免费文献传递   相关文献

魔芋试管微球茎繁殖技术研究



全 文 :ChineseAgriculturalScienceBuletinVol.23No.92007September
htp:/www.casb.org.cn
农业生物技术科学
魔芋(Amorphophalus)为天南星科魔芋属多年生
草本植物,是迄今发现的唯一能大量合成葡苷聚糖
(konjacglucomanna)的植物。因葡苷聚糖具有良好的胶
溶性、凝胶性、成膜性及与其它植物胶的优良复配性等
优点而在食品、医药、化工等工业生产中具有广泛的应
用。因此,魔芋的开发利用具有良好的经济和环保意
义[1~5]。随着魔芋加工业的发展,对魔芋原料的需求不
断增加,带动了魔芋种植业的迅猛发展[6,7]。但当前限制
魔芋试管微球茎繁殖技术研究
顾玉成 1,吴金平 1,2,宋志红 1,向发云 1,曾祥国 1,胡中立 2
( 1湖北省农业科学院经济作物研究所,武汉 430064;2武汉大学生命科学院,武汉 430072)
摘 要:针对目前魔芋生产存在种芋繁殖系数低的问题,研究可用于大规模生产魔芋试管微球茎的诱
导技术。实验通过3种不同方法切割魔芋愈伤组织分化的幼苗,分别置入不同激素配比的4种培养基
中培养。培养基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖6%和MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L+
蔗糖 6%适合愈伤组织的形成和不定芽的分化。培养基 1/2MS+NAA0.08mg/L+蔗糖 6%和
1/2MS+BA0.8mg/L+蔗糖 6%适合叶柄基部带愈伤组织的幼苗生根培养,其中 1/2MS+NAA0.08
mg/L+蔗糖6%的培养基适合叶柄基部带少量愈伤组织的幼苗诱导微球茎,将形成的微球茎,从叶柄
基部撇断,可看到微球茎上有芽点。通过研究发现魔芋试管微球茎的形成不仅与培养基的组成有关,还
与叶柄基部的切割方式有关。
关键词:魔芋;愈伤组织;试管微球茎
中图分类号:S-031 文献标识码:A
StudyonProgenitiveTechnologyofTest-tubeMicro-bulbodiumofAmorphophaluskonjac
GuYucheng1,WuJinping1,2,SongZhihong1,XiangFayun1,ZengXiangguo1,HuZhongli2
(1IndustrialCropsInstituteofHubeiAcademyofAgriculturalSciences,Wuhan430064;
2WuhanUniversityofColegeofLifeSciences,Wuhan430072)
Abstract:ThequestionofthelowpropagationcoeficientintheproductionofAmorphophalusatpresent,
theresearchmayuseinthelargescaleproductioninductiontechnologyfortest-tubemicro-bulbodium.
Thisexperimentcuttotheseedlingforcalusdiferentiationthroughthreediferentmethods,separatelyset-
tinginthediferenthormonealocatedproportionfourkindofculturemedium.Resultsshowedthatcalus
wasinducedanddiferentiatedinmediaconsistedofMS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+6%sucrose
andMS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L+6%sucrose.1/2MS+NAA0.08mg/L+6%sucroseand1/2MS+
IBA0.8mg/L+6%sucrosewerefitforthebaseofthestemwithsomecalusforrooting,and1/2MS+
NAA0.08mg/L+6%sucrosewassuitableforthebaseofthestemwithlitlecalustoinducemicro-bul-
bodium,breakingfromthebaseofstem,thereisthebudspotasthemicro-bulbodium.Itwasdiscovered
thattheformationoftest-tubeMicro-bulbodiumnotonlywiththeculturemediumcompositionrelated,but
alsowiththewayofcutingfortheseedlingbase.
Keywords:Amorphophalus,Calus,Test-tubeMicro-bulbodium
基金项目:湖北省“ 十一五”重大科技攻关项目“ 高效经济作物组培快繁技术开发与应用”( 2006AA205A04)。
第一作者简介:顾玉成,男,1957生,研究员,主要从事植物生物技术研究,主持和参加国家、省攻关、省自然科学基金项目、湖北省农科院自立项目10
项。撰写发表相关论文18篇,2003年和2005年分别获湖北省科技进步二等奖、三等奖各一项。通信地址:430064湖北武汉南湖瑶苑湖北省农科院经
作所,Tel:027-87380926,E-mail:wujinping@hbaas.com。
收稿日期:2007-05-29,修回日期:2007-07-08。
100· ·
农业生物技术科学
中国农学通报 第23卷 第 9期 2007年 9月
htp:/www.casb.org.cn
魔芋大规模生产的瓶颈是极缺生产用优质种芋,通过
组培快繁技术是解决魔芋种芋退化和因种芋大调大运
造成的病害流行的根本途径。
试管微球茎具有便于运输保藏和栽培的优势。为
此,笔者在已经成熟的魔芋组织培养分化形成幼苗技
术基础上,探讨可用于大规模生产魔芋试管微球茎的
诱导技术。
1材料与方法
1.1材料
魔芋芽鞘,采自2006年5月湖北省农业科学院经
济作物研究所生物技术研究室魔芋试验基地。
1.2方法
1.2.1培养方法 外植体常规消毒[8]。愈伤组织诱导培
养基为 MS+6-BA0.6mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖
3%。愈伤组织增殖和分化培养基为 MS+6-BA1.5
mg/L+NAA0.4mg/L+蔗糖3%。微球茎诱导培养基①
MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗 糖 6%;②
MS+6-BA0.8mg/L +NAA0.5mg/L+ 蔗 糖 6% ;③
1/2MS+NAA0.08mg/L+蔗糖6%;④1/2MS+IBA0.8
mg/L+蔗糖6%。以上培养基琼脂6g/L,pH5.8~6.0。愈
伤组织的诱导在自然散射光环境中培养;愈伤组织增
殖、分化和微球茎诱导的光照强度为30μmol/(m2·s)左
右,光照时间10h/d,整个培养过程温度( 25±2)℃。
1.2.2再生植株的处理 将在分化培养基上形成的
3~4cm高的幼苗,用3种方法分株切割。A:叶柄基部
带部分愈伤组织( 以叶柄基部为中心,所带愈伤直径为
0.5cm左右);B:叶柄基部不带愈伤组织;C:叶柄基部
带少量愈伤组织( 以叶柄基部为中心,所带愈伤直径为
0.1cm左右)。由这3种方法切割的幼苗分别置人诱导
试管微球茎的不同培养基中。每个处理10瓶,每瓶放
置10株。
2结果与分析
2.1叶柄基部不同切割方式在不同培养基中的生长情况
在4种不同的培养基中,笔者从试管芋的形成情
况、分化的不定芽及其生根等方面进行分析( 如表1、
2、3)。A处理幼苗在培养基①②中,原来的愈伤组织继
续增殖,并形成不定芽,分化率达100%;在培养基③
④中,叶柄基部则长出不定根,生根率达100%。B处理
幼苗在培养基①②中,在切口处可部分诱导形成愈伤
组织,形成不定芽的分化率分别是62%,43%;而在培
养基③④中则不分化也不形成根系,只是基部稍微膨
大。C处理幼苗在培养基①②中不定芽分化率也达到
100%;而在培养基③④中形成试管微球茎,分别是
94%、82%,同时在微球茎上面的叶柄基部形成完整根
系,生根率达100%。因此,培养基①②适合愈伤组织
的形成和不定芽的分化,培养基③④适合叶柄基部带
愈伤组织的幼苗生根培养,而1/2MS+NAA0.08mg/L
+蔗糖6%的培养基更适合叶柄基部带少量愈伤组织
的幼苗诱导微球茎,将形成的微球茎,从叶柄基部撇
断,可看到微球茎上有芽点。
2.2试管芋的种植
试管微球茎诱导需要3周的时间,此时形成的微
诱导培养基




培养天数( d)
30
30
30
30
试管芋形成率
0
0
0
0
不定芽分化率
100
100
0
0
生根率
0
0
100
100
诱导培养基




培养天数( d)
30
30
30
30
试管芋形成率
0
0
0
0
不定芽分化率
62
43
0
0
生根率
0
0
0
0
诱导培养基




培养天数( d)
30
30
30
30
试管芋形成率
0
0
94
82
不定芽分化率
100
100
6
18
生根率
0
0
100
100
表1叶柄基部带部分愈伤组织的幼苗在4种培养基中生长情况
表2 叶柄基部不带愈伤组织的幼苗在4种培养基中生长情况
表3 叶柄基部带少量愈伤组织的幼苗在4种培养基中生长情况
101· ·
ChineseAgriculturalScienceBuletinVol.23No.92007September
htp:/www.casb.org.cn
农业生物技术科学
球茎直径在1cm左右,微球茎的周皮色泽为白色泛
绿,并在叶柄基部的茎上长出5~8条白色带有根毛的
不定根,4周后微球茎的周皮色泽为绿色转褐色( 如图1);
此时可以进行种植。按15cm×15cm的株行距种植于
大田,作适当遮阴处理,进行良种繁殖( 如图2),成活
率达95%以上,5~6个月后可收获100g左右的种芋。
3讨论
通过组培快繁技术生产魔芋试管苗繁殖种芋的技
术已臻成熟,试管微球茎的生产技术研究也有报
道[9~12],但各家自有其特点。经研究发现魔芋试管微球
茎的形成不仅与培养基的组成有关,还与叶柄基部的
切割方式有关。细胞分裂素6-BA在魔芋组培中对芽
的诱导有着积极作用,但对试管芋的诱导却有抑制作
用;生长素NAA和IBA在试管芋的形成中起着“ 扳
机”的作用,但NAA的作用更加明显。此外,不同的切
割方式在相同培养基上生长情况不同,魔芋试管微球
茎的形成与魔芋球茎的形成类似,是在叶柄膨大的基
部内可形成一个芽眼,这个芽眼的顶端优势被培养基
中的外源激素所抑制,基部的茎节则利用愈伤组织和
培养基中的营养物质膨大而形成。如果叶柄基部带的
愈伤过多,叶柄基部茎节必须通过愈伤组织吸收培养
基中营养物质,而培养基中的激素作用愈伤组织,使其
以增殖和分化为主;如果在叶柄基部将愈伤组织切割
净,则无法形成芽眼;但叶柄基部带少量愈伤组织,则
叶柄基部茎节几乎可以直接接触培养基,同时又使形
成芽眼的部位存在,从而形成微球茎。
近年来,利用植物组织培养技术,可以在较短的时
间内得到遗传稳定性好、苗期一致的大量优质种
苗[13~16]。但魔芋组培苗出瓶受季节限制,且栽培管理技
术含量高、设施投入大,栽培管理中稍不注意就会大大
降低组培苗的成活率和结芋率。笔者在利用已经成熟
的魔芋组织培养分化形成幼苗的技术基础上,研究在
试管内直接形成微球茎技术,不受季节限制,可以在试
管内周年生产种芋,生产的试管芋下地比试管苗更容
易成活,当年可达到生产用种芋的标准( 100g左右),
优势非常明显,对解决目前生产上优质种芋馈缺有着
积极意义,因此能够推广应用。
参考文献
[1] 王银元,吴祝平.魔芋栽培加工新技术.武汉:武汉大学出版社,2003:
24-34.
[2] 张兴国,刘佩瑛,张盛林.高温对魔芋叶片生理的影响.西南农业大
学学报,1992,14(4):336-339.
[3] 何家庆.论我国魔芋资源产业化与可持续发展.湖北民族学院学
报,2001,19(1):5-9.
[4] 张盛林.魔芋良种繁育体系的建立.山区开发,2000(9):26-27.
[5] 李恒,龙春.中国魔芋属的分类问题.云南植物研究,1998,20(2):
167-l70.
[6] 尉芹,马希汉.魔芋开发利用研究综述.西北林学院学报,1998,(13):
62-67.
[7] 王任翔,薛跃规.魔芋研究概况及开发前景.广西园艺,2003,(1):
9-10.
[8] 顾玉成,吴金平,万进,等.魔芋不同外植体诱导比较实验.中南民族
大学学报,2004,23(3):17-19.
[9] 谢庆华,张云峰,严胜柒,等.不同外植体诱导魔芋微球茎的比较研
究.云南农业大学学报,2005,20(3):350-355.
[10] 王玲,马继琼,房亚南,等.魔芋试管芋形成的因素探讨.西南农业学
报,2006,19(2):280-282.
[11] 云南省农业科学院生物技术研究所,魔芋试管芋的繁育技术,中国
专利[P].CN1493186.
[12] 西南农业大学,魔芋试管芋快速繁殖方法,中国专利 [P].CN
1422526.
[13] 张忠良,吴万兴,张秀华.魔芋北移引种试验研究.经济林研究,
1998,16(4):12-15.
[14] 刘贵周,谢世清,赵庆云.优质魔芋组培苗瓶外生根的研究.中国农
学通报,2005,21(4):62-63.
[15] 张兴国,苏承刚,刘佩瑛.魔芋快繁体系建立和人工种子研制.西南
农业大学学报,1993,15(6):19-21.
[16] 庄承纪,周建英.魔芋属植物愈伤组织的诱导和植株再生的研究.
云南植物研究,1987,9(3):339-347.
( 责任编辑:李碧鹰)
图2微球茎种植图1试管微球茎
102· ·