学功能包括认知、精神
状态、抑郁、疼痛、焦虑等，其激动剂主要用于治疗抑
郁症和焦虑症，同时还具有神经保护和治疗认知障
碍等潜在作用［1-3］。褪黑素是由松果体分泌的一种
具有昼夜调节作用的神经递质［4］。除此之外，褪黑
素还具有调节免疫系统，控制血压以及骨骼生成等
作用［5］。临床上用褪黑素受体激动剂治疗节律性
失眠，抑郁症和调节时差［6］。MT2 受体是褪黑素受
体中的三个亚型之一，其激动剂具有诱导褪黑素分
泌，脾细胞增殖，控制血管舒张以及调节催产素受体
基因表达［7］。本文利用 LC-MS 分析和 HEK293 细
胞模型跟踪分离灯心草中激动 5-HT1A和 MT2 受体
的活性成分。
中药灯心草为灯心草科植物灯心草( Juncus ef-
fusus L． ) 的干燥茎髓，性甘、淡，微寒，具有清心火，
利小便，治疗心烦失眠，尿少涩痛，口舌生疮之功
效［8］。化学成分研究表明灯心草中主要成分为菲
类与 9，10-二氢菲类等［9-11］。现代药理研究表明灯
心草具有抗菌、抗肿瘤、抗焦虑、镇静等多种生物活
性［12-14］。前期研究表明厄弗酚、去氢厄弗酚和灯心
草酚为灯心草的主要成分，主要研究了去氢厄弗酚
的促进小鼠小肠平滑肌收缩和镇静作用以及灯心草
酚和厄弗酚的镇静作用［14-16］。而目前厄弗酚、灯心
草酚和去氢厄弗酚以及灯心草中其它化合物对 5-
HT1A和 MT2 受体的激动活性未见报道。本文利用
活性指导并结合 LC-MS分析的方法，从灯心草的活
性部位中分离鉴定 9 个化合物，其中 6 个菲类化合
物，3 个其他类化合物。化合物 8、9 为首次从灯心
草属植物中分离得到并且化合物 9 为首次从天然产
物中分离得到;化合物 1、3 和 4 对 5-HT1A和 MT2 受
体具有较好的激动活性，化合物 2、5 和 6 显示一定
的 5-HT1A和 MT2 激动作用。
1 仪器与材料
高分辨质谱用 LCMS-IT-TOF ( Shimadzu，Kyoto，
Japan) 质谱仪测定。核磁共振谱用 Bruker AM-400、
DＲX-500 或 BrukerAvance III-600 型超导核磁共振
仪( Bruker，Bremerhaven，Germany) 测定;高效液相为
Waters Aillance 2695 ( Waters，USA) ，半制备色谱柱
为 Agilent Zorbax-ODS( 5 μm，9． 4 × 250 mm) 。薄层
层析硅胶板 Si60 F254 购于默克化工技术( 上海) 有
限公司;柱色谱硅胶( 200 ～ 300 目) 购自青岛青岛美
高集团有限公司;柱色谱氧化铝( 100 ～ 200 目) 购于
上海五四化学试剂厂; Sephadex LH-20 购自 Pharma-
cia公司。分析纯甲醇购自江苏汉邦科技有限公司;
显色剂为 H2SO4 ( 10% ) 的乙醇溶液; 所用其他试剂
均为化学纯或分析纯。
FlexStation 3 台式多功能酶标仪( Bio-ＲAD 680，
美国) ;倒置生物显微镜( XD-101 型，南京江南光电
集团股份有限公司 ) ; CO2 培养箱 ( Thermo Forma
3310，美国) ;全自动立式压力蒸汽灭菌器 YXQ-LS-
30SⅡ( 上海博讯实业有限公司医疗设备厂) ; 钙流
检测试剂盒 Wash Free Fluo-8 ( HD Biosciences Co．
Ltd，上海，中国) ; SW-CJ 系列医用型超净工作台
( 苏州安泰空气技术有限公司) ;阳性药物 5-羟色胺
和褪黑素分别购自 Affa Aesar和 Damas-beta公司。
灯心草于 2014 年 10 月购自云南省昆明市菊花
村药材市场，经中国科学院昆明植物研究所雷立公
副研究员鉴定为灯心草( Juncus effusus L． ) ，标本存
放于中国科学院昆明植物研究所抗病毒与天然药物
化学研究组( No． 2014102101) 。
2 实验方法
2． 1 提取与分离
灯心草干燥茎髓( 1 kg) 粉碎，加 90%乙醇浸泡
24 h后，采用渗漉法提取 3 次，合并提取液，减压浓
缩至小体积，得到浸膏 35 g。浸膏用水溶解后，加入
150 mL乙酸乙酯萃取，萃取 3 次后分别合并乙酸乙
酯层和水层，减压浓缩后得到乙酸乙酯部分 12． 5 g，
水部分 22． 5 g。乙酸乙酯部分经硅胶柱色谱 ( 240
g，5． 0 × 45 cm) ，用乙酸乙酯-石油醚( 10: 90 ～ 100:
0) 梯度洗脱，经 TLC 检查并合并相同流分后得到 7
个组分( Frs． 1 ～ 7) 。
Fr． 4( 660 mg ) 经硅胶柱层析 ( 35 g，2． 5 × 30
cm) ，氯仿-石油醚 ( 20 ∶ 80 ) 洗脱，得到四个组分
( Frs． 4-1 ～ 4-4) 。Fr． 4-2 ( 35 mg) 经硅胶柱层析( 10
g，1． 5 × 30 cm) ，用乙酸乙酯-石油醚( 5 ∶ 95 ) 洗脱，
得到化合物 3 ( 23 mg) 。Fr． 4-3 ( 262 mg) 经硅胶柱
层析( 15 g，2． 0 × 30 cm) ，用乙酸乙酯-石油醚( 10
∶ 90) 洗脱，得到化合物 1 ( 105 mg) 和 2 ( 114 mg) 。
Fr． 4-4( 215 mg) 经硅胶柱层析( 20 g，2． 0 × 30 cm) ，
经丙酮-石油醚( 10∶ 90) 洗脱，得到五个组分( Frs． 4-
4-1 ～ 4-4-5 ) 。Fr． 4-4-3 ( 35 mg ) 经硅胶柱层析
( 10g，1． 5 × 30 cm) ，用丙酮-石油醚( 5 ∶ 95 ) 洗脱，
得到化合物 7 ( 8 mg) 。Fr． 4-4-5 ( 112 mg) 经硅胶柱
层析 ( 15 g，2． 0 × 30 cm)，乙酸乙酯-石油醚( 15∶ 85)洗
脱，得到四个组分( Frs． 4-4-5-1 ～ 4-4-5-4) 。Fr． 4-4-
5-3( 61 mg) 经氧化铝柱层析( 10g，2． 0 × 20 cm) ，用
乙酸乙酯-石油醚( 15∶ 85) 洗脱，得到两个组分( Frs．
4-4-5-3-1 ～ 4-4-5-3-2 ) 。Fr． 4-4-5-3-2 ( 16 mg ) 经
Sephadex LH-20( 30 g，1． 4 × 120 cm) ，用甲醇-氯仿
( 50∶ 50) 洗脱，得到化合物 5 ( 8 mg) 。Fr． 4-4-5-3-1
( 30 mg ) 经 HPLC ( Agilent Zorbax-ODS，9． 4 × 250
mm，5 μm) 纯化，乙腈-水( 72∶ 28) 洗脱，得到化合物
4( 8 mg) 和化合物 6( 10 mg) 。Fr． 4-4-5-4( 37 mg) 经
硅胶柱层析( 10 g，2． 0 × 20cm) ，用甲醇-氯仿( 1∶ 100
～ 15∶ 85) 梯度洗脱后，再经硅胶柱层析 ( 10 g，2． 5
4431 天然产物研究与开发 Vol. 28
× 30 cm) ，氯仿-甲醇 ( 10 ∶ 90 ) 洗脱，得到化合物 8
( 12 mg) 和 9( 8 mg) 。
2． 2 活性测试方法
活性测试在 HEK293 细胞模型上完成，具体实
验方法参照文献［17］。采用 Dulbecco’s 改良的 eagle
培养基，G418( 400 μg /mL) 和 10%胎牛血清的培养
基并放置于 5% CO2、37 ℃的培养箱中培养。细胞
在 Matrigel包被的 96 孔黑壁透底板中并在 CO2 中
培养 24 h。化合物对 5-HT1A和 MT2 受体的实验在
钙流检测试剂盒 Wash Free Fluo-8 ( 激发波长: 485
nm;发射波长: 525 nm;发射截止: 515 nm) 完成。实
验数据由 Flex Station 3 台式多功能酶标仪读取。
EC50值通过 GraphPad Prism 5 软件计算得到;激动率
= Δδa /Δδc × 100% ( a: 测试样品; c: 阳性对照) ，阳
性对照分别为 5 羟色胺和褪黑素。
2． 3 LC-MS测试条件
Agilent Eclipse Plus C18 ( 100 × 2． 1 mm i． d，1． 8
um) 色谱柱，流动相为乙腈( 0． 05%甲酸) ( A) 和水
( 0． 05%甲酸) ( B) ，梯度洗脱程序如下: 0 ～ 15 min，
5% ～100%A。柱温: 30 °C，流速: 0． 2 mL /min; Fr．
4-3 的液相色谱条件为: 0 ～ 15 min，5% ～ 90% A，流
速: 0． 2 mL /min; Fr． 4-4 的液相色谱条件为: 0 ～ 3
min，5% ～ 10% A; 3 ～ 10 min，10% ～ 80% ; 10 ～ 15
min，80% ～100%，流速: 0． 2 mL /min。
质谱分析在正离子模式和负离子模式下测定。
ESI作为离子源，喷雾电压为 + 4． 5 /-3． 5 kV;检测电
压: 1． 65 kV; 飞行时间区域 ( TOF) 压力: 1． 6 × 10-4
Pa;离子阱区域( IT) 压力: 1． 5 × 10-2 Pa; 干燥气压
力: 100． 0 kPa;雾化气流速: 1． 5 L /min; 曲线脱溶剂
系统 ( CDL ) 温度: 200 ° C; 扫描范围: m/z 100 ～
2000。岛津 Composition Formula Predictor 用来预测
分子式。
3 结果与讨论
3． 1 活性部位筛选
在 HEK293 细胞模型上，测定灯心草总提物、乙
酸乙酯部位和水部位对 5-HT1A、5-HT2C、MT1 和 MT2
受体的激动作用;选择活性较好的乙酸乙酯部位做
进一步分离并得到七个子流分，再测定这七个流分
对 5-HT1A、5-HT2C、MT1 和 MT2 受体的激动作用，结
果见表 1。
表 1 灯心草不同部位对 5-HT1A、5-HT2C、MT1 和 MT2 受体的激动率( n = 3，x ± SDs)
Table 1 Agonistic rates of different parts from J． effusus on 5-HT1A，5-HT2C，MT1 and MT2 receptors ( n = 3，x ± SDs)
样品a
Sample
5-HT1A
受体激动率b
5-HT1A receptor
agonistic rates ( % )
5-HT2c
受体激动率b
5-HT2C receptor
agonistic rates ( % )
MT1 受体
激动率c
MT1 receptor
agonistic rates ( % )
MT2 受体激动率c
MT2 receptor
agonistic rates ( % )
总提物 Total extract 23． 21 ± 5． 75 11． 21 ± 2． 39 -3． 70 ± 1． 55 10． 25 ± 4． 28
水部分 Aqueous part 22． 82 ± 8． 59 8． 12 ± 4． 17 -1． 22 ± 0． 94 8． 57 ± 2． 38
乙酸乙酯部分 Ethyl acetate part 43． 90 ± 6． 71 10． 63 ± 1． 73 -2． 03 ± 2． 13 35． 78 ± 10． 31
Fr． 1 -0． 63 ± 1． 39 4． 62 ± 1． 20 -4． 43 ± 1． 97 -8． 22 ± 5． 67
Fr． 2 -1． 64 ± 3． 20 5． 39 ± 0． 85 -5． 70 ± 3． 30 -8． 86 ± 2． 94
Fr． 3 0． 23 ± 0． 28 7． 87 ± 3． 32 -2． 90 ± 0． 61 -14． 90 ± 7． 58
Fr． 4 59． 14 ± 4． 77 2． 64 ± 0． 25 -7． 95 ± 2． 49 67． 74 ± 10． 79
Fr． 5 29． 73 ± 3． 25 2． 00 ± 1． 91 -7． 99 ± 1． 38 -7． 60 ± 1． 37
Fr． 6 32． 76 ± 6． 82 7． 43 ± 2． 40 -8． 66 ± 5． 02 33． 62 ± 9． 23
Fr． 7 -1． 09 ± 2． 13 3． 59 ± 1． 94 -7． 04 ± 2． 81 -13． 05 ± 3． 59
注: a 样品测试浓度为 350． 00 μg /mL; b 5-羟色胺的最大激动率作为 100% ; c 褪黑素的最大激动率作为 100%。
Note: a The concentrations of samples were 350． 00 μg /mL; b The highest agonistic rate of 5-HT was 100% ; c The highest agonistic rate of melatonin was
100% ．
活性筛选结果表明:乙酸乙酯部位对 5-HT1A和
MT2 受体的激动率均明显大于水部位。因此，将乙
酸乙酯部位分成七个流分，发现 Fr． 4 对两个受体的
激动率都有一定增加，而其它流分的激动率均明显
降低，这说明激动 5-HT1A和 MT2 受体的活性成分主
要位于 Fr． 4 中。另外，所有流分对 5-HT2C和MT1 受
体的激动率均较低。因此，本研究对活性部位 Fr． 4
进一步分离，并测定从中分离得到的化合物对 5-
5431Vol. 28 杨通华等: LC-MS导向分离灯心草中激动 5-HT1A和 MT2 受体的活性成分
HT1A和 MT2 受体的激动作用。
3． 2 活性部位的 LC-MS分析
为了确定活性部位 Fr． 4 中的化学成分，对其进
行 UFLC /MS-IT-TOF分析，结果如图 1。
图 1 活性部位的 LC-MS 的 BPC 谱图( 1 BPC 表示正离
子模式，3 BPC表示负离子模式)
Fig. 1 LC-MS base peak chromatogram ( BPC) of the active
fraction ( 1 BPC indicated positive mode，3 BPC indi-
cated negative mode)
通过分析图 1，活性部位主要含有 12 个基峰离
子流色谱峰，再通过分析每个峰的一级与二级质谱，
利用岛津 Composition Formula Predictor 预测其分子
式与前期文献报道比对，推断该流分主要含有 6 个
菲类化合物，2 个黄酮类，1 个含葡萄糖的化合物，1
个三萜类以及 2 个其他类化合物。接着对 Fr． 4 进
一步分离，得到 Fr． 4-1 ～ 4 四个流分，以上四个流分
的 LC-MS分析见附图 2。以分析 Fr． 4 中峰 1 为例
介绍 LC-MS的导向与分离过程。在 Fr． 4 中，根据
正离子模式中的碎片离子 311． 0725( ［M + Na］+，-
1． 2) 和 289． 0870( ［M + H］+，-4． 8 ) 以及负离子模
式中的碎片离子 333． 0820( ［M + HCOO］－，-0． 7) 和
287． 0761( ［M-H］－，-1． 1) ，预测得到分子式 C12H16
O8，不饱和度为 5( 表 2) 。在其 MS
2 中，正离子模式
中有 127． 0389( C6H6O3 ) 的碎片离子，负离子模式中
有 161． 0447 ( C6H10 O5 ) 的碎片离子 ( 附图 1 ) 。因
此，推测该化合物中有一个葡萄糖及一个 C6H6O3
的片段。进一步分析各亚流分的 LC-MS，发现该化
合物主要位于 Fr． 4-4 流分，因此对该流分进一步分
离。经硅胶柱层析色谱等方法，分离得到化合物 9，
再根据核磁数据最终确定为麦芽酚-3-O-β-D-葡萄吡
喃糖。化合物 9 可能的裂解方式为失去一分子葡萄
糖( C6H10O5 ) 得到 C6H6O3 的离子碎片或失去中性
碎片 C6H6O3 得到 C6H10 O5 的离子碎片，具体见附
图 2。其余化合物的分析过程与化合物 9 的相同，
在 LC-MS分析引导下分离得到其它 8 个化合物，其
LC-MS分析数据和 BPC图谱见表 2 和图 2。将分离
得到的 9 个化合物经高分辨质谱仪测定其分子量预
测得到分子式，分别与前面分析的分子式进行对比，
确认为追踪的目标化合物。
表 2 活性部位中化学成分的确定
Table 2 The identification of chemical constituents in the active fraction
编号
No．
分子量
MW
正离子模式( m / z)
Ion in positive mode
MS /MS2 ( error in mDa and
relative abundance)
负离子模式( m / z)
Ion in negative mode
MS /MS2 ( error in
mDa and relative abundance)
不饱和度
DBE
分子式
Formula
化合物
Compounds
1 288
311． 0725( ［M + Na］+，-1． 2)
289． 0870( ［M + H］+，-4． 8)
→127． 0389( C6H6O3，100% )
333． 0820( ［M + HCOO］－，-0． 7)
287． 0761( ［M-H］－，-1． 1)
→161． 0447 ( C6H10O5，100% )
5 C12H16O8
麦芽酚-3-O-β-D-
葡萄吡喃糖( 9)
2 126 127． 0365 ( ［M + H］+，-2． 5) 125． 0211 ( ［M-H］－，-3． 3) 4 C6H6O3 5-羟甲基-2-呋喃糠醛( 8)
3 286 287． 0510 ( ［M + H］+，-4． 0) 285． 0371 ( ［M-H］－，-3． 4) 11 C15H10O6 _
4 414 437． 1159 ( ［M + Na］
+，-4． 8)
415． 1439( ［M + H］+，5． 2)
413． 1231 ( ［M-H］－，-1． 1) 12 C22H22O8 －
5 250 251． 1088 ( ［M + H］+，2． 1)
295． 0958( ［M + HCOO］－，-1． 8)
249． 0921 ( ［M-H］－，0． 0)
11 C17H14O2 去氢厄弗酚( 2)
6 252 505． 2333 ( ［2M + H］
+，-4． 0)
253． 1221 ( ［M + H］+，-0． 2)
503． 2169 ( ［2M-H］－，-5． 9)
297． 1106 ( ［M + HCOO］－，-2． 6)
251． 1079 ( ［M-H］－，0． 1)
10 C17H16O2 厄弗酚 ( 1)
7 266 533． 2704 ( ［2M + H］
+，-4． 0)
267． 1361 ( ［M + H］+，-1． 9)
311． 1350 ( ［M + HCOO］－，-2． 1)
265． 1226 ( ［M-H］－，-0． 8)
10 C18H18O2 灯心草酚( 3)
6431 天然产物研究与开发 Vol. 28
编号
No．
分子量
MW
正离子模式( m / z)
Ion in positive mode
MS /MS2 ( error in mDa and
relative abundance)
负离子模式( m / z)
Ion in negative mode
MS /MS2 ( error in
mDa and relative abundance)
不饱和度
DBE
分子式
Formula
化合物
Compounds
8 298 321． 1451 ( ［M + Na］
+，-1． 0)
299． 1609 ( ［M + H］+，-3． 3)
297． 1466 ( ［M-H］－，-3． 0) 9 C19H22O3 juncuenins G( 4)
9 296 319． 1232 ( ［M + Na］
+，-7． 3)
297． 1520 ( ［M + H］+，3． 5)
295． 1326 ( ［M-H］－，-1． 4) 10 C19H20O3 dehydrojuncuenins D( 5)
10 248 249． 0895 ( ［M + H］+，-1． 5) 247． 0777 ( ［M-H］－，1． 2) 12 C17H12O2
5-( hydroxymethyl) -1-
methylphen-anthrene-2，7-diol( 6)
11 278 301． 1370 ( ［M + Na］
+，-4． 0)
279． 1572 ( ［M + H］+，-1． 9)
－ 6 C16H22O4 －
12 456
913． 7473 ( ［2M + H］+ )
457． 3675 ( ［M + H］+，-0． 1)
→439． 3564( ［M-H2O + H］+，100% )
911． 7198 ( ［2M-H］－ )
455． 3735 ( ［M-H］－，-1． 6)
7 C30H48O3 齐墩果酸( 7)
图 2 三个亚流分 LC-MS的 BPC谱图( 编号为化合物，1 BPC表示正离子模式，3 BPC表示负离子模式)
Fig. 2 LC-MS base peak chromatogram ( BPC) of three subfractions ( Numbers indicated compounds，1 BPC indicated positive
mode，3 BPC indicated negative mode)
3． 3 化合物的结构鉴定
化合物 1 淡黄色粉末; HＲ-ESI-MS ( -) m/z
251. 1075 ［M-H］-( 计算值 251. 1078 ) 。1H NMＲ
( Acetone-d6，600 MHz ) δH : 7. 19 ( 1H，d，J = 8. 4
Hz，H-4) ，6. 94 ( 1H，dd，J = 17. 4，10. 9 Hz，H-12 ) ，
6. 90 ( 1H，d，J = 2. 3 Hz，H-6 ) ，6. 74 ( 1H，d，J =
8. 4 Hz，H-3) ，6. 72 ( 1H，d，J = 2. 3 Hz，H-8 ) ，5. 64
( 1H，dd，J = 17. 4，1. 2 Hz，H-13a) ，5. 20 ( 1H，dd，J
= 10. 9，1. 2 Hz，H-13b) ，2. 67 ( 2H，m，H-9 ) ，2. 62
( 2H，m，H-10) ，2. 67 ( 3H，s，H-11 ) ; 13 C NMＲ( Ace-
tone-d6，150 MHz) δC : 121. 6 ( s，C-1 ) ，139. 8 ( s，C-
1a) ，154. 7 ( s，C-2 ) ，112. 3 ( d，C-3 ) ，127. 1 ( d，C-
4) ，126. 5 ( s，C-4a ) ，136. 7 ( s，C-5 ) ，127. 9 ( s，C-
5a) ，113. 4 ( d，C-6 ) ，156. 3 ( s，C-7 ) ，115. 0 ( d，C-
8) ，141. 2 ( s，C-8a) ，31. 0 ( t，C-9) ，26. 1 ( t，C-10) ，
11. 8 ( q，C-11) ，139. 8 ( d，C-12) ，113. 6 ( t，C-13 ) 。
以上数据与文献［9］中的化合物对照一致，鉴定化合
物 1 为厄弗酚( effusol) 。
化合物 2 淡黄色粉末; HＲ-ESI-MS ( -) m/z
249. 0918 ［M-H］-( 计算值 249. 0921 ) 。1H NMＲ
( Acetone-d6，600 MHz ) δH : 8. 49 ( 1H，d，J = 9. 1
Hz，H-4 ) ，7. 89 ( 1H，d，J = 9. 1 Hz，H-10 ) ，7. 64
( 1H，d，J = 9. 1 Hz，H-9) ，7. 47 ( 1H，dd，J = 17. 2，
10. 7 Hz，H-12 ) ，7. 25 ( 1H，d，J = 2. 5 Hz，H-6 ) ，
7. 21 ( 1H，d，J = 2. 5 Hz，H-8 ) ，7. 19 ( 1H，d，J =
9. 1 Hz，H-3 ) ，5. 74 ( 1H，dd，J = 17. 2，1. 4 Hz，H-
7431Vol. 28 杨通华等: LC-MS导向分离灯心草中激动 5-HT1A和 MT2 受体的活性成分
13a) ，5. 42 ( 1H，dd，J = 10. 7，1. 4 Hz，H-13b ) ，
2. 56 ( 3H，s，H-11) ; 13C NMＲ( Acetone-d6，150 MHz)
δC : 118. 1 ( s，C-1 ) ，133. 4 ( s，C-1a ) ，153. 0 ( s，C-
2) ，115. 8 ( d，C-3 ) ，127. 0 ( d，C-4 ) ，125. 7 ( s，C-
4a) ，139. 2 ( s，C-5 ) ，124. 0 ( s，C-5a) ，119. 3 ( d，C-
6 ) ，155. 2 ( s，C-7 ) ，112. 5 ( d，C-8 ) ，134. 2 ( s，C-
8a) ，127. 2 ( d，C-9 ) ，123. 9 ( d，C-10 ) ，11. 3 ( q，C-
11) ，142. 6 ( d，C-12 ) ，114. 4 ( t，C-13 ) 。以上数据
与文献［14］中的化合物对照一致，鉴定化合物 2 为去
氢厄弗酚( dehydroeffusol) 。
化合物 3 淡黄色粉末; HＲ-ESI-MS ( + ) m/z
267. 1383［M + H］+ ( 计算值 267. 1380 ) 。1H NMＲ
( CD3OD，400 MHz) δH : 7. 41 ( 1H，d，J = 8. 5 Hz，H-
4) ，6. 78 ( 1H，dd，J = 18. 0，11. 4 Hz，H-12 ) ，6. 59
( 1H，d，J = 8. 1 Hz，H-3 ) ，6. 64 ( 1H，s，H-8 ) ，5. 44
( 1H，dd，J = 11. 4，2. 0 Hz，H-13a) ，5. 15 ( 1H，dd，J
= 18. 0，2. 0 Hz，H-13b) ，2. 64 ( 2H，m，H-9 ) ，2. 56
( 2H，m，H-10) ，2. 23 ( 3H，s，H-11) ，2. 19 ( 3H，s，H-
14) ; 13C NMＲ ( CD3OD，100 MHz) δC : 120. 1 ( s，C-
1) ，139. 0 ( s，C-1a) ，153. 0 ( s，C-2 ) ，110. 6 ( d，C-
3) ，127. 8 ( d，C-4 ) ，126. 3 ( s，C-4a) ，136. 8 ( s，C-
5) ，126. 6 ( s，C-5a ) ，120. 6 ( s，C-6 ) ，153. 3 ( s，C-
7) ，112. 3 ( d，C-8) ，136. 2 ( s，C-8a) ，30. 1 ( t，C-9) ，
25. 4 ( t，C-10 ) ，10. 5 ( q，C-11 ) ，138. 1 ( d，C-12 ) ，
117. 8 ( t，C-13) 。以上数据与文献［9］中的化合物对
照一致，鉴定化合物 3 为灯心草酚( juncusol) 。
化合物 4 淡黄色粉末; HＲ-ESI-MS ( -) m/z
297. 1471 ［M-H］-( 计算值 297. 1496 ) 。1H NMＲ
( Acetone-d6，600 MHz ) δH : 6. 99 ( 1H，d，J = 8. 4
Hz，H-4 ) ，6. 95 ( 1H，d，J = 2. 1 Hz，H-6 ) ，6. 77
( 1H，d，J = 8. 4 Hz，H-3) ，6. 67 ( 1H，d，J = 2. 1 Hz，
H-8) ，4. 93 ( 1H，q，J = 6. 0 Hz，H-12 ) ，3. 02 ( 2H，
q，J = 6. 6 Hz，H-14 ) ，2. 51 ( 2H，m，H-9 ) ，2. 41
( 2H，m，H-10 ) ，2. 21 ( 3H，s，H-11 ) ，1. 51 ( 3H，d，J
= 6. 0 Hz，H-13 ) ，0. 95 ( 3H，t，J = 6. 6 Hz，H-
15) ; 13 C NMＲ( Acetone-d6，150 MHz) δC : 121. 6 ( s，
C-1) ，140. 9 ( s，C-1a) ，154. 6 ( s，C-2) ，112. 4 ( d，C-
3) ，127. 0 ( d，C-4 ) ，126. 4 ( s，C-4a) ，142. 9 ( s，C-
5) ，127. 8 ( s，C-5a) ，112. 4 ( d，C-6 ) ，156. 6 ( s，C-
7) ，114. 2 ( d，C-8) ，140. 3 ( s，C-8a) ，31. 5 ( t，C-9) ，
26. 4 ( t，C-10 ) ，11. 9 ( q，C-11 ) ，73. 7 ( d，C-12 ) ，
24. 0 ( q，C-13) ，63. 4 ( t，C-14) ，15. 7 ( q，C-15) 。以
上数据与文献［10］中的化合物对照一致，鉴定化合物
4 为 juncuenin G。
化合物 5 淡黄色粉末; HＲ-ESI-MS ( -) m/z
295. 1331 ［M-H］-( 计算值 295. 1340 ) 。1H NMＲ
( CD3OD，600 MHz) δH : 7. 94 ( 1H，d，J = 9. 0 Hz，H-
4 ) ，7. 81 ( 1H，d，J = 9. 1 Hz，H-9) ，7. 54 ( 1H，d，J =
9. 1 Hz，H-10) ，7. 44 ( 1H，d，J = 2. 4 Hz，H-6) ，7. 10
( 1H，d，J = 2. 4 Hz，H-8) ，7. 09 ( 1H，d，J = 9. 0 Hz，
H-3) ，5. 53 ( 1H，q，J = 6. 1 Hz，H-12 ) ，3. 00 ( 2H，
m，H-14) ，2. 53 ( 3H，s，H-11) ，1. 79 ( 3H，d，J = 6. 2
Hz，H-13 ) ，1. 03 ( 3H，t，J = 7. 2 Hz，H-15 ) ; 13 C
NMＲ( CD3OD，150 MHz) δC : 118. 9 ( s，C-1 ) ，134. 2
( s，C-1a ) ，153. 3 ( s，C-2 ) ，115. 8 ( d，C-3 ) ，127. 0
( d，C-4 ) ，125. 5 ( s，C-4a ) ，144. 3 ( s，C-5 ) ，125. 5
( s，C-5a ) ，116. 4 ( d，C-6 ) ，155. 9 ( s，C-7 ) ，112. 4
( d，C-8 ) ，134. 7 ( s，C-8a ) ，128. 3 ( d，C-9 ) ，123. 7
( d，C-10 ) ，11. 4 ( q，C-11 ) ，76. 0 ( d，C-12 ) ，24. 1
( q，C-13) ，64. 6 ( t，C-14) ，15. 5 ( q，C-15) 。以上数
据与文献［10］中的化合物对照一致，鉴定化合物 5 为
dehydrojuncuenin D。
化合物 6 淡黄色粉末; HＲ-ESI-MS ( + ) m/z
249. 0898［M + H］+ ( 计算值 249. 0910 ) 。1H NMＲ
( Acetone-d6，600 MHz ) δH : 6. 88 ( 1H，d，J = 9. 2
Hz，H-10 ) ，6. 64 ( 1H，d，J = 9. 2 Hz，H-9 ) ，6. 63
( 1H，s，H-3 ) ，6. 55 ( 1H，s，H-4 ) ，6. 55 ( 1H，s，H-
5) ，6. 31 ( 1H，d，J = 2. 4 Hz，H-6 ) ，6. 27 ( 1H，d，J
= 2. 4 Hz，H-8) ，1. 47 ( 3H，s，H-11) ; 13 C NMＲ( Ac-
etone-d6，150 MHz) δC : 120. 4 ( s，C-1) ，153. 9 ( s，C-
2) ，112. 7 ( d，C-3 ) ，121. 0 ( s，C-3a) ，128. 1 ( d，C-
4) ，127. 1 ( d，C-5 ) ，133. 3 ( s，C-5a) ，112. 4 ( d，C-
6 ) ，155. 8 ( s，C-7 ) ，112. 4 ( d，C-8 ) ，121. 0 ( s，C-
8a) ，127. 8 ( d，C-9) ，124. 9 ( d，C-10 ) ，130. 7 ( s，C-
10a) ，132. 7 ( s，C-10b) ，130. 9 ( s，C-10c) ，11. 4 ( q，
C-11) 。以上数据与文献［11］中的化合物对照一致，
鉴定化合物 6 为 5-( hydroxymethyl) -1-methylphenan-
threne-2，7-diol。
化 合 物 7 白 色 粉 末; HＲ-ESI-MS m/z
457. 3675 ［M + H］+ ( 计算值 457. 3676 ) ; m/z
455. 3531［M-H］-( 计算值 455. 3519 ) ，其分子式预
测为 C30 H48 O3 ( Ω = 7. 0 ) 。其最大紫外吸收为 207
nm。经与齐墩果酸进行 TLC薄层层析对照，采用三
个展开剂即氯仿-石油醚 ( 30: 70 ) ，其 Ｒf = 0. 50; 乙
酸乙酯-石油醚( 20: 80 ) ，其 Ｒf = 0. 62; 丙酮-石油醚
( 15: 85) ，其 Ｒf = 0. 60;均与齐墩果酸的 Ｒf 值一致。
8431 天然产物研究与开发 Vol. 28
经硫酸乙醇 ( 10% ) 显色为紫红色，与齐墩果酸一
致。因此，化合物 7 的结构鉴定为齐墩果酸。
化合物 8 棕色油状; 1H NMＲ ( Acetone-d6，600
MHz) δH : 9. 58 ( 1H，s，H-1 ) ，7. 36 ( 1H，d，J = 3. 6
Hz，H-3 ) ，6. 57 ( 1H，d，J = 3. 6 Hz，H-4 ) ，4. 62
( 2H，s，H-6 ) ; 13 C NMＲ ( Acetone-d6，150 MHz) δC :
178. 0 ( d，C-1 ) ，153. 4 ( s，C-2 ) ，123. 0 ( d，C-3 ) ，
110. 1 ( d，C-4) ，162. 8 ( s，C-5 ) ，57. 4 ( t，C-6 ) 。以
上数据与文献［18］中的化合物对照一致，鉴定化合物
8 为 5-羟甲基-2-呋喃糠醛。
化合物 9 白色粉末; HＲ-ESI-MS ( + ) m/z
289. 0876［M + H］+ ( 计算值 289. 0918 ) 。1H NMＲ
( CD3OD，500 MHz) δH : 8. 00 ( 1H，d，J = 5. 6 Hz，H-
5 ) ，6. 44 ( 1H，d，J = 5. 6 Hz，H-6) ，4. 80 ( 1H，d，J =
7. 5 Hz，H-1) ，3. 81 ( 1H，m，H-6a) ，3. 65 ( 1H，m，
H-6b) ，3. 39 ( 1H，m，H-3) ，3. 35 ( 1H，m，H-4) ，
3. 29 ( 1H，m，H-5) ，3. 24 ( 1H，m，H-2) ，2. 43( 3H，
s，H-7) ; 13C NMＲ( CD3OD，125 MHz) δC : 143. 6 ( s，
C-2) ，164. 6 ( s，C-3) ，177. 2 ( s，C-4) ，117. 3 ( d，C-
5) ，157. 2 ( d，C-6) ，15. 3 ( t，C-7) ，105. 4 ( d，C-1) ，
75. 4 ( d，C-2) ，78. 5 ( d，C-3) ，71. 1 ( d，C-4) ，
78. 0 ( d，C-5) ，62. 5 ( t，C-6) 。以上数据与文
献［19］中的化合物对照一致，鉴定化合物 9 为麦芽
酚-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷。
3. 4 化合物的活性测定
利用 HEK293 细胞模型测定 9 个化合物对 5-
HT1A和 MT2 受体的激动作用。测试结果表明: 在
1. 0 mM下，厄弗酚( 1) 、灯心草酚( 3) 和 juncuenin G
( 4) 对 5-HT1A受体有较好的激动作用，其激动率分
别为 65. 35 ± 6. 70%、71. 33 ± 7. 39% 和 64. 11 ±
5. 33% ;灯心草酚、厄弗酚和 juncuenin G 对 MT2 受
体也有较好的激动作用，其激动率分别为 67. 28 ±
9. 26%、62. 77 ± 12. 06%和 56． 21 ± 11． 43%。去氢
厄弗酚和 dehydrojuncuenin D 对 MT2 受体有一定的
激动作用，其激动率分别为 42． 13 ± 8． 54%和 31． 06 ±
6. 21%。5-( hydroxymethyl ) -1-methylphenanthrene-2，7-
diol对 5-HT1A受体也有一定的激动作用，其激动率为
37． 04 ± 5． 84%。见表 3。
表 3 9 个化合物对 5-HT1A和 MT2 受体的激动作用( n = 3，x ± SDs)
Table 3 The agonistic rates of 9 compounds on 5-HT1A and MT2 receptors ( n = 3，x ± SDs)
化合物a
Compound
5-HT1A受体激动率b
5-HT1A receptor
agonistic rates ( % )
MT2 激动率c
MT2 receptor
agonistic rates ( % )
厄弗酚 Effusol ( 1) 65． 35 ± 6． 70 62． 77 ± 12． 06
去氢厄弗酚 Dehydroeffusol ( 2) 38． 21 ± 9． 02 42． 13 ± 8． 54
灯心草酚 Juncusol ( 3) 71． 33 ± 7． 39 67． 28 ± 9． 26
Juncuenin G ( 4) 64． 11 ± 5． 33 56． 21 ± 11． 43
Dehydrojuncuenin D ( 5) 26． 72 ± 7． 99 31． 06 ± 6． 21
5-( Hydroxymethyl) -1-methylphenanThrene-2，7-diol( 6) 37． 04 ± 5． 84 20． 24 ± 3． 35
齐墩果酸 Oleanic acid ( 7) 7． 32 ± 6． 96 15． 13 ± 5． 67
5-羟甲基-2-呋喃糠醛 2-Formyl-5-hydroxymethylfuran ( 8) 4． 30 ± 5． 47 6． 58 ± 3． 39
麦芽酚-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷 Maltol-3-O-β-D-glucopyranoside ( 9) 5． 16 ± 2． 41 4． 23 ± 4． 12
注: a样品测试浓度为 1． 00 mM; b 5-羟色胺的最大激动率作为 100% ; c 褪黑素的最大激动率作为 100%。
Note: a The concentrations of samples were 1． 00 mM; b The highest agonistic rate of 5-HT was 100% ; c The highest agonistic rate of melatonin was 100% ．
4 结论
本文首次利用活性追踪并结合 LC-MS 分析的
方法，从灯心草中快速分离得到了 9 个化合物。其
中首次分离得到 2 个化合物; 首次测定了灯心草中
化学成分对 5-HT1A和 MT2 受体的激动作用。结果
表明厄弗酚、juncuenin G 和灯心草酚对 5-HT1A和
MT2 受体有较好的激动作用，去氢厄弗酚和 de-
hydrojuncuenin D对 5-HT1A和 MT2 受体也有一定的
激动作用。该研究首次揭示了灯心草中激动 5-
HT1A和 MT2 受体活性成分，为其进一步开发与利用
奠定了基础。
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