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影响蝴蝶兰花梗芽增殖率因素的研究



全 文 :影响蝴蝶兰花梗芽增殖率因素的研究
刘航空 1 ,禹婷 2 ,丁 勤 1 ,张 静 1 (1.西北农林科技大学 ,陕西杨凌 712100;2.成都农业科技职业学院 ,四川成都 611130)
摘要 [目的] 研究影响蝴蝶兰花梗芽增殖率的因素。 [方法] 在蝴蝶兰花芽产生期分别采集 2、3、4、5和 6cm的花梗芽为试材 ,并把材
料设成 1/4、1/2、3/4的节段 ,研究花梗芽采摘时间、培养基配方和暗培养对蝴蝶兰花梗芽增殖率的影响。 [结果] 5 ~ 6cm的花梗芽和 3
~ 4cm的花梗芽在分化腋芽数量上有所差异 ,但在总增殖率上没有明显差异。暗培养能更好诱导不定芽的产生 ,但对 1/4和 1/2节段
的花梗芽影响较大。从节位来看 , 3/4的花梗芽诱导效果最好。筛选培养基的正交试验发现 , KCl及 KT能有效提高增殖率 , NAA对花
梗芽增殖有抑制作用。[结论] 试验筛选的培养基 1/2MS+KCl1.0g/L+BA5.0mg/L+NAA0.6mg/L+KT1.0mg/L可使蝴蝶兰花
梗芽的增殖率达到 8.5个 ,是试验初始增殖率的 3~ 4倍。
关键词 蝴蝶兰;花梗芽;增殖率
中图分类号 S603.6  文献标识码 A  文章编号 0517-6611(2009)02-00529-02
StudyontheFactorsInfluencingtheProliferationofButterflyOrchidsPedicelBuds
LIUHang-kongetal (NorthwestA&FUniversity, Yangling, Shaanxi712100)
Abstract [ Objective] Theresearchaimedtostudythefactorsinfluencingtheproliferationrateofbuterflyorchids(Phalaenopsisspp)pedi-
celbuds.[ Method] Inflowerbudperiod, thepedicelbudswith2, 3, 4, 5and6cmwereselectedasthetestedmaterialsandtheyweredi-
videdinto1/4, 1/2and3/4segmentstostudytheefectofthepedicelbudselectingtime, mediumformulaanddarkcultureontheprolifera-
tionrateofbuterflyorchidsflowerbuds.[ Result] Itwasfoundthat5-6cmand3-4cmofpedicelbudswerediferentonthenumberofdif-
ferentiatedauxiliarybud, buttheyhadnoobviousdifferenceontotalproliferationrates.Darkculturecouldinducetheproductionofadventi-
tiousbudbeter, butithadgreatereffectonthepedicelbudswith1/4and1/2segments.Intheviewofthesegmentsofthepedicelbuds, 3/4
pedicelbudgotthebestinducingefect.Inorthogonaltestforscreeningmedium, itwasfoundthatKClandKTcouldimprovetheproliferation
rate, andNAAhadsomeinhibitionontheproliferationofpedicelbuds.[ Conclusion] Themediumscreenedinthetest(1/2MS+KCl1.0
g/L+BA5.0mg/L+NAA0.6mg/L+KT1.0mg/L)couldmaketheproliferationrateofbuterflyorchidsupto8.5, being3-4times
ofinitialproliferationrateintest.
Keywords Buterflyorchids(Phalaenopsisspp.);Flowerbuds;Proliferationrate
作者简介 刘航空(1980-),男 ,陕西咸阳人 , 硕士 ,实验师 ,从事园艺
种质资源与遗传育种研究。
收稿日期  2008-10-20
  蝴蝶兰花色艳丽 ,造型奇特 ,受到广大消费者的喜爱 。
但因蝴蝶兰种子内不含胚乳 ,发芽率相对较低 ,且种子培育
变异性较大 ,致使蝴蝶兰生产成本偏高 [ 1] 。目前理想的蝴蝶
兰培育方法为花梗芽诱导法 [ 2-3] 、花茎芽诱导法 [ 4]和叶片再
生类圆球茎法 [ 5-7] 。由于蝴蝶兰叶片诱导产生类圆球茎获
得再生植株培育时间太长 ,程序相对复杂 ,而花茎芽材料一
般不太容易获得(那时花已售出),现在多采用花梗芽(类圆
球茎)培养方式。蝴蝶兰一般可生长 2 ~ 4个花梗芽 ,商业生
产中只需要 1个花梗芽 ,多余的花梗芽将被摘除 ,采用花梗
芽诱导将大大降低生产成本。因此如何使花梗芽有效诱导
出不定芽 ,获得高频再生植株仍具有重要意义。
在蝴蝶兰花梗芽诱导产生不定芽时 ,品种 、培养条件与
培养基配方 [ 8-10]等都是影响增殖率的重要因素 。目前对这
些影响因素的研究报道很多 ,并且已经取得了很大进展 。从
诱导效果上来看 ,大多蝴蝶兰易产生丛生不定芽 ,但对于繁
育新品种 ,增殖数量仍不能满足生产需要。笔者通过对花梗
芽采摘时间 、培养基配方和培养方式进行研究 ,拟诱导出较
长的 、带有更多腋芽段的不定芽 ,从而提高再生率 。
1 材料与方法
1.1 试验材料 蝴蝶兰花品种成功兄弟 ,由杨凌晶彩花卉
公司提供。
1.2 试验方法 在蝴蝶兰花芽产生期 ,选取多余的花梗芽
作为试材 ,分别采取 2、3、4、5和 6 cm的花梗芽 ,统计花梗芽
腋芽数量。然后将试材置于 70%酒精中摇晃 30 s,转入
0.1%的升汞中摇晃 5 min,再转入 3%次氯酸钠中摇晃 5
min,用无菌水冲洗 3遍。去除花梗芽底端 1 cm,把剩余部分
按照腋芽节的位置分成不同等份。
由于节位对再生率有影响 ,根据腋芽位于节断的位置 ,
把材料设成 1/4、1/2、3/4三个处理。然后将带有腋芽的花
梗茎段置于 1/2 MS+BA5.0 mg/L+NAA0.6mg/L的培养
基上进行暗培养 ,暗培养时间分别为 0、3、6、9 d,之后进行
3 000 lx的光培养 。
为了使不定芽伸长并长出更多腋芽 ,必须防止营养生长
过快 ,可通过添加细胞分裂素和降低生长素浓度进行调控。
笔者采用 BA、KT、NAA3种激素 ,其中 BA浓度保持不变为
5.0mg/L, KT浓度设 3个水平 ,分别为 0、0.5和 1.0 mg/L,
NAA浓度设 3个水平 ,即 0.2、0.4和 0.6mg/L。目前普遍认
为 1/2 MS对蝴蝶兰诱导效果良好 ,大量元素 N、P、K对植株
营养生长也有重要影响 ,因此可在此基础上进行改良。笔者
采用 1/2 MS+KCl、1/2 MS+NH4NO3、1/2 MS+NaH2 PO3 3
种改良培养基。通过 34正交设计获得 9种不同培养基 ,把
1/2节段的花梗芽接在此培养基中 , 3 000 lx下光培养 ,进行
激素和基本培养基的筛选。
以上培养基蔗糖均为 25 g/L、琼脂 7.0 g/L、活性炭为
3.0g/L、pH6.0,培养温度 25 ℃。培养 40 d时 ,每个样本随
机抽取 5瓶组培苗 ,观察记录不定芽及腋芽数目 ,采用
DPS3.01分析软件进行数据分析 。
2 结果与分析
2.1 花梗芽采摘时期对增殖率的影响 由于温度等环境条
件对花梗芽的影响较大 ,一般采取观察花梗芽长度来确定最
佳采摘时期。由表 1可见 , 5 ~ 6 cm的花梗芽分化腋芽最多 ,
其中总增殖率也最高可达 5.4个;3 ~ 4 cm的花梗芽平均再
生率最高 ,再生率为 3.2个 ,其总增殖率为 5.0个 ,仅次于 5
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(2):529-530 责任编辑 罗芸 责任校对 李洪
~6 cm的花梗芽 ,与 3cm以下的花梗芽相比有显著性差异。
表 1 光培养下不同时期花梗芽的增殖率
  Table1 Proliferationrateofpedicelbudnodesatdifferentstages
underlightcultivation
花梗芽长度∥cmPedicelbudnode
平均腋芽数量∥个Averageaxilarybudnumber
单支腋芽平均增殖率∥100%(个)Averageproliferationrateofaxilarybudsperbranch
总增殖率
100%(个)Totalprolife-rationrate
0~ 2 1.2±0.45b 2.0±0.71a 3.0±0.71c
2~ 3 1.4±0.54ab 2.0±0.71a 2.4±0.55c
3~ 4 1.8±0.45ab 3.2±0.45a 5.0±0.71ab
4~ 5 2.2±0.45ab 2.0±0.71a 4.2±0.84b
5~ 6 2.4±0.54a 2.0±0.71a 5.4±0.55a
 注:同列不同大、小写字母分别表示在 0.01和 0.05水平差异显著。
下表同。
 Note:Diferentcapitalletersandlowercasesinarowmeansignificant
diferencesat0.01and0.05levels.Thesameasfolows.
2.2 暗培养及节位对增殖率的影响 通过对 5 ~ 6 cm花梗
茎段诱导不定芽的统计(表 2),可看出暗培养对 1/4和 1/2
节位增殖率影响较大 ,其增殖率均高于未经过暗处理的 ,暗
培养 6d时增殖率最高。但暗培养对 3/4节段的影响效果并
不明显。从节位上来看 , 3/4节段的诱导效果最好 ,其增殖率
均高于其他处理 ,在除暗培养 9 d的其他处理中 ,与 1/4节段
相比有显著性差异。
表 2 暗培养下不同花梗芽节位的增殖率
Table2 Proliferationrateofpedicelbudnodesunderdarkcultivation
节位
Nodeorder
平均增殖率 Averageproliferationrate∥100%(个)
0d 3d 6d 9d
1/4 1.2±0.45b 1.4±0.55b 1.6±0.55b 1.4±0.55a
1/2 1.6±0.55ab2.0a 2.4±0.55ab2.0±0.71a
3/4 2.4±0.55a 2.4±0.55a 2.8±0.45a 2.4±0.55a
2.3 基本培养基及生长调节剂对增殖率的影响 由表 3可
见 ,处理②、③较其他处理有极显著差异 ,说明 K对不定芽的
诱导有促进作用。其中在处理③(1/2 MS+KCl1.0 g/L+
BA5.0mg/L+NAA0.6 mg/L+KT1.0 mg/L)的培养基中 ,
花梗芽增殖率最高 ,增殖率为 8.5个 ,是试验初始增殖率的 3
~4倍。处理⑥增殖率最低 ,增殖率仅为 1.0个 ,较其他处理
有极显著差异 ,说明 N对花梗芽增殖有抑制作用。处理③、
④、⑦的增殖率均比较高 ,说明 KT对不定芽的增殖有重要
影响。
3 结论与讨论
5 ~ 6cm花梗芽与 3 ~ 4cm花梗芽虽然在分化腋芽数量
表 3 不同培养基下花梗芽的增殖率
  Table3 Proliferationrateofpedicelbudnodesindifferentcul-
turemedia
处理号
Treatmentcode
基本培养基
Basicmedium
添加元素∥g/LAdditionelement
NH4NO3 NaH2PO3 KCl
生长调节剂∥mg/LGrowthregulator
BA NAA KT
增殖率
100%(个)
Proliferationrate
① 1/2MS 1.0 5.0 0.2 3.5BC
② 1/2MS 1.0 5.0 0.4 0.5 8.0A
③ 1/2MS 1.0 5.0 0.6 1.0 8.5A
④ 1/2MS 0.8 5.0 0.2 1.0 4.5BC
⑤ 1/2MS 0.8 5.0 0.4 0.5 3.0BC
⑥ 1/2MS 0.8 5.0 0.6 1.0D
⑦ 1/2MS 0.1 5.0 0.2 1.0 5.0B
⑧ 1/2MS 0.1 5.0 0.2 2.5CD
⑨ 1/2MS 0.1 5.0 0.2 0.5 3.5BC
上有所差异 ,但从总增殖率上来看几乎没有差异。因此可把
采摘花梗芽的时间提前到多余花梗长至 3 ~ 4 cm时 ,为成品
苗优质生产提供良好保障 。暗培养对 1/4和 1/2的花梗芽
影响较大 ,但对 3/4的花梗芽效果不明显 ,说明 1/4和 1/2的
花梗芽生长力较弱 ,暗培养环境可增强其生长活力 ,更好诱
导不定芽的产生 。从节位的诱导效果来看 , 3/4的花梗芽增
殖率均比较高 ,因此在材料充足时应尽量使用此节段诱导不
定芽 。正交试验发现 , K及 KT可有效地提高增殖率 ,而 N对
花梗芽增殖有抑制作用 ,筛选的培养基 1/2 MS+KCl1.0
g/L+BA5.0 mg/L+NAA0.6 mg/L+KT1.0 mg/L,可使
“成功兄弟 ”品种诱导率达 8.5个 ,大大降低了生产成本。不
同的品种对培养基的要求不一 ,探明了这些因素对增殖率有
重要影响 ,可为新品种扩繁培养基筛选提供指导依据。
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