全 文 ：收稿日期:2015-07-20
基金项目:国家自然科学基金(31370373)
作者简介:胡芳(1990-)，女，在读硕士研究生，专业方向:天然产物的活性评价;E-mail:1029791539@ qq. com。
* 通讯作者:汪鋆植，Tel:13886684362，E-mail:wangjunzhi@ ctgu. edu. cn。
忍冬木层孔菌醇提物雌激素样作用研究
胡 芳1，汪鋆植1，2* ，武 玲1，黄文峰1，贺海波1，闫喜明1
(1. 三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室，湖北 宜昌 443002;2. 湖北省土家族医药研究所，湖
北 宜昌 443002)
摘要 目的:研究忍冬木层孔菌醇提物的雌激素样作用，为寻找安全有效的雌激素替代药物提供依据。方法:
采用细胞增殖实验评价忍冬木层孔菌醇提物的体外雌激素样作用和抗雌激素作用;检测忍冬木层孔菌提取物对雌
性幼鼠、去势雌性大鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)含量及成年雌性大鼠子宫雌激素受体 α(EＲα)、雌激素受体 β
(EＲβ)表达，并考察其对成年雌性大鼠子宫、卵巢及乳腺组织病理学的影响。结果:细胞增殖实验显示，忍冬木层
孔菌醇提物在 5 ～ 50 μg /mL时能刺激 MCF-7 细胞增殖，具有雌激素样作用;在 10 ～ 100 μg /mL时能降低 E2 诱导的
MCF-7 细胞增殖，具有抗雌激素作用。体内实验表明 300 mg /kg 忍冬木层孔菌醇提物能增加雌性幼鼠血清 E2 含
量，促进初生雌性幼鼠子宫发育;忍冬木层孔菌醇提物 240 mg /kg可增加去势雌鼠血清 E2、P含量，改善因雌激素缺
乏而导致的子宫萎缩。120 mg /kg忍冬木层孔菌醇提物可增加正常成年雌性大鼠血清 P含量，120、240 mg /kg忍冬
木层孔菌醇提物可以增加正常雌性成年大鼠血清 E2 含量并能调节成年雌性大鼠子宫 EＲα、EＲβ 表达。病理检查
显示，忍冬木层孔菌醇提物对大鼠子宫、卵巢、乳腺等组织病理学无明显影响。结论:忍冬木层孔菌具有雌激素样
作用，无明显不良反应，具有替代雌激素应用的前景。
关键词 忍冬木层孔菌;醇提物;性激素;雌激素受体
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2016)03-0634-07
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2016. 03. 041
Estrogenic Activities of Alcohol Extract from Phellinus lonicerinus
HU Fang1，WANG Jun-zhi1，2，WU Ling1，HUANG Wen-feng1，HE Hai-bo1，YAN Xi-ming1
(1. Hubei Key Laboratory of Natural Products Ｒesearch and Development，China Three Gorges University，Yichang 443002，China;
2. Hubei Province Tujia Drug Ｒesearch Institute，Yichang 443002，China)
Abstract Objective:To investigate the estrogenic activities of alcohol extract from Phellinus lonicerinus(AEPL). Methods:Estro-
gen and anti-estrogen effects were evaluated by cell proliferation experiment in vitro. Through elevating young rat uterine weight，castra-
ted female rats，and adult female rats uterus index serum estradiol(E2)and progesterone(P)were analyzed by enzyme immune methods，
and uterine estrogen receptor α(EＲα)and estrogen receptor β(EＲβ)protein expressions were measeured by immunohistochemisty，and
investigeted the histopathological of uterus，ovary，and breast of adult female rats. Ｒesults:Compared with the control group，AEPL pro-
moted estrogen-sensitive MCF-7 proliferation significantly(P ＜ 0. 05 or P ＜ 0. 01)in the doses of 5 ～ 50 μg /mL in vitro experiment;
compared with the E2 control group，it also presented anti-estrogenic effect in E2-induced MCF-7 cells at the doses of 10 ～ 100 μg /mL
(P ＜ 0. 05 or P ＜ 0. 01). In the animal experiments，AEPL remarkably increased serum E2 content and promoted growth of uterus in pri-
mary female mice at the dose of 300 mg /kg;and raised the serum E2 and P content，alleviated uterine atrophy caused by estrogen defi-
ciency in castrated rats at the dose of 240 mg /kg. In adult female rats，AEPL markedly increased the serum P content at the dose of 120
mg /kg，and also markedly increased the serum E2 content at the dose of 120，240 mg /kg，and regulated the protein expressions of EＲα
and EＲβ. AEPL has no effects on histopathological changes of uterus，ovary and mammary gland in rats. Conclusion:AEPL shows estro-
genic effects with fewer adverse reaction，which possesses the replacement of estrogen application prospects.
Key words Phellinus lonicerinus (Bond.)Bond. et Sing;Alcohol extracts;Gonadal hormone;Estrogen-receptor
忍冬木层孔菌 Phellinus lonicerinus(Bond. )
Bond. et Sing 是湖北等地习用的桑黄品种，也是土
家族常用药〔1〕。邓改改等〔2〕建立了方法简便、可靠
的忍冬木层孔菌质量标准;罗友成等〔3〕研究发现忍
冬木层孔菌醇提物对 CCl4 致大鼠肝纤维化有防治
作用。此外，桑黄还是目前国际公认抗癌效果最好
的药用菌之一，王晓梅等〔4〕在对忍冬木层孔菌的化
学成分进行研究时发现其中有化合物对乳腺癌细胞
MCF-7、MDA-MB-231 具有细胞毒活性。为了克服
长期使用雌激素可能诱发乳腺癌和子宫内膜癌的风
·436· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 3 期 2016 年 3 月
险，笔者利用反选法，从具有抗癌作用的土家族药物
中反选具有雌激素样作用的药物，发现忍冬木层孔
菌具有良好抗癌活性，同时具有雌激素样作用〔5-7〕，
其中 Hispolon、原儿茶酸等多种成分具有雌激素样
作用。由于传统药物的作用是多成分多靶点作用的
综合结果，为了观察忍冬木层孔菌作用的整体雌激
素效应和安全性，本文对忍冬木层孔菌醇提物的雌
激素样作用进行了研究，为开发更安全有效的雌激
素替代药物提供实验依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF级雌性昆明小鼠，体质量 9 ～
12 g，SPF级雌性 SD大鼠，体质量 120 ～ 140 g，均由
三峡大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证
号:SCXK(鄂)2011-0012。动物受试环境:屏障系
统，实验动物使用许可证号:SYXK(鄂)2011-0061。
饲料、饮水、垫料均符合《湖北省实验动物质量控制
标准》。
1. 2 细胞株 人乳腺癌细胞株 MDA-MB-231(AT-
TC)、MCF-7，由武汉中国典藏物培养中心提供。
1. 3 药物与试剂 忍冬木层孔菌采于湖北省神农
架林区，并经中国科学院微生物研究所卯晓岚教授
鉴定为忍冬木层孔菌 Phellinus lonicerinus(Bond. )
Bond. et Sing;17-β雌二醇(美国 Sigma);无酚红 ＲP-
MI-1640 干粉、L-15 干粉培养基(美国 Invitrogen);
胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);胰
蛋白酶(华美生物工程公司);重组人雌激素受体基
因片段(hEＲ)及共激活因子 GＲIP1 的双杂交酵母
(Y191)由日本富山大学馈赠;邻硝基苯 β-D-吡喃半
乳糖苷(ONPG，美国 Sigma);无氨基酵母氮源(Dif-
co，北京明日百傲生物科技发展研究所);孕酮试剂
盒、雌二醇酶联免疫试剂盒(英国 Cayman);SABC
免疫组化试剂盒、DAB 显色试剂盒(武汉博士德生
物工程有限公司);多克隆 EＲα、EＲβ抗体(英国 Ab-
cam)。
1. 4 主要仪器 Stat Fax-2100 酶联免疫检测仪
(AWAＲENESS TECHNOLOGY INC);CO2 培养箱
(SHELLJB);脱水机、包埋机(德国徕卡公司);
HM340E 石蜡切片机(德国 MICＲOM);CS-VI 烤片
机(孝感市宏业医用仪器有限公司)。
2 方法
2. 1 实验药物的制备
2. 1. 1 忍冬木层孔菌醇提物的制备:忍冬木层孔
菌药材烘干称量质量，粉碎成粗粉，加 10 倍量 75%
乙醇溶液，加热回流提取 3 次，每次 1. 5 h，合并滤
液，滤过，得提取液;回收乙醇后减压浓缩干燥得忍
冬木层孔菌醇提物，得率为 10. 7%。
2. 1. 2 体外实验药物配制:忍冬木层孔菌醇提物
以 DMSO 充分溶解，制备成 100 mg /mL 的母液，
0. 22 μm 过滤除菌，4 ℃冰箱保存，备用。17β-雌二
醇溶于 DMSO 中，制备成 0. 1 mol /L 的母液，0. 22
μm 过滤除菌，4 ℃冰箱保存，备用。
2. 1. 3 体内实验药物配制:忍冬木层孔菌醇提物
以羧甲基纤维素钠(CMC)充分溶解，制备成 15 mg /
mL(或 12 mg /mL)、30 mg /mL(或 24 mg /mL)，4 ℃
保存。17β-雌二醇溶于 CMC 中，制备成 0. 01 mg /
mL，4 ℃冰箱保存，备用。
2. 2 忍冬木层孔菌醇提物对 MCF-7 细胞及 MDA-
MB-231 细胞增殖的影响 人乳腺癌 MCF-7 细胞均
采用开放式单层贴壁培养，MCF-7 的培养液为无酚
红 ＲPMI-1640(10%胎牛血清，青霉素 100 U /mL，链
霉素 100 μg /mL)，恒温 37 ℃，5% CO2，相对饱和湿
度。取对数生长期 MCF-7 细胞，用 ＲPMI-1640 培养
基(含 10%胎牛血清，0. 5%青霉素、链霉素各 100
U /mL、100 μg /mL)培养，细胞贴壁 70%后用 0. 25%
的胰酶消化，调整细胞密度至 1 × 104 /mL，接种于 96
孔板，培养 24 h使其贴壁。贴壁后将培养基换成无
酚红的培养基，加入忍冬木层孔菌醇提物(5、10、
20、50、100 μg /mL)，设 6 个复孔。24 h 后，用 MTT
法检测细胞增殖，每孔加入 10 μL MTT，培养 4 h 后
加入 150 μL DMSO在 492 nm检测光密度 D(λ)值。
人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞采用封闭式单层贴壁
培养，检测方法除了培养基为 L-15 及加药前不更换
培养基外，其他处理方法均相同。
2. 3 忍冬木层孔菌醇提物对雌激素诱导 MCF-7 细
胞增殖的影响 MCF-7 细胞的培养方法同“2. 2”项
下，在将培养基换成无酚红培养基时，同时向体系中
加入 10 －9 mol /L 17β-雌二醇，以及受试药物，在同等
条件下进行培养。
2. 4 忍冬木层孔菌醇提物对酵母双杂交实验的影
响 分别将重组人雌激素 α、β 受体基因片段的酵
母活化 1 ～ 4 d，接种在 10 mL 营养缺陷培养基
(SD)，30 ℃摇床培养过夜。将忍冬木层孔菌醇提
物和雌二醇稀释成不同浓度梯度，于 200 μL 新 SD
培养液，再加入酵母 50 μL 培养液，加入 2. 5 μL 不
同浓度的药物继续 30 ℃培养 4 h。测酵母密度:取
150 μL放入 96 孔板于 595 nm(或 600 nm)测光密
度 D(λ)值作为酵母密度。12 000 r /min 离心 5
min，吸取上清，加入 200 μL 缓冲液中，振匀，37 ℃
温浴 15 min，加入 40 μL 浓度 4 μL /mL的 2-硝基苯
β-半乳糖苷，酶促反应 30 min，加入 100 μL 1 mol /L
·536·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 3 期 2016 年 3 月
Na2CO3 停止反应。取 150 μL 加入 96 孔板中测光
密度 D(λ)值。并计算 β-半乳糖苷酶的活性。
β-半乳糖苷酶活性 = 1000 ×
D(λ)405 － 1. 75 × D(λ)545
T × V × D(λ)595
式中:T为反应时间(30 min)，V为用于测定的培养液的
体积(0. 05 mL)
2. 5 忍冬木层孔菌醇提物对雌性幼鼠子宫系数及
性激素的影响 取刚断奶的 9 ～ 12 g 雌性昆明小鼠
32 只，随机分为 4 组，每组 8 只，分别为空白对照
组、17β-雌二醇(0. 1 mg /kg)阳性对照组及忍冬木层
孔菌醇提物低(150 mg /kg)、高(300 mg /kg)剂量
组。饲喂无大豆的特殊饲料，小鼠适应性饲养 1 w
后称量体质量。连续灌胃给药 4 d。第 4 天称量质
量后，摘眼球取血，离心分离血清。按试剂盒说明
书，检测小鼠血清中 E2 和 P的含量;颈椎脱臼处死，
剥离子宫，称量质量，计算子宫系数。
子宫系数 =子宫湿质量(mg)
体质量(g)
2. 6 忍冬木层孔菌醇提物对去势雌性大鼠子宫系
数及性激素的影响 雌性 SD 大鼠，体质量 120 ～
140 g，适应性喂养 3 d，造模前 1 d禁食，行双侧卵巢
摘除手术，假手术只开腹，不进行双侧卵巢摘除。术
后注射青霉素，1 次 /d，连续 3 d，防止术后感染。手
术后分成 5 组，每组 8 只。分别为假手术组、模型
组、17β-雌二醇(0. 1 mg /kg)阳性对照组及忍冬木层
孔菌醇提物低(120 mg /kg)、高(240 mg /kg)剂量组。
去大豆饲料喂养。每天记录大鼠状态。持续 8 w，处
死前 24 h动物禁食不禁水，处死前股动脉采血，分离
血清。按酶免试剂盒说明书检测血清 E2、P。颈椎脱
臼处死，剥离子宫，称量质量，计算子宫系数。
2. 7 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫系
数及性激素的影响 取刚断奶(21 d)的雌性 SD 大
鼠，自由摄食和饮水。第 42 天开始每天检查阴道开
口情况，如动物在第 1 次检查时阴门已经开口，则阴
道开口时间记为 42 d。将相同时间的大鼠分为 4
组，每组 8 只，分别空白对照组、17β-雌二醇(0. 1
mg /kg)阳性对照组及忍冬木层孔菌醇提物低(120
mg /kg)、高(240 mg /kg)剂量组。于每日 14 ∶ 00 灌
胃给药 1 次，空白对照组给予等体积生理盐水。给
药期间观察大鼠给药后的体征，并记录体质量，根据
体质量调整给药量。21 d 后，上午 8∶ 00 开始禁食，
不禁水，第 22 天称量质量。大鼠股动脉取血 4 mL，
离心取血清，采用酶联免疫法检测 E2、P 含量。处
死大鼠，取子宫称量质量，计算子宫系数。
2. 8 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫
EＲα、EＲβ蛋白表达的影响 采用免疫组化法，制作
4 μm厚度的切片，脱蜡，微波修复，加 EＲα、EＲβ 多
克隆抗体，SABC 免疫组织化学三步法，DAB 显色，
苏木精复染，常规脱水，中性树胶封片。采用图像分
析系统定量分析 EＲα、EＲβ 阳性表达平均光密度，
平均光密度与阳性表达强弱成正比。
2. 9 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫、
卵巢及乳腺组织病理学的影响 4%多聚甲醛固定
大鼠子宫、卵巢、乳腺，制作石蜡病理切片，HE 染色
后在光镜下观察各器官的组织学结构变化。
2. 10 统计学处理 所有实验结果以 珋x ± s表示，数
据分析在 SPSS 13. 0 统计软件包上进行，以单因素
方差分析(One-way ANOVA)进行多组间差异的比
较，Dunnett-t检验比较组间均数的差异;以 P ＜ 0. 05
为差异有统计学意义。
3 结果
3. 1 忍冬木层孔菌醇提物对 MCF-7 细胞及 MDA-
MB-231 细胞增殖的影响 结果如表 1 所示，忍冬木
层孔菌醇提物在 5 ～ 50 μg /mL 时能促进 MCF-7 细
胞增殖，与空白对照组比较差异有统计学意义(P ＜
0. 05 或 P ＜ 0. 01)。忍冬木层孔菌醇提物对 MDA-
MB-231 细胞的增殖无明显影响。
3. 2 忍冬木层孔菌醇提物对雌激素诱导 MCF-7 细
胞增殖的影响 结果如表 2 所示，忍冬木层孔菌醇
提物在 10 ～ 100 μg /mL 时能降低雌二醇诱导的
MCF-7 细胞增殖(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01)。
表 1 忍冬木层孔菌醇提物对 MCF-7 细胞及MDA-MB-231 细胞增殖的影响(珔x ± s，n =6)
组别 浓度 /(μg /mL)
MCF-7 MDA-MB-231
D(λ) 增殖率 /% D(λ) 增殖率 /%
空白对照组 － 0. 316 ± 0. 003 － 0. 508 ± 0. 008 －
17β-雌二醇组 10 －9 mol /L 0. 502 ± 0. 008＊＊ 59. 0 0. 506 ± 0. 006 － 0. 4
忍冬木层孔菌醇提物组 100 0. 359 ± 0. 010 13. 7 0. 488 ± 0. 007 － 4. 0
50 0. 413 ± 0. 007＊＊ 30. 6 0. 491 ± 0. 005 － 3. 3
20 0. 446 ± 0. 013＊＊ 41. 0 0. 501 ± 0. 019 － 1. 4
10 0. 431 ± 0. 008＊＊ 36. 5 0. 496 ± 0. 006 － 2. 4
5 0. 371 ± 0. 008* 17. 5 0. 495 ± 0. 007 － 2. 5
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
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表 2 忍冬木层孔菌醇提物对雌激素诱导
MCF-7 细胞增殖的影响(珔x ± s，n =6)
组别
浓度 /
(μg /mL)
D(λ)
增殖率 /
%
空白对照组 － 0. 367 ± 0. 008＊＊ －
模型组 10 －9 mol /L 0. 490 ± 0. 007 33. 5
忍冬木层孔菌醇提物组 100 0. 393 ± 0. 005＊＊ 7. 2
50 0. 423 ± 0. 005＊＊ 15. 3
20 0. 430 ± 0. 005＊＊ 17. 2
10 0. 458 ± 0. 007* 24. 8
5 0. 481 ± 0. 008 31. 1
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 3 忍冬木层孔菌醇提物对酵母双杂交实验的影
响 结果如表 3 所示，与空白对照组比较，忍冬木层
孔菌醇提物在 10 －3 ～ 10 －6 mol /L 与 α 受体的结合
能力及 β受体的结合能力显著升高(P ＜ 0. 01)，并
呈浓度依赖关系。
表 3 忍冬木层孔菌醇提物对酵母双杂交实验
的影响(U，珔x ± s，n =6)
组别
浓度 /
(mol /L)
β-半乳糖苷酶活性
α受体 β受体
空白对照组 － 129. 5 ± 2. 2 105. 0 ± 2. 6
17β-雌二醇组 10 － 9 2126. 0 ± 60. 1＊＊ 2045. 5 ± 57. 6＊＊
忍冬木层孔菌醇提物组 10 － 3 1097. 0 ± 43. 6＊＊ 1189. 9 ± 17. 3＊＊
10 － 4 820. 8 ± 19. 1＊＊ 840. 5 ± 12. 4＊＊
10 － 5 758. 7 ± 18. 3＊＊ 768. 5 ± 6. 8＊＊
10 － 6 359. 0 ± 5. 6＊＊ 328. 2 ± 17. 8＊＊
10 － 7 221. 6 ± 16. 6 283. 5 ± 9. 6
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 4 忍冬木层孔菌醇提物对雌性幼鼠子宫系数及
性激素的影响 结果如表 4 所示，与空白对照组比
较，除高剂量组 E2 水平显著升高外，忍冬木层孔菌
醇提物对雌性幼鼠的子宫系数及性激素无明显影响
(P ＞ 0. 05)。
表 4 忍冬木层孔菌醇提物对雌性幼鼠子宫系数及性激素的影响(珔x ± s，n =8)
组别 剂量 /(mg /kg) 子宫系数 /(mg /g) E2 /(pg /mL) P /(pg /mL)
空白对照组 － 1. 0 ± 0. 4 21. 3 ± 3. 8 8. 1 ± 1. 4
17β-雌二醇组 0. 1 1. 6 ± 0. 6* 28. 0 ± 4. 2＊＊ 7. 9 ± 2. 3
忍冬木层孔菌醇提物低剂量组 150 1. 2 ± 0. 4 21. 5 ± 3. 7 8. 2 ± 1. 7
忍冬木层孔菌醇提物高剂量组 300 1. 2 ± 0. 3 27. 7 ± 3. 9* 8. 3 ± 1. 9
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 5 忍冬木层孔菌醇提物对去势雌性大鼠子宫系
数及性激素的影响 结果如表 5 所示，与假手术组
比较，模型组大鼠子宫系数及血清 E2、P 含量显著
降低(P ＜ 0. 01)。与模型组比较，各给药组子宫系
数显著升高(P ＜ 0. 01)，忍冬木层孔菌醇提物高剂
量组大鼠血清 E2、P含量显著升高(P ＜ 0. 05)。
表 5 忍冬木层孔菌醇提物对去势雌性大鼠子宫系数及性激素的影响(珔x ± s，n =8)
组别 剂量 /(mg /kg) 子宫系数 /(mg /g) E2 /(pg /mL) P /(pg /mL)
正常对照组 － 1. 6 ± 0. 1＊＊ 25. 7 ± 4. 3＊＊ 8. 4 ± 0. 15＊＊
模型组 － 0. 3 ± 0. 1 13. 6 ± 4. 5 1. 5 ± 0. 2
17β-雌二醇组 0. 1 0. 7 ± 0. 2＊＊ 26. 7 ± 5. 3＊＊ 2. 7 ± 0. 4
忍冬木层孔菌醇提物低剂量组 120 0. 4 ± 0. 2＊＊ 16. 4 ± 4. 1 2. 3 ± 0. 4
忍冬木层孔菌醇提物高剂量组 240 0. 9 ± 0. 3＊＊ 18. 8 ± 4. 0* 3. 5 ± 0. 7*
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 6 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫系
数及性激素的影响 结果如表 6 所示，与空白对照
组比较，忍冬木层孔菌醇提物各剂量组大鼠血清 E2
含量显著升高(P ＜ 0. 01)，忍冬木层孔菌醇提物低
剂量组大鼠血清 P含量显著升高(P ＜ 0. 05)。
3. 7 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫
EＲα、EＲβ 蛋白表达的影响 结果如图 1、2 及表 7
所示，EＲα、EＲβ 阳性反应效应物质为棕黄色小颗
粒，散在分布在细胞质或细胞核中，主要表现在子宫
腺周围。与空白对照组比较，忍冬木层孔菌醇提物
低剂量组 EＲα 表达显著升高(P ＜ 0. 01)，17β-雌二
醇组及忍冬木层孔菌醇提物高剂量组 EＲα 表达显
著降低(P ＜ 0. 01)，各给药组 EＲβ 表达均显著升高
(P ＜ 0. 01)。
3. 8 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫组
织病理学的影响 结果如图 3 所示，各给药组子宫
内膜无明显增生，子宫腺较空白对照组增多，腺体细
胞肥大，透亮，基质细胞清楚，无特殊改变。
3. 9 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠卵巢组
织病理学的影响 结果如图 4 所示，各组大鼠卵巢
结构清晰，细胞大而圆，胞浆丰富，可见多个排列的
黄体及不同发育阶段的卵泡，次级卵泡腔内可见卵
丘及透明带等结构，颗粒细胞形态完整，排列整齐。
3. 10 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠乳腺
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表 6 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫系数及性激素的影响(珔x ± s，n =8)
组别 剂量 /(mg /kg) 子宫系数 /(mg /g) E2 /(pg /mL) P /(pg /mL)
空白对照组 － 2. 3 ± 0. 2 5. 7 ± 0. 4 8. 4 ± 0. 4
17β-雌二醇组 0. 1 4. 1 ± 0. 3＊＊ 15. 3 ± 0. 6＊＊ 7. 2 ± 0. 3
忍冬木层孔菌醇提物低剂量组 120 2. 7 ± 0. 2 18. 0 ± 2. 4＊＊ 9. 8 ± 0. 4*
忍冬木层孔菌醇提物高剂量组 240 2. 8 ± 0. 3 14. 2 ± 1. 5＊＊ 8. 9 ± 0. 4
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
图 1 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫 EＲα蛋白表达的影响(×100)
A. 空白对照组 B. 17β-雌二醇组 C. 忍冬木层孔菌醇提物低剂量组 D. 忍冬木层孔菌醇提物高剂量组
图 2 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫 EＲβ蛋白表达的影响(×100)
A. 空白对照组 B. 17β-雌二醇组 C. 忍冬木层孔菌醇提物低剂量组 D. 忍冬木层孔菌醇提物高剂量组
表 7 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫 EＲα、EＲβ蛋白表达的影响(珔x ± s，n =8)
组别 剂量 /(mg /kg) EＲα EＲβ
空白对照组 － 0. 240 ± 0. 007 0. 110 ± 0. 003
17β-雌二醇组 0. 1 0. 160 ± 0. 003＊＊ 0. 280 ± 0. 003＊＊
忍冬木层孔菌醇提物低剂量组 120 0. 290 ± 0. 007＊＊ 0. 350 ± 0. 007＊＊
忍冬木层孔菌醇提物高剂量组 240 0. 170 ± 0. 007＊＊ 0. 280 ± 0. 007＊＊
注:与空白对照组比较，＊＊P ＜ 0. 01
图 3 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠子宫组织病理学的影响(×100)
A. 空白对照组 B. 17β-雌二醇组 C. 忍冬木层孔菌醇提物低剂量组 D. 忍冬木层孔菌醇提物高剂量组
组织病理学的影响 结果如图 5 所示，各组大鼠乳
腺组织形态基本正常，空白对照组含有少量的腺泡
和导管，脂肪组织和结缔组织丰富。各给药组腺泡
和导管略有增生，脂肪组织和结缔组织相对减少。
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图 4 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠卵巢组织病理学的影响(×100)
A. 空白对照组 B. 17β-雌二醇组 C. 忍冬木层孔菌醇提物低剂量组 D. 忍冬木层孔菌醇提物高剂量组
图 5 忍冬木层孔菌醇提物对成年雌性大鼠乳腺组织病理学的影响(×100)
A. 空白对照组 B. 17β-雌二醇组 C. 忍冬木层孔菌醇提物低剂量组 D. 忍冬木层孔菌醇提物高剂量组
4 讨论
雌激素是女性的重要激素，雌激素缺乏可导致
多种病症。临床上对于雌激素缺乏患者通常采用激
素替代疗法治疗，通过补充雌、孕激素以缓解因雌激
素缺乏所表现出来的一系列相关症状。但雌激素替
代疗法用药周期长，长期使用雌激素除可能出现乳
房增生肿痛、静脉血栓、高血压、水潴留等不良反应
外，还可能增加子宫内膜癌、乳腺癌等发病的风
险〔8〕。因此，从中药中筛选更安全有效的激素替代
药物具有重要意义。本课题对忍冬木层孔菌醇提物
的雌激素作用进行了研究。
应用人乳腺癌细胞雌激素受体阳性细胞 MCF-7
及人乳腺癌细胞雌激素受体阴性细胞 MDA-MB-231
检测药物与细胞增殖之间的关系，可反映出药物的
雌激素样作用。实验结果显示忍冬木层孔菌醇提物
可以使 MCF-7 细胞增殖，但对 MDA-MB-231 细胞无
明显影响，表明忍冬木层孔菌醇提物可能具有雌激
素样作用。酵母双杂交实验进步证实忍冬木层孔菌
醇提物与雌激素受体 α、β 具有显著的结合能力。
证明忍冬木层孔菌醇提物中的有效成分可通过直接
与雌激素受体结合，进一步发挥雌激素样作用。同
时，忍冬木层孔菌醇提物可抑制由外源性雌激素引
起的 MCF-7(EＲ +)细胞的增殖，显示出抗雌激素作
用，提示其具有雌激素双向调节作用。
通过对不同生理、病理状态的动物实验，表明忍
冬木层孔菌醇提物具有雌激素双向调节作用，对去
势大鼠有拟雌激素作用，对高浓度雌激素具有拮抗
作用，用药后虽然正常大鼠血清雌二醇明著增加，但
子宫内膜无明显增生，表明忍冬木层孔菌醇提物能
拮抗雌激素引起的子宫内膜增生，降低子宫内膜癌
风险。忍冬木层孔菌醇提物中有效成分一方面可直
接与雌激素受体结合，通过对雌激素受体结合能力
和内在活性的差异或作用于抗癌相关靶点克服雌激
素效应可能引起的不良反应，发挥抗雌激素效应，另
一方面可以通过影响内分泌，调节雌激素、孕激素含
量，调整雌激素受体的表达，从而控制雌激素作用效
应强度，达到防治子宫内膜增生作用，但具体作用机
制有待进一步研究。同时，忍冬木层孔菌醇提物体
外具有拟雌激素作用，体内作用温和，无明显毒副作
用，具有替代雌激素使用的可行性。但体内雌激素
缺乏时，是直接的拟雌激素作用，还是通过调节内源
性雌激素含量和效应而发挥作用，还有待进一步观
察。同时，忍冬木层孔菌醇提物对雌激素缺乏导致
的骨质疏松症、围绝经期综合征等病症的作用需要
进一步观察。
综上所述，忍冬木层孔菌醇提物对雌激素具有
双向调节作用，如何调控剂量，使其作用最佳，不良
反应最小，需要进一步考察。同时，忍冬木层孔菌醇
提物中多种成分可作用于雌激素受体，产生协同或
拮抗不同作用，因此醇提物中不同成分对疗效和不
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良反应的影响需要进步研究，以利于进一步控制主
要成分配比，使其更安全、有效。此外，忍冬木层孔
菌醇提物对子宫、乳腺等雌激素靶器官具有一定影
响，长期使用是否会有不良影响也需要进一步观察。
参 考 文 献
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究［J］．中药材，2011，34(8):1209-1211.
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鼠肝纤维化的影响［J］． 中药材，2013，36(8):1325-
1328.
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究［J］．中药材，2011，34(6):891-893.
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(Bond. )Bond. et Sing［J］． Fitoterapia，2014，95:93-101.
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