全 文 ：GC法同时测定荜澄茄挥发油中 6种成分的含量
张加 ,陈晓辉＊ ,张迪 ,谢普 ,毕开顺
(沈阳药科大学 药学院 ,沈阳 110016)
摘要　目的:建立同时测定不同产地荜澄茄挥发油中 α-蒎烯 、β -蒎烯 、月桂烯 、柠檬烯 、6-甲基 -5-庚烯 -2-酮和柠檬醛
6种成分含量的气相色谱法。方法:采用水蒸气蒸馏法进行挥发油的提取 ,采用毛细管气相色谱法对挥发油中 6种成分进行
含量测定。气相色谱条件:DB-17石英毛细管色谱柱(30 m×0.25mm×0.25μm);氢火焰离子检测器(FID);进样口温度为
230℃;检测器温度为 250℃;升温程序为起始温度 50 ℃,以 2 ℃· min-1升至 80℃, 再以 10 ℃· min-1升至 240 ℃, 保持 10
min;载气为氮气 , 流速为 1.2 mL· min-1;进样方式为分流进样 , 分流比为 10∶1;进样量为 1 μL。结果:α-蒎烯 、β -蒎烯 、月
桂烯 、柠檬烯 、6-甲基 -5-庚烯 -2 -酮和柠檬醛的线性范围分别为 0.0183 ～ 0.91 mg· mL-1(r=0.9999), 0.0099 ～ 0.496
mg· mL-1(r=0.9999), 0.0096 ～ 0.478mg· mL-1(r=0.9999), 0.101 ～ 5.06 mg· mL-1(r=1.0), 0.095 ～ 4.73 mg· mL-1(r
=0.9999)和 0.146 ～ 7.35 mg· mL-1(r=0.9999);平均回收率(n=9)分别为 96.8% ～ 101.2%(RSD=3.1%), 96.1% ～
102.6%(RSD=3.2%), 97.6% ～ 103.0%(RSD=3.3%), 99.9% ～ 100.9%(RSD=1.4%), 98.9% ～ 99.6%(RSD=1.7%)和
96.6% ～ 99.7%(RSD=2.6%)。结论:本方法简单 、准确 、可靠 ,可作为该药材质量控制的指标。
关键词:荜澄茄挥发油;α-蒎烯;β -蒎烯;月桂烯;柠檬烯;6-甲基 -5-庚烯 -2-酮;柠檬醛;气相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)03-0424-04
GCsimultaneousdeterminationofsixcomponents
inLitseacubebavolatileoil
ZHANGJia, CHENXiao-hui＊ , ZHANGDi, XIEPu, BIKai-shun
(SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
Abstract Objective:TodevelopaGCmethodforsimultaneousdeterminationofα-pinene, β -pinene, myrcene,
limonene, methyl-heptenoneandcitralinLitseacubeba(Lour.)Pers.Method:Theessentialoilwasextractedby
steamdistilation.GCmethodwasappliedfordeterminationofthe6components.Chromatographicconditions:DB-
17(30 m×0.25mm×0.25μm)wasused;ThedetectorwasFID;Inlettemperaturewas230℃;Thedetectortem-
peraturewas250℃;Temperatureprogrammedfrom50℃ to80 ℃at2℃· min-1 , andthenprogammedto240℃
at10℃·min-1 andkeptfor10min;Caryinggaswasnitrogen, andtheflowratewas1.2 mL· min-1;Splitradio
was10∶1;Injectionvolumewas1 μL.Result:Thelinearrangesforα-pinene, β -pinene, myrcene, limonene,
methyl-heptenoneandcitralwere0.0183-0.91mg· mL-1(r=0.9999), 0.0099-0.496mg·mL-1(r=0.
9999), 0.0096-0.478mg· mL-1(r=0.9999), 0.101-5.06mg·mL-1(r=1.0), 0.095-4.73mg·mL-1
(r=0.9999)and0.146-7.35 mg·mL-1(r=0.9999);Theaveragerecoveries(n=9)ofα-pinene, β -pi-
nene, myrcene, limonene, methyl-heptenoneandcitralwere96.8% -101.2%(RSD =3.1%), 96.1%-102.
6%(RSD=3.2%), 97.6%-103.0%(RSD=3.3%), 99.9%-100.9%(RSD=1.4%), 98.9%-99.6%
(RSD =1.7%)and96.6%-99.7%(RSD=2.6%), respectively.Conclution:Themethodissimple, accurate
andreliable.ItcanbeusedforthequalitycontrolofLitseacubeba(Lour.)Pers.
Keywords:Litseacubebavolatileoil.;α-pinene;β -pinene;myrcene;limonene;6-methyl-heptenone;citral;GC
荜澄 茄系 樟科 植物 山鸡 椒 Litseacubeba (Lour.)Pers.的干燥成熟果实 ,有温中散寒 、行气止
—424— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(3)
＊ 通讯作者　Tel:13840332886
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.03.016
痛之功效 ,用于胃寒呕逆 、脘腹冷痛 、寒疝腹痛 、寒湿
郁滞 、小便浑浊等症 [ 1] 。现代药理学研究证实荜澄
茄挥发油有抗菌 、抗炎 、抗过敏 、平喘 、治疗冠心病和
心肌梗塞等作用 [ 2, 3] 。挥发油是荜澄茄主要成分 ,
其中柠檬醛具有抗菌等活性 [ 4] ;蒎烯具有抗氧化 、
抗衰老作用 [ 5] ;月桂烯可以抑制细菌和人类细胞的
基因突变[ 6] ;柠檬烯对多种肿瘤就有预防和治疗作
用 ,是一种具有抗癌活性的天然化合物 [ 7 ～ 9] ;6-甲
基 -5-庚烯 -2-酮具有很强的化学反应能 ,是医
药 、香精和香料合成的重要中间体 [ 10] 。但目前尚未
见 α-蒎烯 、β -蒎烯 、月桂烯 、柠檬烯 、6-甲基 -5
-庚烯 -2-酮和柠檬醛 6种成分同时定量分析的
相关报道。为了对荜澄茄药材进行更全面的质量控
制 ,本文采用气相色谱法同时测定荜澄茄挥发油中
α-蒎烯 、β -蒎烯 、月桂烯 、柠檬烯 、6 -甲基 -5-
庚烯 -2-酮和柠檬醛的含量 ,可作为该药材质量控
制的指标。
1　仪器与试剂
Agilent6890N毛细管气相色谱仪;氢火焰离子
检测器(FID)HPCORE色谱工作站 。 AB135-S十
万分之一天平 (METTLERTOLEDO仪器有限公
司)。α-蒎烯对照品(含量 >96%,上海友思生物
技术公司)、β -蒎烯对照品(含量 >96%,上海友
思生物技术公司)、月桂烯对照品(含量 >96%,上
海友思生物技术公司)、柠檬烯对照品 (含量 >
96%, ACROSORGANICS)、6 -甲基 -5-庚烯 -2
-酮对照品(含量 >98%,北京百灵威化学试剂有
限公司)、柠檬醛对照品(含量 >98%,北京百灵威
化学试剂有限公司)、正十一碳烯对照品(含量 >
99.5%, SigmaAldrich公司)。正己烷为色谱纯 ,无
水硫酸钠为分析纯。药材购自广西 、浙江 、四川 、福
建等地 ,经沈阳药科大学药用植物教研室孙启时教
授鉴定为正品 。样品的预处理:样品粉碎过 40目
筛 ,置广口瓶中 ,干燥阴凉处密闭保存 。
2　溶液的配制
对照品溶液:分别取对照品 α-蒎烯 、β -蒎烯 、
月桂烯 、柠檬烯 、6-甲基 -5-庚烯 -2-酮和柠檬
醛适量 ,精密称定 ,置 10 mL量瓶中 ,加正己烷稀释
至刻度 ,摇匀 , 配成 6种成分浓度分别为 1.829,
0.992, 0.956, 10.13, 9.47, 14.61 mg· mL-1的混合
对照品溶液 。
内标溶液:取正十一碳烯适量 ,精密称定 ,置 25
mL量瓶中 ,加正己烷稀释至刻度 ,摇匀 ,配成浓度为
2.528 mg·mL-1的内标溶液 。
供试品溶液:取各批预处理过的药材约 20 g,精
密称定 ,按中国药典 2005年版(一部)附录 XD甲
法提取各样品的挥发油 [ 11] ,加适量无水硫酸钠脱
水 ,振摇 ,静置 ,过夜 。将脱水后的挥发油置 10 mL
量瓶中 ,精密加入内标溶液 0.3 mL,加正己烷稀释
至刻度 ,摇匀 ,备用 。
3　色谱条件
色谱柱:DB-17　石英毛细管色谱柱(30m ×
0.25 mm ×0.25 μm);检测器:FID;进样口温度:
230 ℃;检测器温度:250 ℃;升温程序:起始温度为
50 ℃,以 2 ℃· min-1升至 80 ℃, 再以 10 ℃·
min-1升至 240 ℃,保持 10 min;载气:氮气 ,流速:
1.2 mL·min-1;进样方式:分流 ,分流比:10∶1;进样
量:1μL。理论塔板数按 α-蒎烯计算大于 30000,
在上述色谱条件下 ,对照品和样品色谱图见图 1。
图 1　对照品(A)和广西Ⅲ样品(B)色谱图
Fig1　Chromatogramsofreferencesubstances(A)andsamplefrom
GuagnxiⅢ(B)
1.α-蒎烯(α-pinene)　 2.β -蒎烯(β -pinene)　 3.月桂烯(myr-
cene)　4.柠檬烯(limonene)　 5.正十一碳烯(内标)(11-unde-
cene)6.6-甲基 -5-庚烯 -2-酮(6-methyl-heptenone)　 7.柠
檬醛 a和 b(citralaandb)
4　方法学考察
4.1　线性关系考察　分别精密量取混合对照品溶
液 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 mL, 内标溶液 0.3
mL,置 10 mL量瓶中 ,加正己烷稀释至刻度 ,摇匀 ,
得系列对照品溶液 ,分别注入气相色谱仪 ,记录各色
谱峰面积 。分别以对照品溶液浓度(mg· mL-1)为
横坐标(X),以对照品与内标峰面积的比值为纵坐
标(Y),绘制标准工作曲线 。 α-蒎烯 、β -蒎烯 、月
桂烯 、柠檬烯 、6-甲基 -5 -庚烯 -2-酮和柠檬醛
进样浓度分别在 0.0183 ～ 0.91 mg· mL-1 , 0.0099
～ 0.496 mg· mL-1 , 0.0096 ～ 0.478 mg· mL-1 ,
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0.101 ～ 5.06 mg· mL-1 , 0.095 ～ 4.73 mg·
mL-1 , 0.146 ～ 7.35 mg· mL-1范围内呈良好线性
关系 ,曲线方程分别为:
Y1 =4.267X1 -0.0217　　　r=0.9999
Y2 =4.828X2 -0.0132 r=0.9999
Y3 =3.676X3 -0.0077 r=0.9999
Y4 =4.721X4 -0.0741 r=1.0
Y5 =3.706X5 -0.0921 r=0.9999
Y6 =3.489X6 +0.1035 r=0.9999
4.2　精密度试验　取对照品溶液在上述色谱条件
下连续进样 6次 ,以 α-蒎烯 、β -蒎烯 、月桂烯 、柠
檬烯 、6-甲基 -5-庚烯 -2-酮和柠檬醛与内标的
峰面积比值计算 α-蒎烯 、β -蒎烯 、月桂烯 、柠檬
烯 、6-甲基 -5-庚烯 -2-酮和柠檬醛的 RSD分
别为 1.0%, 0.8%, 0.9%, 0.6%, 0.7%, 0.6%。
4.3　重复性试验　将同一批荜澄茄样品(广西 Ⅲ)
6份 ,按 “ 2”项下方法制备供试品溶液 ,在上述色谱
条件下分析 ,计算 α-蒎烯 、β -蒎烯 、月桂烯 、柠檬
烯 、6-甲基 -5-庚烯 -2-酮和柠檬醛含量的平均
值分别为 27.54, 13.31 , 28.06, 102.3, 199.5, 303.4
μg· g-1;RSD分别为 3.9%, 2.8%, 1.9%, 1.8%,
1.6%, 0.6%。
4.4　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别在 0,
2, 4, 8, 12, 24h按上述色谱条件测定 ,以 α-蒎烯 、β
-蒎烯 、月桂烯 、柠檬烯 、6-甲基 -5-庚烯 -2-酮
和柠檬醛与内标的峰面积比值计算 RSD结果分别
为 2.3%, 1.8%, 1.6%, 1.1%, 1.6%, 2.5%。结果
表明 ,供试品溶液在 24h内稳定 。
4.5　回收率试验　称取已知含量的荜澄茄样品
(广西 Ⅲ)约 10g共 9份 ,按低 、中 、高浓度分别精密
加入 α-蒎烯 、β -蒎烯 、月桂烯 、柠檬烯 、6-甲基 -
5-庚烯 -2 -酮和柠檬醛对照品 ,每一浓度 3份。
按照 “2”项下方法制备供试溶液 ,在上述色谱条件
下进样 ,计算回收率 ,结果见表 1。
表 1　回收率试验结果(n= 9)
Tab1　Determinationresultsofrecoveries
成分(compound) 已知量(original)/mg
测定量
(found)/mg
加入量
(add)/mg
平均回收率
(recovery)/%
RSD
/%
α-蒎烯(α-pinene) 0.252 0.384 0.131 101.2
0.252 0.506 0.263 96.8 3.1
0.247 0.641 0.394 99.8
β -蒎烯(β-pinene) 0.124 0.184 0.061 98.4
0.124 0.241 0.122 96.1 3.2
0.122 0.309 0.183 102.6
月桂烯(myrcene) 0.248 0.357 0.107 101.1
0.248 0.458 0.215 97.6 3.3
0.244 0.576 0.322 103.0
柠檬烯(limonene) 0.95 1.46 0.506 100.8
0.95 1.96 1.01 100.4 1.4
0.93 2.45 1.52 99.9
6-甲基 -5-庚烯-2-酮 1.83 2.76 0.94 98.9
(6-methyl-heptenone) 1.82 3.70 1.88 99.6 1.7
1.79 4.58 2.82 98.9
柠檬醛 a和b(citralaandb) 2.32 3.54 1.23 99.7
2.31 4.69 2.46 96.7 2.6
2.28 5.84 3.69 96.6
5　样品测定
取不同产地荜澄茄药材约 20 g,精密称定 ,按
“ 2”项下方法制备供试品溶液 ,在上述色谱条件下
进行分析 ,用内标对比法计算荜澄茄中 α-蒎烯 、β
-蒎烯 、月桂烯 、柠檬烯 、6-甲基 -5-庚烯 -2-酮
和柠檬醛的含量 ,测定结果见表 2。
6　讨论
6.1　色谱条件的考察 本研究考察了 DB-1、HP
-5、DB-17 3根不同型号的石英毛细管柱 ,结果表
明 DB-17石英毛细管柱能够将待测组分实现良好
的分离。本研究曾尝试从起始温度 70 ℃以 5 ℃·
min-1升至 240 ℃,结果发现低沸点组分无法完全分
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离 ,而高沸点组分保留时间过长;改用起始温度为
50 ℃,以 2 ℃· min-1升至 80 ℃, 再以 10 ℃·
min-1升至 240 ℃后 ,各待测组分分离度良好 。
表 2　不同产地荜澄茄药材中 6种挥发性成分的含量测定结果(μg· g-1 , n= 3)
Tab2　Contentsof6 volatilefractionsindifferentsamplesofLitseacubeba(Lour.)Pers.
产地(origins) α-蒎烯(α-pinene)
β -蒎烯
(β -pinene)
月桂烯
(myrcene)
柠檬烯
(limonene)
甲基庚烯酮
(6-methyl-heptenone)
柠檬醛
(citralaandb)
四川(Sichuan) 18.69 7.360 11.96 55.64 175.8 334.0
广东(Guangdong) 348.0 223.9 23.35 1419 235.5 363.0
云南(Yunnan) 18.30 10.12 14.75 90.04 208.8 3623
福建(Fujian) 129.9 118.8 63.99 587.9 272.9 2968
湖南(Hunan) 74.06 43.93 6.050 250.0 94.9 182.8
浙江(Zhejiang) 146.0 104.6 31.08 634.3 120.7 1808
江苏(Jiangsu) 104.7 68.67 7.020 483.3 118.9 170.0
江西(Jiangxi) 217.9 131.7 22.43 642.2 155.6 371.9
广西Ⅰ (GuangxiⅠ ) 104.8 89.3 27.43 255.1 193.7 252.5
广西Ⅱ(GuangxiⅡ) 72.31 62.97 22.53 193.3 178.3 238.6
广西Ⅲ(GuangxiⅢ) 25.54 12.79 27.93 101.6 197.8 304.6
广西Ⅳ(GuangxiⅣ) 34.72 20.01 11.11 150.6 107.1 110.0
湖北Ⅰ (HubeiⅠ ) 99.9 65.28 34.69 388.2 155.7 659.1
湖北Ⅱ(HubeiⅡ) 165.3 109.6 60.22 607.8 221.8 1986
6.2　提取条件考察 本研究采用水蒸气蒸馏法 ,考
察了 2, 3, 4h不同提取时间对提取效率的影响 ,结
果表明 3h与 4h提取效率差异不大 ,故选择提取时
间为 3 h。对提取溶剂的倍量(5, 10, 15倍)进行考
察 ,结果表明 , 10倍提取溶剂提取效率较高。
6.3　小结 本研究收集了 14批不同产地的荜澄茄
样品 ,采用 GC法同时对 α-蒎烯 、β -蒎烯 、月桂
烯 、柠檬烯 、6-甲基 -5-庚烯 -2 -酮和柠檬醛进
行了含量测定 ,测定结果表明:不同产地荜澄茄中该
6种成分含量差异很大。因此 ,对荜澄茄建立全面 、
有效的质量控制方法是十分必要的。
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