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尖叶假龙胆对MIRI大鼠血清中TXB_2和6-酮-PGF1α的影响



全 文 :尖叶假龙胆对 MIRI大鼠血清中
TXB2和 6 -酮 - PGF1α的影响
李冀,丁莹
(黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:探讨尖叶假龙胆醇提液对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血清中 TXB2和 6 -酮 - PGF1α
的影响。方法:将大鼠制备心肌缺血再灌注损伤模型,用尖叶假龙胆醇提液进行干预,检测大鼠血清中
TXB2和 6 -酮 - PGF1α的含量变化。结果:尖叶假龙胆醇提液能显著降低 MIRI 模型大鼠血清中 TXB2
的含量,6 -酮 - PGF1α的含量升高。结论:尖叶假龙胆具有舒张血管、抗血小板聚集的作用,可以减轻
心肌缺血再灌注损伤。
关键词:心肌缺血再灌注损伤;TXB2;6 -酮 - PGF1α
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2406(2016)02 - 0009 - 02
Effect on TXB2 and 6 - keto - PGF1α from the Serum of
MIRI Rats by Gentianella Acuta
LI Ji,DING Ying
(Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China)
Abstract:Objective:To discuss the effect on TXB2 and 6 - keto - PGF1α from the serum of MIRI rats by Gen-
tianella Acuta extracted fluid by Alcohol. Methods:Prepare the rat models with myocardial ischemia reperfu-
sion injury,with the intervention of alcohol extraction of Gentianella acuta. Determine the changes of TXB2
and 6 - keto - PGF1α from rats' serum. Results:Gentianella acuta alcohol extraction could significantly re-
duce the contents of TXB2 from the serum of MIRI rat models,but could increase the contents of 6 - keto -
PGF1α. Conclusion:Gentianella acuta has an inhibitory effect on platelet aggregation,vascular,which can re-
duce myocardial ischemia reperfusion injury.
Key words:Myocardial ischemia reperfusion injury;TXB2;6 - keto - PGF1α
基金项目:黑龙江中医药大学研究生创新科研项目(No. 2015002)
作者简介:李冀(1960 -),男,教授,博士研究生导师,主要研究方向:方
剂配伍规律及药效物质基础研究。
收稿日期:2015 - 10 - 21
修回日期:2015 - 11 - 10
心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia -
reperfusion injury,MIRI)是指缺血的组织恢复血流灌
注的同时导致其灌注区心肌细胞及局部血管网发生病
理性生理变化,致使心肌造成进一步的损伤。长发生
在心脏手术、冠状动脉搭桥手术、心梗后再通血管、心
脏移植手术及休克等情况。[1]根据 1995 年卫生部发布
的统计可知,每年心血管类疾病死亡人数占人口总死
亡数的 40. 7%,大约每年有 200 万以上的人死于心血
管类疾病,且呈现逐年上升的趋势。对于心肌缺血性
心脏病的救治,首要就是恢复心肌的供血,然而再灌注
血液的过程中就会对心肌造成损伤。目前,心肌缺血
再灌注损伤已经成为临床上心血管疾病治疗与预防的
热点。
尖叶假龙胆味苦、性凉,具有清热,利胆,退黄的功
效,其主要成分具有抗炎、抗氧化等作用。鄂伦春族和
鄂温克族人治疗或预防心脏病的方法是将尖叶假龙胆
嚼服或代茶饮,疗效十分显著[2]。但对于尖叶假龙胆
对心肌缺血再灌注损伤药理作用的研究却很少,缺少
临床应用的理论依据。
心血管疾病的发生与血栓素 A2(TXA2)和前列环
素(PGI2)的关系十分密切,且研究发现很多药物都与
两者之间的代谢关系十分密切。近年来得到人们的普
遍关注。本实验选取尖叶假龙胆全草的 75%醇提液,
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2016 年 3 月第 33 卷第 2 期
Vol. 33,No. 2,Mar. 2016
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine
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观察其对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血清中 TXB2
和 6 -酮 - PGF1α 比值影响,探讨其对心肌缺血再灌
注损伤模型的保护机制[3 - 4]。
1 实验材料
1. 1 动物
Wistar大鼠 50 只,雌雄各半,体质量(180 ± 20)g,
由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。动物许可证
编号:SYXK 黑 2012001,实验室温度维持在(20 ±
2)℃,相对湿度:45% ~75%。
1. 2 仪器
KDC -40 型低速离心机(科大创新股份有限公司
中佳分公司);RE - 2000 旋转蒸发仪(上海亚荣生化
仪器厂);HX - 200 动物呼吸机(成都泰盟科技有限
公司);MedLab 型多道生物信号分析系统(成都泰盟
科技有限公司);Infinite M1000 Pro 全波长多功能微
孔板检测仪(TECAN)。
1. 3 化学试剂
乙醇(天津试剂一厂);生理盐水(哈尔滨三联药
业有限公司);乌拉坦(天津市光复精细化工研究所);
大鼠血栓素 B2(TXB2)ELISA Kit(武汉华美生物工程
有限公司,产品货号:CSB - E08047r);大鼠 6 -酮前列
腺素 F1α(6 - Keto - PGF1α)ELISA Kit(武汉华美生物
工程有限公司,产品货号:CSB - E14411r)。
1. 4 药品
将尖叶假龙胆生药材打成粗粉,用 75%乙醇加热
回流提取,提取减压回流浓缩液,配置成 1 g /ml 的
药液。
2 实验方法
2. 1 分组及给药
将 Wistar大鼠 50 只随机分成五组,每组 10 只,分
别为给药组高、低剂量组、预处理组、模型组、假手术
组。给药组分别灌予尖叶假龙胆提取物 3 g /kg、
0. 75 g /kg,其余各组灌予等量的生理盐水,给药体积
为 1 ml /100 g,连续灌胃给药 14 天。
2. 2 造模方法
大鼠腹腔注射 25%的乌拉坦溶液 1. 25 ml /kg 使
其麻醉,仰位固定,连接 MedLab 型多道生物信号分析
系统,观察大鼠心电图。在大鼠颈部正中位置切开皮
肤,分离肌肉使气管暴露;用眼科剪在气管的正中位置
剪一个 T形小口,连接小动物呼吸机上的插管插入气
管中,潮气量 15 ml /kg,呼吸比 2 ∶ 1,呼吸频率 50 次 /
分。沿胸骨左侧 2 mm切开皮肤,暴露出心脏,剪开心
包膜,在左心耳与肺圆锥之间的冠状动脉左前降支
2 mm处进针,进针深度约 1. 5 mm,并用 0. 5 mm 左右
的硅胶管套线,用止血钳夹紧硅胶管上端的线,阻断冠
状动脉左前降支造成心肌缺血。心脏表面相应区域的
颜色变深,表面造模成功;心肌缺血 30 min 后,松开结
扎线,恢复再灌注血液,时间为 60 min。预处理组先结
扎 5 min,再恢复灌注 5 min,此动作重复 3 次。假手术
组只穿线,但不结扎[5 - 6]。
2. 3 指标测定
测定大鼠血清中 TXB2和 6 - Keto - PGF1α 的水
平,用 ELISA速率法。检测步骤按试剂盒说明书标准
进行操作。
2. 4 统计学处理
使用 SPSS 13. 0 进行成组设计 t检验。
3 结果
与模型组相比较,正常组、假手术组、预处理组、高
剂量组血清中 TXB2的含量明显降低(P < 0. 01),低剂
量组的 TXB2 的含量降低,具有统计学意义(P <
0. 05);正常组、假手术组、预处理组、高剂量组、低剂
量组血清中 6 - Keto - PGF1α 的含量明显升高(P <
0. 01)。结果见表 1、2。
表 1 尖叶假龙胆对心肌缺血再灌注损伤模型
大鼠 TXB2含量的影响(珋x ± s)
组别 n TXB2(pg /ml)
模型组 8 995. 54 ± 3. 36
假手术组 8 965. 88 ± 3. 54**
预处理组 8 984. 60 ± 3. 23**
高剂量组 8 978. 52 ± 5. 63**
低剂量组 8 990. 72 ± 1. 98*
注:与模型组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01。
表 2 尖叶假龙胆对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠
6 - Keto - PGF1α含量的影响(珋x ± s)
组别 n 6 - Keto - PGF1α(pg /ml)
模型组 8 56. 35 ± 1. 14
假手术组 8 81. 04 ± 3. 14**
预处理组 8 68. 35 ± 0. 69**
高剂量组 8 77. 56 ± 0. 94**
低剂量组 8 57. 31 ± 0. 71*
注:与模型组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01。
4 讨论
血栓素和前列环素可以反映血液和血管的变化情
况,从而反映心肌缺血程度。血管内壁造成损伤是形
成动脉粥样硬化的诱因,血管硬化会造成血管内皮细
胞长期缺血、缺氧导致内皮细胞损伤而变厚,最终使血
管壁内膜下层暴露,致使 PGI2的合成功能受阻,阻碍
血小板的聚集,失去扩血管的作用,血液中的血小板在
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2016 年 3 月第 33 卷第 2 期
Vol. 33,No. 2,Mar. 2016
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受损的血管部位黏附,导致 TXA2的合成增加,PGI2的
合成降低,引起两者比例的失衡。血栓素 A2(TXA2)
可以使血管收缩、具有使血小板聚集、黏附和活化的功
用。但其半衰期很短,只能维持 30 s,随后转变成无生
物活性的物质血栓素 B2(TXB2),故测定 TXB2可以反
映 TXA2的含量。前列环素在体内的生物半衰期大约
为 2 ~ 3 min,将迅速转化为 6 - Keto - PGF1α,故将测
定的 6 - Keto - PGF1α水平代替 PGI2的水平
[7]。正常
生理状态下,血栓素 A2和前列环素维持在相对平衡的
水平,心、脑血管疾病的发生将致使平衡失调。研究表
明冠状动脉的病变支数的增加可以导致 PGI2合成的
减少,当心肌收到缺血再灌注损伤后,心肌微血管内皮
细胞受到损伤,使得前列环素的合成降低,血栓素的作
用增强,导致血小板聚集增加。
尖叶假龙胆高剂量组可以使血清中 TXB2的含量
降低,6 - Keto - PGF1α 的含量升高,故可说明尖叶假
龙胆高剂量组对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠的心肌
具有保护作用,是通过扩张血管,抗血小板聚集而保护
心肌免受缺血再灌注的损伤,对开发新药的临床应用
提供了科学依据和理论支持。
参考文献:
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51.
麦冬不同提取部位对 LPS诱导的 RAW264. 7
细胞分泌炎症因子的影响
曹春琪,赵跃东,张旗,韩文杰,王晴,陈丹阳,高菁,丁楠,李强*
(北京中医药大学,北京 100029)
摘 要:目的:研究麦冬各提取物组对脂多糖诱导的巨噬细胞 RAW264. 7 中炎症介质的影响,进而找出
该药的抗炎有效部位群。方法:采用回流提取及有机溶剂萃取的方法制备麦冬总提取物及不同提取部
位。各提取部位分别作用于 RAW264. 7 巨噬细胞后,使用 MTS 法检测细胞活力;并对脂多糖诱导的
RAW264. 7 细胞炎症反应模型采用不同部位的麦冬提取物和 LPS(脂多糖)进行药物干预 24 h 后,采用
Griess法测定 NO的分泌量;采用 ELISA法检测细胞上清液中 TNF - α 的含量。结果:麦冬各提取物组
都能明显抑制 LPS 诱导的 RAW264. 7 巨噬细胞 NO 的分泌(P < 0. 05),以及 TNF - α 的表达(P <
0. 01),并呈现出良好的剂量依赖性。与其他组相比,其中水提取部位对 NO分泌的抑制作用最突出,正
丁醇提取部位对 TNF - α 表达的抑制作用最突出。结论:麦冬各提取物组可通过抑制 LPS 诱导的
RAW264. 7 巨噬细胞 NO的分泌与 TNF - α的表达,从而发挥抗炎作用,试验结果表明麦冬水与正丁醇
提取部位对炎症因子的抑制作用最强。
关键词:麦冬;不同提取部位;RAW264. 7 细胞;炎症因子
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2406(2016)02 - 0011 - 05
作者简介:曹春琪(1991 -),女,硕士研究生,主要研究方向:中药药效物质基础及功效成分组研究。
通讯作者:李强* (1972 -),男,博士,研究员,硕士研究生导师,主要研究方向:中药药效物质基础及功效成分组研究。
收稿日期:2015 - 10 - 12
修回日期:2015 - 11 - 05
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Vol. 33,No. 2,Mar. 2016
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine
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