全 文 ：紫丁香 、糖槭总 RNA 的快速提取方法1)
王玉成　杨传平　姜　静
(东北林业大学 ,哈尔滨 , 150040)
　　摘　要　以酸酚提取 RNA的基本原理为基础 ,应用硼砂·CTAB·酸酚法和 SDS·酸酚法两种方法成功地提取
了紫丁香 、糖槭的总 RNA , 与常用的异硫氰酸胍方法比较 , 这两种方法具有快速 、有效等优越性。
关键词　紫丁香;糖槭;RNA;酸苯酚提取
分类号　Q522
Method of Extracting RNA Quickly from Syringa oblata and Acer negundo/Wang Yucheng , Yang Chuanping , Jiang
Jing(Northeast Forestry University , Harbin 150040 , P.R.China)// Journal of Nor theast Forestry University.-2001 ,
29(6).-90 ～ 91
Based on the acidic phenolic method of ex tracting RNA , the autho rs succeed in extracting the to tal RNA of Syringa
oblata and Acer negundo in different ways by means of borax-CTAB- acidic phenolic method and SDS- acidic pheno-
lic method.The two methods have the obvious advantages of celerity and efficiency in extracting RNA from ligneous
plants compared with the guanidinium isothiocyanate method.
Key words　Syringa oblata ;Acer negundo;RNA;Acidic phenolic extraction
　　目前 , RNA的提取方法多用于医学 、动物及草
本植物 ,对于树木而言 ,由于含有大量的多糖 、色素 、
脂类 、酚类物质等杂质 ,现行提取总 RNA 方法对它
们并不十分有效 。即使使用各公司推出的各种提取
总 RNA的试剂盒 ,但其效果也很不理想。笔者针
对紫丁香 、糖槭的特点 ,提出了两种提取 RNA 的方
法。
1　材料
紫丁香 、糖槭叶片;硼砂·CTAB 提取缓冲液(含
CTAB2%、硼砂 0.012 5 mol/L 、NaCl 1.4 mol/L 、巯
基乙醇 0.1 mol/L ,缓冲液 pH=9.0);SDS 提取缓
冲液(含 SDS 0.5%、NaAc 0.1 mol/L 、巯基乙醇0.1
mol/L ,用 HAc调 pH 值至 4.2);异硫氢酸胍提取缓
冲液(异硫氢酸胍 4 mol/L 、柠檬酸钠 25 mmol/ L 、
5%十二烷基肌氨酸钠 、巯基乙醇 0.1 mol/ L ,缓冲
液pH =7.0);水饱和酚(pH =3.5)、氯仿 、NaAc 2
mol/L(pH=4.0)。
2　方法
采用硼砂·CTAB·酸酚法 、SDS·酸酚法 ,并用异
硫氢酸胍方法作对比 。
1)国家“ 973”耐盐基因克隆资助项目。
第 1作者简介:王玉成 ,男 , 1974年 10 月生 ,东北林业大学森林
资源与环境学院 ,助教。
收稿日期:2001年 7月 11日。
责任编辑:张建华。
2.1　硼砂·CTAB·酸酚法
(1)将材料迅速用液氮研磨 ,磨碎后 ,按每克材
料加入 5 mL 提取液的比例加入离心管中 , 65℃温
浴 10 min ,其间不时摇动 ,加入等体积氯仿和 1/3体
积水饱和酚混匀 , 14 000 g 离心力离心 8 min ,取上
清液。
(2)加入 1/10体积 NaAc2 mol/L 、等体积水饱
和酚剧烈震荡3min ,再加入1/ 5体积氯仿 ,混匀 ,
14 000 g 离心力离心 10 min ,取上清液。
(3)重复步骤(2)一次(但不用再加入 1/10体积
NaAc2 mol/L)。
(4)用等体积的氯仿重新抽提上清液一次。
(5)加入 2.5倍体积乙醇 , -20℃放置 10 min ,
14 000 g 离心力离心 10 min ,用 70%乙醇洗涤沉
淀 ,晾干 ,加入 DEPC 处理的无离子水溶解。
在步骤(2),加酸酚后可 65℃温浴 10 min ,这样
去除 DNA 效果较好 ,但如果操作不慎 ,易引起 RNA
降解。
2.2　SDS·酸酚方法
(1)按体积比为提取液:水饱和酚:氯仿=1:1:
0.2的比例将溶液加入离心管中 。将材料迅速用液
氮研磨 ,磨碎后 ,按每克材料加入 4 mL 提取液的比
例加入离心管中。
(2)用旋涡震荡器剧烈震荡 2 min以上 ,冰浴10
min , 14 000 g 离心力离心 10 min ,取上清液。
(3)加入等体积的水饱和酚剧烈震荡 4 min ,再
加入 1/4体积氯仿 ,震荡混匀 ,14 000 g 离心力离心
10 min ,取上清液 。
第 29 卷 第 6 期 东　北　林　业　大　学　学　报 Vol.29 No.6
2001 年 11 月 JOURNAL OF NORTHEAST FORESTRY UNIVERSITY Nov.2001
DOI :10.13759/j.cnki.dlxb.2001.06.026
(4)加入等体积的氯仿混匀 ,14 000 g 离心力离
心 5 min ,取上清液 。
(5)向溶液中加入 2.5倍体积乙醇 , -20℃放
置 10 min , 14 000 g 离心力离心 10 min ,用 70%乙
醇洗涤沉淀 ,晾干 ,加入 DEPC 处理的无离子水溶
解。
2.3　异硫氰酸胍提取法[ 1]
(1)将材料迅速用液氮研磨 ,磨碎后 ,加入在冰
上预冷的离心管中 ,按每克材料加入 4 mL 提取液
的比例加入提取液 ,轻轻混匀 ,顺序加入 1/10体积
NaAc2 mol/L 与提取缓冲液等体积的水饱和酚 、1/5
体积氯仿混匀 ,冰浴 15 min 。
(2)4℃、14 000 g 离心力离心 10 min ,取上层水
相 ,并转移至另一干净的离心管中 ,然后向管中加入
2.5倍体积乙醇或等体积异丙醇 。
(3)-20℃放置 10 min , 14 000 g 离心力离心
10 min ,去除上清液 ,将沉淀重新溶解于异硫氢酸胍
溶液中(为原提取液体积的 1/3)。
(4)加入2.5倍体积乙醇或等体积异丙醇 ,
-20℃放置 10 min , 14 000 g 离心力离心 10 min ,沉
淀 ,用 70%的乙醇洗一遍 ,晾干 ,加入 DEPC 处理的
无离子水溶解。
3　结果分析
3种方法对等质量紫丁香 、糖槭叶片提取总
RNA 后 ,溶于等体积 DEPC 处理水中 ,分别取同体
积溶解液进行琼脂糖凝胶电泳检测。通过电泳图
1 、2可见 ,前两种方法均优于异硫氢酸胍法 ,表现为
RNA提取得量高:在 1 ～ 6泳道中 ,除 rRNA的两条
主带外 , 还有较明显弥散的 mRNA带 , 而 7 ～ 9 泳
道则不明显 ,说明这两种方法提取的 mRNA含量也
明显高于异硫氢酸胍方法 。
如果所提取的材料含有较多糖类 ,可以在SDS·酸
酚法第 4步或硼砂·CTAB·酸酚法第2步加入等体积1
×CTAB 沉淀液(含CTAB 1%、硼砂 0.012 5mol/L、pH=
9.0),此时可以产生白色沉淀。3 000 g离心力离心2min ,
倒掉上清液 ,加入 2 mol/ L NaAc 200μL ,溶解沉淀 ,
然后加入 2.5倍体积乙醇进行沉淀。
图 1　紫丁香总 RNA 电泳图
图 2　糖槭总 RNA电泳图
图 1 、2中 ,1 ～ 3 泳道为硼砂·CTAB·酸酚法提
取;4 ～ 6泳道为 SDS·酸酚法提取;7 ～ 9泳道为异
硫氢酸胍法提取。
用异硫氢酸胍提取时 ,不宜用本方法去除多糖。
4　结论与讨论
SDS·酸酚法与硼砂·CTAB·酸酚法是提取紫丁
香 、糖槭总 RNA 的有效方法 ,具有廉价 、快捷的优
点 ,RNA 的提取质量较高。
SDS·酸酚法与硼砂·CTAB·酸酚法提取总
RNA的质量明显优于异硫氰酸胍方法 ,表现为提取
的总 RNA丰度高 ,特别是 mRNA的丰度高于异硫
氢酸胍法 ,因此 ,这两种方法提取的总 RNA利于进
行 mRNA差异表达分析;两种方法都能有效去除多
糖;这两种方法与异硫氢酸胍法相比 ,在提取木本植
物 RNA时出现褐化的现象较少 。
参　考　文　献
1　顾红雅 ,瞿礼嘉 ,明小天 ,等.植物基因与分子操作.北京:北京大
学出版社 , 1995
91第 6 期　　　　　　　　　　　　　　　王玉成等:紫丁香 、糖槭总 RNA 的快速提取方法