全 文 ：动力学改变、血凝异常等改变有关〔4〕。通过观察血
液流变学指标的测定，发现参麦皂苷注射液三个剂
量均有降低不同切变率时大鼠的全血粘度、血浆粘
度和还原粘度的作用，中、高剂量能延长凝血时间。
通过测定小鼠常压耐缺氧时间，显示参麦皂苷
注射液中、高剂量能延长小鼠常压耐缺氧时间(P ＜
0. 05) ，表明参麦皂苷能提高小鼠对缺氧的耐受能
力。
综上所述，参麦皂苷注射液有明显抗心肌缺血
作用，改善血液流变、降低心肌耗氧，具体作用机制
有待进一步探讨。
参 考 文 献
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忍冬木层孔菌醇提物对大鼠肝纤维化的影响
罗友成，汪鋆植* ，吴方方，张巧银，冯天艳，邹 坤，邓张双
(天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)/湖北省土家族医药研究所，湖北 宜昌 443002)
摘要 目的:观察忍冬木层孔菌醇提物对四氯化碳(CCl4)所致大鼠肝纤维化的影响。方法:腹腔注射 2 mL /kg
CCl4 橄榄油溶液制备大鼠肝纤维化模型。首次注射后分别灌胃给药相当于忍冬木层孔菌生药量 1. 0、0. 5 g /kg 的
乙醇提取物，1 次 /d，共 8 w。测定血清 AST、ALT、透明质酸及肝组织中羟脯氨酸水平;切片进行病理组织观察。结
果:与模型组比较，忍冬木层孔菌能降低血清 AST、ALT、透明质酸和肝组织中羟脯氨酸水平;病理学切片显示忍冬
木层孔菌醇提物能明显减轻 CCl4 引起的大鼠肝损伤及纤维化。结论:忍冬木层孔菌醇提物对 CCl4 致大鼠肝纤维
化有防治作用，作用机制可能与其降低透明质酸和羟脯氨酸含量有关。
关键词 忍冬木层孔菌;醇提物;桑黄;肝纤维化
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)08-1325-04
收稿日期:2012-09-14
作者简介:罗友成(1987-) ，男，在读硕士研究生，专业方向:天然产物活性评价;Tel:13487285315，E-mail:1070091171@ qq. com。
* 通讯作者:汪鋆植，Tel:0717-6397478，E-mail:wangjunzhi@ ctgu. edu. cn。
忍冬木层孔菌 Phellinus lonicerinus(Bond. )
Bond. et Sing 为土家族常用药，是药用真菌桑黄的
品种之一，收载于《湖北省中药材质量标准》(2009
年版)〔1〕。具有排毒软坚、活血止血、和胃止泻等功
效。主治症瘕积聚、淋病、崩漏带下、脾虚泄泻
等〔2〕。忍冬木层孔菌原包含于鲍姆木层孔菌中，近
年来，它从鲍姆木层孔菌中分离并独立成为木层孔
菌属的一个新种〔3〕。因此，有关忍冬木层孔菌的研
究较少。而桑黄常用品种火木层孔菌 Phellinus igni-
arius(L. :Fr. )Quél 和鲍姆木层孔菌 Phellinus bau-
mii Pilate具有抗肿瘤、降低血糖、血脂、抗肝纤维化
等多种药理活性，且对人体无毒，适于长期服用〔4-6〕。
本文研究忍冬木层孔菌乙醇提取物对大鼠肝纤维化
的影响，为其临床应用提供实验依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF 级雄性 Wistar 大鼠，体质量
(180 ± 20)g，购自湖北省疾病预防与控制中心，许
可证号:SCXK(鄂)2008-0005。
1. 2 药物与试剂 实验用忍冬木层孔菌采于湖北
宜昌，经中国科学院微生物研究所卯晓岚教授鉴定
为忍冬木层孔菌 Phellinus lonicerinus (Bond. )
Bond. et Sing，将忍冬木层孔菌粉碎，90%乙醇 80 ℃
回流提取 3 次，合并提取液旋转蒸发至无醇味，用蒸
馏水配成生含药每 1 g /mL 悬液储藏备用;秋水仙
碱，吉林省辉南辉发制药股份有限公司;橄榄油，上
海嘉里食品工业有限公司;四氯化碳(CCl4) ，天津
市恒兴化学试剂制造有限公司;AST、ALT、羟脯氨酸
试剂盒，购自南京建成生物工程研究所;透明质酸酶
联免疫试剂盒，药上海研吉生物科技有限公司提供
的美国 Ｒ＆D systems产品。
1. 3 主要仪器 Stat Fax-2100 型酶标仪，美国
Awareness 公司;DMＲ多功能显微镜及图像分析系统，
·5231·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 8 期 2013 年 8 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.08.033
德国 Leica公司;TP1020组织脱水机，德国 Leica公司。
2 方法
2. 1 动物造模与分组 参照并改良刘杰等〔7〕的造
模方法，选取雄性 Wister 大鼠 50 只，体质量(180 ±
20)g，将 50 只大鼠饲养于(25 ± 2)℃的恒温动物房
内，每天光照 12 h，喂饲正常饲料，自由饮水，3 d 后
按体质量采用随机分组法，将 50 只大鼠随机分为 5
组，正常对照组(等体积生理盐水)、模型组(等体积
生理盐水)、秋水仙碱组(0. 2 mg /kg)及忍冬木层孔
菌 1. 0、0. 5 g /kg 组。除正常对照组外各组大鼠均
采用腹腔注射 2 mL /kg 50% CCl4 橄榄油溶液的方
法造模，2 次 /w，共 8 w。正常对照组采用橄榄油代
替 50% CCl4 橄榄油溶液。开始造模后各组即以 2
mL /kg灌胃相应药物，共 8 w，每周称取 2 次体质量
以调整给药量。造模 14 d后，在各组大鼠的饮水中
加入 350 mg /L 的苯巴比妥以增加大鼠肝脏对 CCl4
的敏感度。
2. 2 样品获取和处理 大鼠处死前禁食 24 h，称
量体质量。采用乙醚麻醉后从股动脉处取血，然后
脱颈处死，迅速切取肝脏标本置于 4 ℃生理盐水中
充分洗涤，称量肝质量;取大鼠肝脏小叶，切取组织
块 5 mm × 5 mm × 2 mm，置 4%多聚甲醛中固定 24
h;另称取 0. 1 g 肝组织，置清洁的试管中用以测定
羟脯氨酸含量。血液自然凝结 30 min 后 2 000 r /
min离心 10 min，分离血清 － 20 ℃保存备用。
2. 3 血清生化指标的测定 血清 AST、ALT 的测
定参照改良赖氏法，按试剂盒说明书的具体步骤进
行测定;透明质酸的测定参照 ELISA 试剂盒说明书
的具体步骤进行测定。
2. 4 羟脯氨酸的测定 肝组织中羟脯氨酸含量的
测定按照试剂盒的说明书进行。
2. 5 组织病理学观察肝组织于 4%多聚甲醛固定
液中固定 24 h，用水冲洗后经梯度乙醇脱水，二甲苯
透明，进行石蜡包埋处理后切成 4 μm 厚的薄片，通
过苏木精-伊红染色、Masson三色染色观察忍冬木层
孔菌对肝纤维化大鼠的治疗作用。
2. 6 统计学处理 采用 SPSS 13. 0 统计软件对数
据处理。先进行数据的正态分布检验，方差齐性检
验，组间比较采用方差分析。计量数据用 珋x ± s 表
示，组间差异用单因素方差分析，多个样本均数间每
两个均数的比较采用 q 检验。P ＜ 0. 05 认为差异有
统计学意义。
3 结果
3. 1 忍冬木层孔菌醇提物对大鼠体质量增长及肝
指数的影响 与空白对照组比较，模型组大鼠体质
量显著降低(P ＜ 0. 01) ;忍冬木层孔菌醇提物组大
鼠体质量有一定增长，与模型组比较差异显著(P ＜
0. 01) ，秋水仙碱组大鼠体质量增长与模型组比较
无显著性差异。与空白对照组比较，模型组肝脏指
数显著升高(P ＜ 0. 01) ;与模型组比较，忍冬木层孔
菌醇提物 1 g /kg 组大鼠肝脏指数显著下降(P ＜
0. 01)。见表 1。
表 1 忍冬木层孔菌醇提物对大鼠体质量
增长及肝脏指数的影响(珔x ± s)
组别 剂量(mg /kg) n /只
体质量增长
/ g
肝脏指数
/%
正常对照组 － 10 93. 1 ± 8. 5 2. 6 ± 0. 1
模型组 － 6 － 3. 8 ± 9. 3## 3. 5 ± 0. 2##
忍冬木层孔菌组 1000 10 41. 0 ± 4. 9＊＊ 3. 0 ± 0. 1＊＊
500 9 28. 9 ± 11. 7＊＊ 3. 4 ± 0. 1
秋水仙碱组 0. 2 6 － 13. 1 ± 3. 2 3. 4 ± 0. 1
注:与正常对照组比较，##P ＜ 0. 01;与模型组比较，＊＊P ＜ 0. 01
3. 2 忍冬木层孔菌对大鼠血清 AST、ALT 的影响
与空白对照组比较，模型组大鼠血清 ALT、AST活
性显著升高(P ＜ 0. 01) ;与模型组比较，忍冬木层孔
菌醇提物组大鼠血清 AST、ALT 活性均显著降低(P
＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01)。见表 2。
表 2 忍冬木层孔菌醇提物对大鼠血清
AST、ALT的影响(珔x ± s)
组别 剂量
/
(mg /kg)n /只
ALT/
(U/L)
AST /
(U/L)
正常对照组 － 10 12. 32 ± 6. 04 12. 86 ± 2. 35
模型组 － 6 49. 57 ± 3. 52## 44. 30 ± 14. 97##
忍冬木层孔菌组 1000 10 27. 91 ± 7. 57＊＊ 24. 57 ± 4. 46＊＊
500 9 32. 17 ± 2. 08＊＊ 31. 65 ± 5. 61＊＊
秋水仙碱组 0. 2 6 25. 19 ± 4. 41＊＊ 21. 39 ± 6. 01＊＊
注:与正常对照组比较，##P ＜ 0. 01;与模型组比较，＊＊P ＜ 0. 01
3. 3 忍冬木层孔菌对大鼠肝组织羟脯氨酸和血清
透明质酸的影响 与正常对照组比较，模型组大鼠
肝组织中羟脯氨酸含量和血清中透明质酸含量均升
高(P ＜ 0. 01) ;与模型组比较灌服忍冬木层孔菌醇
提物后大鼠肝组织中羟脯氨酸含量和血清中透明质
酸含量降低(P ＜ 0. 01)。见表 3。
表 3 忍冬木层孔菌醇提物对大鼠肝组织羟脯氨酸
和血清透明质酸的影响(珔x ± s)
组别 剂量
/
(mg /kg)n /只
羟脯氨酸 /
(μg /pro)
透明质酸 /
(ng /L)
正常对照组 － 10 247 ± 46 30. 34 ± 5. 47
模型组 － 6 663 ± 90## 59. 18 ± 4. 18##
忍冬木层孔菌组 1000 10 320 ± 54＊＊ 38. 16 ± 8. 94＊＊
500 9 405 ± 87＊＊ 45. 54 ± 5. 94＊＊
秋水仙碱组 0. 2 6 517 ± 105 41. 60 ± 7. 33＊＊
注:与正常对照组比较，##P ＜ 0. 01;与模型组比较，＊＊P ＜ 0. 01
3. 4 忍冬木层孔菌对肝组织病理变化的影响
3. 4. 1 忍冬木层孔菌对大鼠肝组织病变程度的影
·6231· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 8 期 2013 年 8 月
响:正常对照组肝组织结构正常，肝细胞排列整齐有
序，无明显病变部位;模型组可见坏死病灶，肝组织
结构发生变化，形成完整的假小叶，肝细胞排列混
乱，失去了正常肝组织所具有的放射状排列;忍冬木
层孔菌醇提物能减轻肝组织病变程度，肝细胞坏死
减少，纤维化程度减轻。见图 1。
3. 4. 2 忍冬木层孔菌对大鼠肝组织纤维化程度的
影响:采用计算机软件和 DMＲ 显微图像分析系统
对各组大鼠肝脏切片进行胶原沉积面积积分，可见
正常对照组只有微量的胶原沉积，模型组大鼠的胶
原沉积严重，与空白对照组比较差异显著(P ＜
0. 01) ;与模型组比较，忍冬木层孔菌醇提物能显著
减少大鼠肝组织中胶原的沉积(P ＜ 0. 01)。见图 2。
4 讨论
肝纤维化是多种慢性肝病发展为肝硬化的前期
阶段，如不予有效治疗，可最终进展为肝硬化，甚至
肝癌。研究表明肝纤维化进程是可逆的，因此，预防
和治疗肝纤维化是防治肝硬化的重要有效途径〔8〕。
为此，寻找安全有效的抗肝纤维化药物对于防治慢
性肝病具有重要意义。
图 1 忍冬木层孔菌醇提物对大鼠肝组织病变程度的影响(HE，×100)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. 忍冬木层孔菌 1 g /kg组 D. 忍冬木层孔菌 0. 5 g /kg组 E. 秋水仙碱组
图 2 忍冬木层孔菌对大鼠肝组织纤维化程度的影响(Masson，×100)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. 忍冬木层孔菌醇提物 1 g /kg组 D. 忍冬木层孔菌醇提物 0. 5 g /kg组 E. 秋水仙碱组
F. 各组大鼠肝组织切片胶原面积积分统计结果
注:与正常对照组比较，##P ＜ 0. 01;与模型组比较，＊＊P ＜ 0. 01
·7231·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 8 期 2013 年 8 月
肝纤维化与肝细胞的损伤密切相关，肝细胞损
伤是肝纤维化的启动因素，当肝脏受致病因子刺激
时，细胞膜通透性增高以及线粒体受到损伤，AST、
ALT会被大量释放进入血液，血液中 AST、ALT水平
的高低与肝细胞受损的程度一致。本实验结果显示
注射 CCl4橄榄油溶液后，模型组大鼠血清中 AST、
ALT 水平升高，表明大鼠肝细胞损伤。忍冬木层孔
菌能降低血清中 AST、ALT水平，说明忍冬木层孔菌
醇提物能够减轻 CCl4 造成的肝细胞损伤，对肝脏有
良好保护作用。
肝纤维化的实质是各种肝细胞损伤导致肝星状
细胞的激活，激活的肝星状细胞能够大量分泌细胞
外基质，沉积在肝组织中的细胞外基质促进肝纤维
化发生发展〔9〕。羟脯氨酸是构成细胞外基质中胶
原组织的主要成分，是胶原特有的氨基酸，是衡量组
织中胶原含量的特异性指标之一〔10〕。激活的肝星
状细胞也使富含透明质酸的非胶原性细胞外基质合
成增多，促使肝纤维化的形成和加重，透明质酸的增
高与肝脏病变的严重程度呈正相关，是指示肝纤维
化程度和监测治疗肝纤维化药物疗效的理想指标之
一〔11〕。采用羟脯氨酸、透明质酸含量的测定来反映
肝脏纤维化增生的程度以及忍冬木层孔菌对肝纤维
化的抑制作用。在注射 CCl4橄榄油溶液后，模型组
大鼠羟脯氨酸、透明质酸含量升高，说明肝组织细胞
外基质合成与分泌的上调。忍冬木层孔菌能降低羟
脯氨酸、透明质酸的含量，说明忍冬木层孔菌醇提物
能够减少肝星状细胞的活化，下调细胞外基质的合
成与分泌，对肝纤维化的进程具有良好的拮抗作用。
综上所述，忍冬木层孔菌醇提物对 CCl4 所致的
肝纤维化有较好的治疗作用，能明显减轻肝组织的病
变与胶原沉积，与秋水仙碱比较能更好的改善大鼠的
生存状况，增强大鼠的体质及抗病能力，降低大鼠的
病死率。显示忍冬木层孔菌不仅具有抑制肝纤维化
的活性，还具有低毒特点，具有良好的开发应用前景。
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558-563.
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元) ，1998 年(精装 100 元) ，1999 年(精装 100 元) ，2000 年(精装 150 元) ，2001 年、2002 年、2003 年、2004 年
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