全 文 ： 2008, Vol. 29, No. 06 食品科学 ※分析检测350
RP-HPLC法测定不同芦荟中褪黑激素含量
王英娟1，步怀宇1，贾敬芬1,*，索志荣2
(1.西北大学生命科学学院，陕西 西安 710069；2.西北大学分析科学研究所，陕西 西安 710069)
摘 要：目的：建立测定芦荟组织中有效成分褪黑素的反相高效液相色谱分析方法，并用该方法测定不同品种的
芦荟组织。方法：以SymmetryC18(150mm×4.6mm，5.0μm)为色谱柱；甲醇:水 (1:1) 为流动相，流速为1.0ml/
min；检测波长为223nm，灵敏度为2.00 AUFS。结果：褪黑素浓度在2.0～200.0pg/ml (r=0.9892)范围内线性关
系良好，平均加样回收率为98.8%(n = 6)，RSD=1.13%。结果表明，利用 RP-HPLC法分析不同芦荟中褪黑激素
含量简便、易行。芦荟组织中褪黑素含量随品种、组织不同而不同，其中花高于同种的叶。库拉索芦荟中的褪
黑素含量远高于其它不同品种的芦荟的同类组织。
关键词：RP-HPLC；芦荟；褪黑素
RP-HPLC Analysis of Melatonin Content in Different Aloe Tissues
WANG Ying-juan1，BU Huai-yu1，JIA Jing-fen1,*，SUO Zhi-rong2
(1.College of Life Science, Northwest University, Xian 710069, China；
2.Institute of Analytical Science, Northwest University, Xian 710069, China)
Abstract ：Objective: To establish a sensitive RP-HPLC method for determining the content of the active ingredient-melatonin
in the different species of aloes and their tissues. Method: To make Making use of Symmetry C18 150 mm×4.6 mm, 5.0 μm)
as column, with the flow of carbinol: water in the ratio 1:1, at the flow rate 1.0 ml/min. The inspected wavelength is 223 nm with
sensitivity degree 2.00 AUFS. Result: The linear range for melatonin is perfect within 2.0～200.0 pg/ml (r=0.9892) with the
average recovery(n = 6) 98.8% and RSD 1.13%. The method is simple and easy for determinfim of the melatonin content in aloe.
The melatonin content varies in different species of aloes and their different tissues, and the content in the flower is higher than
that in the leaf of aloe. The content of melatonin in Aloe veraL. is the high st.
Key words：RP-HPLC；aloe；melatonin
中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)06-0350-03
收稿日期：2007-05-19
基金项目：国家自然科学基金项目(30671082)；陕西省自然科学基金项目(2007C104)；陕西省教育厅专项项目(06JK176)
作者简介：王英娟(1971-)，女，讲师，博士研究生，主要从事生物技术研究。E-mail：jyxwyj@126.com
*通讯作者：贾敬芬(1938-)，女，教授，硕士，主要从事细胞工程研究。E-mail：jiajf38@nwu.edu.cn
褪黑素( N-乙酰基-5-甲氧色胺，melatonin，MT)
最早发现于牛松果体[1]，是由松果体分泌的一种吲哚类
激素，除能改善睡眠外，对生殖、免疫、神经、心
血管、消化系统等均有作用，具有抗氧化、防衰老等
生物学作用[2]。后来发现，它不仅存在于脊椎动物，也
存在于无脊椎动物，藻类，真菌和细菌[3-5]。1995年首
次在植物中发现melatonin[6]。到目前为止，国内外关于
植物中褪黑激素的研究与动物比较资料还很少，较多集
中在检测方面，而在芦荟中少见利用高效液相色谱法
(HPLC)紫外检测的研究报道，因此探索出一种高回收率
的纯化方法和高灵敏度的检测手段，对后期植物中褪黑
激素的含量、功能研究十分重要。本实验旨在研究褪
黑素RP-HPLC 分析的基础上对木立芦荟(Aloe arborescens
Mill.)、中华芦荟(Aloe veraL. var. chinensis Berg.)、库
拉索芦荟(Aloe veraL.)、皂叶芦荟(Aloe saponaria Hawer)
和绿芦荟(Aloe greenii Bak.)五个品种的花和叶进行分析，
这对研究其它植物中的褪黑素具有参考价值。
1 材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
实验用2006年春季芦荟(植龄3～4年)叶和花，采
自西北大学生命科学学院果园。
褪黑激素标准品 Sigma公司；甲醇为色谱纯；无
水乙醇、正己烷等均为分析纯；实验用水为超纯水。
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Waters2695-2996型高效液相色谱仪、色谱柱
(SymmetryC18，150mm×4.6mm，5μm)；Eppendorf
离心机、1.5ml Eppendorf管、电热恒温水浴锅和微量
加样器。
1.2溶液配制
1.2.1供试品溶液
参考刘伟华等方法[7]进行褪黑素的微量提取：精密
称取100mg干重的芦荟组织，加入甲醇1.0ml，称重，
超声波(80Hz，45℃)提取30min后，再称重，用甲醇
补足重量，13000r/min离心取上清液0.5ml，再以色谱
甲醇稀释2倍，作为供试品溶液。
1.2.2对照品溶液
精密称取褪黑素标准品10.0mg，用微量加样器精确
取1ml甲醇 将其溶于1.5ml Eppendorf管中，再精确量
取0.1ml用0.9ml甲醇将其溶于1.5ml Eppendorf管中摇匀，
制成1.00mg/ml褪黑素对照品溶液，作为储备液，其他
不同浓度的对照品溶液由储备液精确稀释得到。
1.3色谱条件
SymmetryC18(150mm×4.6mm，5.0μm)色谱柱；流
动相为甲醇-水(1:1)，流速为1.0ml/min，柱温为常温；检
测波长为223nm，灵敏度为2.00AUFS，进样量为10μl。
2 结果与分析
2.1褪黑素色谱分析
褪黑素保留时间约为6.5min。褪黑素标准品及供试
样品的色谱图见图1。
2.2线性关系考察
精密移取1.2.2所配的褪黑素对照品溶液适量于
1.5ml Eppendorf管，用色谱甲醇稀释，配成褪黑素浓度
分别为2.0、10.0、50.0、100.0、150.0、200.0pg/ml的
系列浓度对照品溶液，将上述对照品溶液按色谱条件分
别平行测定3次(均进样10.0μl)，记录峰面积。以平均
峰面积Y对浓度C(pg/ml)进行线性回归，褪黑素回归方
程和相关系数分别为Y =149105X－28756，r =0.9892。
得知褪黑素含量在2.0～200.0pg/ml范围内线性关系良
好 。
2.3精密度实验
精密吸取褪黑素供试品溶液10.0μl，重复进样6次，
进行测定，褪黑素峰面积积分值的RSD为1.34%。
2.4稳定性实验
精确吸取褪黑素标品溶液10.0μl，分别于0、1.0、
2.0、4.0和8.0h进行测定，褪黑素峰面积积分值的RSD
为1.23%。
2.5重复性实验
精密称取100.0mg干重的库拉索芦荟叶粉6份，按
1.2.1操作制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，
褪黑素含量的RSD为1.28%。
2.6加样回收率实验
精密称量已测的含量的库拉索芦荟叶干粉50.0mg，
共6份，每份准确加入褪黑素对照品溶液(C=10.0ng/ml)
4μl，按1.2.1方法制备供试品溶液后，进行测定。褪
黑素的平均加样回收率为98.8%，RSD为1.13%。
2.7样品的测定
1. 库拉索芦荟(A. vera L.)；2. 木立芦荟(A. arborescens Mill.)；3 中华芦
荟(A. vera L. var. chinensis Berg.)；4. 皂叶芦荟(A. saponaria Hawer)；5.
绿芦荟(A. greenii Bak.)。
图2 不同品种芦荟组织的的褪黑素含量比较
Fig.2 Contents of melatonins in different tissue of different
species of aloe
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
1 2 3 4 5
叶
花
褪
黑
素
含
量
(
n
g
/
g
)
1
保留时间(min)
2.004.006.008.00
A
图1 对照品(A)和样品(B)RP-HPLC色谱图
Fig.1 HPLC chromatograms of reference standard (A) and
sample (B)
1
保留时间(min)
2.004.006.008.00
B
1.褪黑素。
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按1.2.1操作制备供试品溶液，进样10.0μl进行检测，
用回归方程计算。结果见图2。
3 讨 论
本研究直接以甲醇作为提取溶剂，未经皂化步骤，
减少了提取过程中褪黑素含量的消耗，使得褪黑素测试
含量更接近供试样品中实际含量。实验中虽然HPLC图
杂峰较多，但没有对褪黑素的主峰造成很大影响，而
且提取操作便利、节约。
在用RP-HPLC法紫外检测时，流动相的选择极为
重要。以甲醇-水混合液为流动相进行梯度洗脱后，并
对色谱条件进行优化，经实验最终采用甲醇-水 (1:1)混
合液为洗脱剂，检测波长为223nm；流速为1.0ml/min
时，褪黑素峰保留时间约为6.8min，主峰与杂质峰已清
晰地分开。
在本实验色谱条件下，本研究首次将芦荟不同组织
中的褪黑素与其他杂质分离后定量，结果表明芦荟组织
中褪黑素含量随品种不同，组织不同而发生变化：芦荟
花中的褪黑素含量均普遍高于同种的芦荟叶，约为同种
叶含量的3到6倍；而且在所选品种中，库拉索芦荟中
的褪黑素含量远高于其它不同品种的芦荟同类组织。
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