全 文 ：蒲葵子抗肿瘤活性部位筛选及抗血管生成作用
王　慧1 ,李　傲 2＊ ,董小萍 1 ,徐晓玉3
(1.成都中医药大学药学院 ,四川成都 611137;2.重庆医科大学药学院 ,重庆 400016;3.西南大学药学与
中医药学院 ,重庆 400715)
　　摘要　目的:筛选蒲葵子抗肿瘤作用的活性部位 , 探讨蒲葵子抗血管生成的作用机制。方法:采用 MTT法检测
蒲葵子醇提物各分离部位对肿瘤细胞株增殖的影响 , ELISA法检测对肿瘤细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)水
平的影响。以活性部位作用于 VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC), RT-PCR和 WesternBlotting方法分析
内皮细胞 Flk-1mRNA和蛋白的表达变化。结果:蒲葵子醇提物乙酸乙酯部位可选择性抑制结肠癌细胞株 HT-29和
膀胱癌细胞株 T24肿瘤细胞的生长 , 其抑制率可分别达 74.66%和 86.52%, 并可显著降低各肿瘤细胞株分泌
VEGF水平。石油醚部位对 HT-29和 T24生长也有一定的抑制作用 , 其最高抑制率分别为 43.80%和 38.67%,并
可降低各肿瘤细胞分泌 VEGF水平 , 但作用强度均不及乙酸乙酯部位。水和正丁醇部位未表现抗肿瘤活性。对
VEGF诱导内皮细胞表达 FlKmRNA和蛋白 , 乙酸乙酯部位表现出明显的抑制作用。结论:蒲葵子醇提物乙酸乙酯
分离部位有较好的抗肿瘤作用 ,是抗肿瘤作用的主要活性部位 , 其作用机制可能与降低肿瘤细胞分泌 VEGF, 抑制
VEGF诱导内皮细胞表达 Flk-1 mRNA和蛋白有关。
关键词　蒲葵;肿瘤;活性部位;血管内皮生长因子;血管生成
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)05-0718-05
ScreeningofAnti-tumorPartsfromtheSeedsofLivistonachinensis
andItsAnti-angiogenesisEfect
WANGHui1 , LIAo2 , DONGXiao-ping1 , XUXiao-yu3
(1.ColegeofPharmacy, ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine, Chengdu611137, China; 2.CollegeofPharmacy,
ChongqingUniversityofMedicalScience, Chongqing400016, China;3.ColegeofPharmaceuticalandTraditionalChineseMedicine,
SouthwestUniversity, Chongqing400715, China)
Abstract　Objective:Toscreentheanti-tumoractivepartsfromtheseedsofLivistonachinensisR.Br.anditsmechanismofanti-
angiogenesisefect.Methods:MTTassayandELISAwereusedtodetecttheproliferationandthesecretionofvascularendothelial
growthfactor(VEGF)ofchronicmyelogenousleukemiaK562, ovarianneoplasmSKOV3, coloncarcinomaHT-29 andbladdercancer
T24 cellinesrespectively.Theexpressionoffetalliverkinase(Flk-1)proteinandmRNAinendothelialcellsinducedbyVEGFwas
analyzedbyWesternblottingandRT-PCR.Results:TheethylacetatepartofalcoholextractfromseedsofLivistonachinensisR.Br.
couldselectivelyinhibittheproliferationofHT-29 andT24 cellinesinadose-dependentmanner, themaximuminhibitoryratewere
74.66% and86.52%, andcouldsignificantlyinhibitthesecretionofVEGFproteinofthefourtumorcelllines.Thepetroleumether
parthadsimilarinhibitoryefectaswelastheethylacetatepart, butitspotencywasinferiortotheethylacetatepart, themaximumin-
hibitoryratewere43.80% and38.67%, thewater-solubleandn-butanolpartshadnoefectondifferenttumorcellines.Theethylac-
etatepartcouldreducesignificantlytheexpressionofFlk-1 proteinandmRNAofHUVECinducedbyVEGF.Conclusion:Theethyl
acetatepart, whichisconsideredasactivepartofalcoholextractfromseedsofLivistonachinensisR.Br., hasfineanti-tumoractivity,
anditsmechanismmightbeassociatedwithreducingVEGFproteinsecretionandinhibitingtheexpressionofFlk-1 mRNAandprotein.
Keywords　LivistonachinensisR.Br.;Tumor;Activepart;Vascularendothelialgrowthfactor;Angiogenesis
＊通讯作者:李傲 ,男 ,博士研究生 ,主要研究方向为中药药理;Tel:13224081419, E-mail:ao livip@tom.com。
　　蒲葵子为棕榈科植物蒲葵 (Livistonachinensis
R.Br.)的种子 ,性平 ,味淡 、甘涩 ,具有抗癌的功效 。
临床上应用蒲葵子及其复方制剂治疗食道癌 、绒毛
膜上皮癌 、恶性葡萄胎 、白血病 、鼻咽癌等。有研究
表明蒲葵子的乙醇提取物具有较强的抗肿瘤作
用 〔1〕。为进一步明确蒲葵子抗肿瘤作用的活性部
位 ,本实验对蒲葵子醇提物进行了初步分离 ,体外筛
选抗肿瘤活性部位 ,并探讨其抗血管生成的作用机
制。
1　材料与方法
1.1　仪器　SUNRISE全自动酶标仪 (奥地利 Te-
can公司);CO2培养箱(2001-13,上海常思工贸有限
公司 );高速 冷冻 离心机 (eppendorfcentrifuge
5415D,德国);超低温冰箱(MDF-382E,日本三洋)。
·718· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.05.035
电泳及转膜装置(北京六一仪器厂);PCR仪(美国
Pharmaciabiotech公司);可见光 -紫外凝胶扫描分析
系统(美国 Bio-Rad公司)。
1.2　试剂　MTT(美国 Sigma公司);RPMI-1640培
养基及小牛血清(美国 Hyclone公司);DMSO(美国
Amresco公司);人 VEGFELISA试剂盒(博士德生
物工程有限公司);人 VEGF(深圳晶美生物工程公
司);ECL发光试剂盒 、鼠抗人 Flk-1抗体(美国 San-
taCruz公司);PVDF膜 (美国 Milipore公司 );总
RNA提取试剂盒(上海华舜生物工程有限公司);逆
转录试剂盒(美国 MBI公司);PCR试剂盒(大连宝
生物工程有限公司);RIPA蛋白提取试剂盒(上海
申能博彩生物科技有限公司);其余试剂为进口分
装或市售分析纯 。
1.3 　细胞株　人慢性粒细胞白血病细胞株 K562、
人卵巢癌细胞株 SKOV3、人结肠癌细胞株 HT-29、人
膀胱癌细胞株 T24、人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)
由重庆医科大学基础医学研究提供。
1.4 　药品制备　蒲葵子药材购于西南偏冷草药
行 ,经成都中医药大学万德光教授鉴定 ,为棕榈科蒲
葵(LivistonachinensisR.Br.)的种子 ,符合药用标
准 。取蒲葵子干燥药材粉碎后 ,用 95%乙醇回流提
取 3次 ,合并滤液 ,减压浓缩至无醇味 ,将浓缩液依
次用石油醚 、乙酸乙酯 、正丁醇萃取。各分离部位除
水溶性部位外 ,用 DMSO溶解配成 250、50、10 mg/L
的储备药液 。水溶性部位用培养基按上法配置成相
同浓度溶液 ,用时加入 RPMI-1640培养基中 (含药
培养基中 DMSO的体积分数为 0.1%)。
1.5　细胞培养　本实验所选细胞株均用含 10%小
牛血清的 RPMI-1640培养基 ,在 37℃ 、5%CO2条件
下培养 ,取对数生长期细胞用于实验 。
1.6 　MTT法检测蒲葵子醇提物各分离部位对肿瘤
细胞增殖的影响　人 SKOV3、HT-29、T24肿瘤细胞
用培养液稀释到 5×105 /ml, K562细胞用培养液稀
释到 106 /ml,按每孔 200 μl接种于 96孔培养板中 。
24 h细胞贴壁后去除培养基 ,实验组加入终浓度为
250、50、10 mg/L的含药培养基 ,溶剂对照组加入含
0.1%DMSO的培养基;另设细胞对照组 , 只加入
RPMI-1640培养基。每组均设 6个复孔 ,培养 48 h
后 ,吸净各孔内培养基 , 取上清液测定细胞分泌
VEGF水平 。各孔用 PBS清洗 1次后 ,按 200 μl/孔
加入无血清培养基及 20 μl/孔 MTT溶液(5 g/L)继
续培养 4 h。弃上清液 ,加入 150 μlDMSO溶解 ,振
荡混匀 。在自动酶标仪上 570 nm处检测吸光度
(A)值 ,用下式计算抑制率。
抑制率 =(细胞对照组平均 A值 -给药组平均 A值)/
细胞对照组平均 A值 ×100%。
1.7　ELISA法测定培养液上清液中 VEGF水平　
按 1.6项方法所获上清液 ,于 4 ℃、2000 r/min离心
10 min, Bradford法检测蛋白浓度 。另取 100 μl上
清液 ,按 ELISA试剂盒说明书操作 ,最后用酶标仪
于 450 nm读取吸光值 ,绘制标准曲线 ,计算细胞分
泌上清每 1 mg蛋白中的 VEGF含量 。
1.8 　RT-PCR检测蒲葵子乙酸乙酯分离部位对
HUVEC表达 Flk-1 mRNA的影响 　取贴壁生长的
HUVEC,共分为五组:给药组分别加入含乙酸乙酯
分离部位的培养基 ,浓度为 250、50、10 mg/L;另设
溶剂对照组和空白对照组 ,分别加入含 0.1%DMSO
培养基和单纯 RPMI-1640培养基 ,同时各组均加入
100 ng/mlVEGF进行诱导培养 。作用 48 h后 ,贴壁
细胞按试剂盒说明书提取总 RNA,以 5 μlRNA作
为模板进行逆转录 , PCR扩增 ,以 β-actin为内参照。
根据人 Flk-1、β -actin基因全序列 , Primer5.0软件
设计引物序列 。引物由上海英骏生物技术有限公司
合 成。 Flk-1 引 物 序 列:上 游 5′-ACAGTA-
AGCGAAAGAGCC-3′, 下 游 5′-GTTTGAGCCT-
TCAGATGC-3′, PCR产物长度 224 bp。 β-actin引物
序列:上游 5′-ACGAGACCACCTTCAACTCCATC-3′,
下游 5′-TAGAAGCATTTGCGGTGGACGA-3′, PCR产
物长度 307 bp。 PCR产物经 2.0%的琼脂糖凝胶电
泳后进行光密度扫描 ,将各组 Flk-1 mRNA扩增条
带与 β -actin条带的平均累积光密度值之比作为衡
量参数 ,分析 Flk-1 mRNA的表达。
1.9　Westernbloting检测蒲葵子乙酸乙酯分离部
位对 HUVEC表达 Flk-1蛋白的影响　细胞分组 、诱
导及处理同 1.8项 。 48 h后用 0.01 mol/LPBS冲
洗细胞 2次 ,裂解液裂解细胞 , 4 ℃、1.2 ×104 r/min
离心 30 min,取上清液 。 Bradford法检测上清液中
蛋白浓度 。加入等体积 2 ×SDS加样缓冲液(125
mmo/LTris-HCl, 20%甘油 , 0.01%溴酚蓝 , 4%
SDS, 200 mmol/LDTT),调整各组上样蛋白浓度一
致后 ,沸水浴中加热 5 min, SDS-聚丙烯酰胺凝胶电
泳 ,转膜 ,含 5%脱脂奶粉的 TBST封闭 1 h后 ,加入
Flk-1和内参 β -actin抗体 4 ℃孵育过夜 。TBST洗
涤 3次 ,加入辣根酶标记的二抗 , 37 ℃与膜孵育 1
h, TBST洗膜后用 ECL进行发光处理 。结果经 Bio-
Rad公司图像分析软件 QuantityOne4.4.0分析目
的和内参条带的平均累积光密度值 ,以目的与内参
条带比值作为衡量参数 ,分析 Flk-1蛋白的表达 。
1.10　统计学处理　计量资料结果以 x±s表示 ,
·719·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月
数据间差异比较采用 SPSS11.5统计软件包进行 ,
多组间差异比较采用单因素方差分析 。
2 　结果
2.1 　蒲葵子醇提物各分离部位对肿瘤细胞增殖的
影响　蒲葵子醇提物各分离部位中 ,以乙酸乙酯组
对肿瘤细胞生长的抑制作用最强 ,其最高抑制率可
达 86.52%;乙酸乙酯组对 HT-29和 T24肿瘤细胞
较敏感 ,而对其它肿瘤细胞的体外增殖无明显影响。
石油醚组虽表现与乙酸乙酯组相似的抑制作用和细
胞敏感性 ,但作用强度不及乙酸乙酯组 ,其最高抑制
率为 43.80%。正丁醇和水组对肿瘤细胞的增殖无
抑制作用 。见表 1。
　　表 1 　蒲葵子醇提物各分离部位对肿瘤细胞体外增殖的抑制率( x±s, n=6)
组别 浓度(mg/L) 抑制率(%)K562cel SKOV3cel HT-29cell T24cel
溶剂对照 - -1.27±4.23 　1.96±1.34 0.38±0.73 　4.38±3.08
石油醚 250 3.09±3.25 　3.68±0.68 43.80±2.22＊＊ 38.67±6.91＊＊
50 3.77±4.96 　0.45±0.64 23.90±1.10＊＊ 23.10± 3.54＊
10 4.05±7.45 　0.38±1.39 2.29±1.33 　5.45± 1.21
乙酸乙酯 250 5.36±6.35 　4.62±5.20 74.66±9.42＊＊ 86.52±16.67＊＊
50 4.68±6.17 -3.80±1.90 45.85±5.36＊＊ 43.96± 7.78＊＊
10 -1.04±1.25 　5.80±3.98 17.45±3.60＊ 19.4±5.68＊
正丁醇 250 -0.78±2.51 -1.82±2.34 -4.86±7.02 -2.17± 3.78
50 -1.09±2.08 -3.54±1.13 -3.10±1.85 -2.62± 2.04
10 -1.49±3.05 -2.42±1.42 1.31±3.46 -4.20± 1.26
水 250 -2.68±5.51 -2.80±5.34 1.17±5.95 -2.64± 6.36
50 -3.45±5.63 -3.45±2.12 -0.08±1.20 -4.58± 5.60
10 -1.98±1.01 -2.00±3.01 2.61±2.02 　0.90± 2.54
　　注:与溶剂对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01
2.2 　蒲葵子醇提物各分离部位对肿瘤细胞分泌
VEGF的影响　蒲葵子醇提物各分离部位中 ,乙酸
乙酯各浓度组均能明显降低肿瘤细胞分泌 VEGF水
平 ,与空白对照组比较 ,差异有显著或极显著性(P
<0.05或 P<0.01),且显示出剂量-效应依赖关系 。
石油醚高 、中剂量组也能在一定程度上降低各肿瘤
细胞分泌 VEGF水平(P<0.05),但低浓度组作用
不明显(P>0.05)。溶剂对照 、水及正丁醇组对肿
瘤细胞分泌 VEGF的水平无明显影响(P>0.05)。
见表 2。
　　表 2 　蒲葵子醇提物各分离部位对肿瘤细胞分泌 VEGF的影响( x±s, n=3)
组别 浓度(mg/L) VEGF含量(pg/mg· prot)K562cel SKOV3cel HT-29cell T24cel
溶剂对照 - 1094.45±43.78 1127.84±78.38 1143.94±42.98 1389.69±61.83
- 940.56±46.84 1018.13±94.96 961.08±71.32 1272.38±67.45
石油醚 250 705.68±31.88＊ 853.95±48.02＊ 696.87±77.88＊ 694.82±46.74＊
50 734.78±48.44＊ 916.63±44.35 841.94±78.58＊ 824.57±44.62＊
10 874.48±75.43 1106.96±71.33 954.36±55.90 1078.33±96.59
乙酸乙酯 250 566.09±74.18＊＊ 737.29±52.77＊＊ 339.16±18.90＊＊ 526.52±45.67＊＊
50 597.61±54.28＊＊ 797.05±79.03＊ 696.87±78.77＊＊ 614.25±54.23＊＊
10 852.16±78.38 807.34±42.62＊ 745.37±63.45＊ 844.43±42.39＊
正丁醇 250 978.81±89.64 1199.22±67.10 957.61±90.24 1057.94±78.40
50 967.63±79.18 1143.94±99.63 1029.54±82.54 1062.37±87.42
10 1131.49±69.26 1384.39±97.25 1289.69±98.20 1133.25±98.46
水 250 1044.94±74.18 1184.86±64.69 1060.54±78.96 1256.30±65.33
50 1252.73±87.62 1391.65±58.18 1199.22±67.15 1198.46±54.88
10 1048.40±45.93 1225.41±78.85 1044.71±85.41 1280.57±89.65
　　注:与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01。表 3同
·720· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月
2.3 　蒲葵子醇提物乙酸乙酯分离部位对 HUVEC
表达 Flk-1 mRNA和蛋白的影响　不同浓度的蒲葵
子醇提物乙酸乙酯分离部位作用 HUVEC48 h后 ,
可显著降低 VEGF诱导内皮细胞表达 Flk-1 mRNA
和蛋白的水平。其中高 、中剂量组表达 Flk-1 mRNA
和蛋白的水平均明显低于空白对照组 ,并且差异有
极显著性(P<0.01),低剂量组与对照组比较差异
有显著性(P<0.05),而溶剂对照组与空白对照组
比较无明显差异(P>0.05)。结果见图 1、2及表 3。
图 1　RT-PCR检测蒲葵子醇提物乙酸乙酯分离
部位对 HUVEC表达 Flk-1 mRNA的影响
M-Marker;1.空白对照组;2.溶剂对照组;3.蒲葵子乙酸乙
酯低剂量组;4.蒲葵子乙酸乙酯中剂量组;5.蒲葵子乙酸乙
酯高剂量组。图 2同
图 2　Westernblotting检测蒲葵子醇提物乙酸乙酯分
离部位对 HUVEC表达 Flk-1蛋白的影响
　表 3　　蒲葵子醇提物乙酸乙酯分离部位对 HUVEC
表达 Flk-1mRNA和蛋白的影响( x±s, n=6)
组别 剂量(mg/L) Flk-1/β -actinmRNA Flk-1/β -actin蛋白
空白 - 1.226±0.065 0.924±0.075
溶剂对照 - 0.833±0.045 0.844±0.120
低剂量 10 0.261±0.042＊＊ 0.435±0.080＊
中剂量 50 0.157±0.022＊＊ 0.369±0.128＊＊
高剂量 250 0.090±0.068＊＊ 0.291±0.150＊＊
3 　讨论
肿瘤的生长代谢 、转移和复发与其中的微血管
增生密切相关。无论原发性或转移性肿瘤 ,其持续
生长都必须依赖新生血管的形成。血管生成是肿瘤
新血管形成的必需机制 ,是指从原先存在的毛细血
管中以发芽或非发芽(套叠)的方式 ,产生新血管的
过程〔2〕。目前认为 VEGF是最重要的血管生成因
子 ,它作为内皮细胞特异性的有丝分裂原 ,刺激内皮
细胞增殖 ,促进血管形成 ,增加血管通透性 〔3〕。
Sartippour等发现蒲葵子水提物对多种肿瘤细
胞和内皮细胞的增殖有抑制作用〔4〕。但笔者在预
实验中发现 ,蒲葵子醇提物在抑制肿瘤细胞和内皮
细胞体外增殖方面 ,较水提物的效价强度更高 ,且呈
良好的剂量 -效应依赖性。为进一步筛选蒲葵子抗
肿瘤活性部位 ,分离蒲葵子中单体有效成分 ,本实验
首次将蒲葵子醇提物按溶剂极性大小进行萃取分
离 ,观察各极性部位对四类肿瘤细胞株分泌 VEGF
的影响。结果发现 ,不同浓度(250、50、10 mg/L)蒲
葵子醇提物乙酸乙酯部位作用各肿瘤细胞 48 h后 ,
细胞上清液中 VEGF含量均显著降低(P<0.05);
石油醚高剂量和部分中剂量组对各肿瘤细胞分泌
VEGF水平也有一定的抑制作用(P<0.05),提示这
两个部位均具有抗血管生成和抗肿瘤活性。而以相
同剂量观察其对肿瘤细胞的体外增殖情况 ,结果发
现 ,蒲葵子醇提物乙酸乙酯部位和石油醚部位仅对
结肠癌和膀胱癌癌细胞株的体外增殖有抑制作用 ,
而对卵巢癌和白血病细胞株没有显著影响。以上表
明蒲葵子对 VEGF的抑制作用并非通过抑制肿瘤细
胞增殖而产生 。
KDR/Flk-1是 VEGF的主要功能性受体 ,主要
分布于内皮细胞表面 , VEGF与 Flk-1结合后 ,激活
Raf/MEK/ERK通路 ,不同的是激活这条通路不是
由常规的 Ras,而是由蛋白激酶 C(PKC)实现的 〔5〕。
VEGF只有与 Flk-1 /KDR结合后 ,才能作为内皮细
胞特异性有丝分裂原诱导血管内皮细胞分化 、增生 、
迁移和浸润 ,毛细血管袢形成 ,进而促进体内新生血
管新生。黄才等已发现蒲葵子的醇提取物对 PKC
有强烈的抑制作用 〔6〕。本实验结果显示 ,蒲葵子醇
提取物的乙酸乙酯部位可抑制 VEGF诱导的血管内
皮细胞表达 Flk-1 mRNA和蛋白 ,与未给药的对照
组相比 ,差异有显著性(P<0.05),提示蒲葵子抗肿
瘤作用机制很可能通过降低肿瘤细胞分泌 VEGF,
抑制血管内皮细胞表达 VEGF受体 Flk-1 mRNA和
蛋白 ,从而干预 VEGF信号转导通路而实现。
最近有研究发现 ,经过柱色谱从蒲葵子醇提物
中分离得到的成分群 LC-X具有较强的蛋白激酶抑
制活性 ,并证实其抗肿瘤活性通过抑制 EGF/EGFR/
Ras/Raf/MAPK/ERK通路 ,从而阻止肿瘤细胞的恶
性生长与分化〔7〕。本实验结果也表明蒲葵子的抗
肿瘤血管生成活性 ,最终是通过抑制细胞外信号调
节激酶 1/2(ERK)来实现的 。蒲葵子这两种作用机
制的物质基础是否相同 ,有待对其有效部位纯化分
离后作进一步的研究。
·721·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月
参 考 文 献
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Cancerlett, 2007, 248(1):137-146.
(2007 -10-25收稿)
益智仁挥发油急性毒性实验及对帕金森小鼠
行为学和纹状体多巴胺含量的影响
黄　凌 1 ,朱　毅2 ,董　志 1＊ ,陈国彪 2 ,李　靖1 ,赵　锦 1
(1.重庆医科大学药理教研室 ,重庆 400016;2.海南省药品检验所 ,海南海口 570216)
　　摘要　目的:研究益智仁挥发油的急性毒性和对实验性帕金森小鼠行为学和多巴胺含量的影响。方法:急性
毒性用 Bliss法测算益智仁挥发油的 LD50;MPTP腹腔注射建立帕金森 C57BL小鼠模型 , 造模前 5 d开始灌胃给予
高 、中 、低剂量(2.5、0.833、0.278ml/kg)益智仁挥发油乳剂 ,连续 12 d, 其间进行小鼠游泳 、SMG-2水迷宫 、自主活
动行为学测试;12 d后断头取脑 , 用荧光分光光度法测定小鼠纹状体多巴胺含量。结果:益智仁挥发油乳剂 LD50 =
8.327 ml/kg, 95%的可信限为 7.037 ～ 10.060 ml/kg;游泳 、SMG-2水迷宫实验结果显示益智仁挥发油乳剂组与
MPTP模型组有显著性差异;多巴胺含量测定结果显示益智仁高 、中剂量(2.5、0.833ml/kg)组小鼠纹状体 DA的含
量明显高于模型组。结论:益智仁挥发油乳剂急性毒性较低 , 并对帕金森病小鼠行为学和多巴胺含量变化有显著
性影响。
关键词　益智仁;帕金森综合症;急性毒性;行为学;多巴胺
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)05-0722-05
基金项目:海南省自然科学基金资助项目(No.30629)作者简介:黄凌 ,女 ,硕士研究生 ,主要从事新药的研究与开发工作。＊通讯作者:董志 ,男 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事神经药理、中药药理和新药开发研究。
　　益智仁为姜科类植物益智 (AlpiniaOxyphyla
Miq.)的成熟干燥果实 ,是我国著名的四大南药之
一 。近年来 ,为了加快益智药材的开发 ,我国药学工
作者对其进行了较系统的研究。研究发现 ,以益智
仁为主的方剂在益智健脑方面的临床应用越来越
多 ,并且在动物实验中进一步证实益智仁具有良好
的脑保护作用 ,可用于老年性痴呆及其他智能障碍
类疾病的治疗 ,对神经细胞有抗氧化 、抗衰老 、减轻
兴奋性谷氨酸毒性和抗凋亡作用 〔1〕。本实验观察
益智仁挥发油的急性毒性 ,研究益智仁挥发油对帕
金森病(PD)小鼠行为学的干预作用 ,同时测定益智
仁挥发油对 PD小鼠纹状体多巴胺含量的影响 ,进
而对益智仁挥发油进行更广泛 、深入的研究 。
1　材料
1.1　药物 　干燥益智仁购于海南省万宁县益智
(GAP)种植与产业化开发示范基地 ,经海南省药品
检验所中药室鉴定为姜科类植物益智 (Alpinia
OxyphylaMiq.)的成熟果实 。药物的提取:参照文
献〔2, 3〕 ,采用水蒸气蒸馏法提取益智仁挥发油 ,即将
干燥益智仁粉碎为益智仁粉末(80目过筛),加 8倍
量蒸馏水 ,浸泡 6 h,蒸馏 6 ～ 8 h,得益智仁挥发油 ,
提取率为 0.4%。药物的配制:以吐温 80作为乳化
剂 ,益智仁挥发油与水按比例制成对应浓度乳剂 。
1.2　试剂　吐温 80;1-甲基-4-苯基 -1, 2, 3, 6-四氢
·722· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月