全 文 ：环球中医药 2014 年 2 月第 7 卷第 2 期 Global Traditional Chinese Medicine，February 2014，Vol. 7，No. 2 103
·论著·
基金项目:新疆维吾尔药与特色天然药物创制及产业化示范项
目(201130105-1);重大公共卫生专项———全国第四次中药资源普查
新疆(试点)项目(2100409)
作者单位:830001 乌鲁木齐，新疆中药民族药研究所科教科［宋
海龙(硕士研究生)、朱国强、贾晓光)］;新疆医科大学中医学院中药
系［卢晓丽(硕士研究生)、田树革)］
作者简介:宋海龙(1973 － )，2102 级在职硕士研究生，实验师。
研究方向:食品加工与安全。E-mail:xjwssong@ 126． com
通讯作者:贾晓光(1955 － )，硕士，主任药师，硕士生导师。研
究方向:中药资源与化学。E-mail:xgjia@ vip． sina． com． cn
假龙胆总多酚含量测定及抗氧化活性研究
宋海龙 朱国强 卢晓丽 田树革 贾晓光
【摘要】 目的 建立假龙胆总多酚含量的测定方法。方法 采用可见分光光度法测定假龙胆
中总多酚的含量，并建立清除羟基自由基和超氧阴离子自由基两种抗氧化模型对假龙胆抗氧化能
力进行评价。结果 以没食子酸作为测定总多酚含量的对照品，在浓度 0. 05 ～ 0. 3 mg (r = 0. 9999)
范围内呈良好的线性关系，结果表明，总多酚含量平均值为 7. 63 mg，假龙胆提取液具有良好的抗氧
化能力。结论 此方法操作简便，重现性良好、稳定，可作为假龙胆总多酚的检测方法，并可作为天
然抗氧化剂资源进行开发研究。
【关键词】 假龙胆;总多酚;抗氧化
【中图分类号】 Ｒ284． 2 【文献标识码】 A doi:10． 3969 / j． issn． 1674-1749． 2014． 02． 007
Gentianella turkestanorum (Gand．)Holub． total polyphenol content and antioxidant activity deter-
mination SONG Hai-long，ZHU Guo-qiang，LU Xiao-li，et al． Xinjiang Institute of Chinese Materia Medica
and Ethical Materia Medica，Urumqi 830002，China
Corresponding author:JIA Xiao-guang，E-mail:xgjia@ vip． sina． com． cn
【Abstract】 Objective To establish a method for the determination of total Polyphenol in Gen-
tianella turkestanorum (Gand．)Holub． Methods The total Polypheno land in Gentianaceae was deter-
mined by visible spectrophotometry，and establish two kinds of anti-oxidation model-scavenging hydroxyl
radicals and scavenging superoxide anion radicals-to evaluate Gentianella turkestanorum (Gand．)Holub．
in its antioxidant ability． Ｒesults The method had a good linearity in the range of 0. 05 ～ 0. 3 mg(r =
0. 9999)with gallic acid as the reference substance． The results showed that an average total polyphenol
content of 7. 63 mg，Gentianella turkestanorum (Gand．)Holub． extracts had good oxidation resistance．
Conclusions This method was simple，with good reproducibility，and stability，and could be adopted as
the standard method for detecting Gentianella turkestanorum (Gand．)Holub． total polyphenols． Gentianel-
la turkestanorum (Gand．)Holub ，as a natural anti-oxidant resources，is worth further research and devel-
opment．
【Key words】 Gentianella turkestanorum(Gand．)Holub．; Total Polyphenol; Antioxidant activi-
ty
假龙胆属 Gentianella 属于龙胆科，根据多方面
的研究结果，假龙胆属为一单系属，全球约有 125
种，中国有 9 种，主要分布于东北、西北及西南
部［1］。新疆假龙胆 Gentianella turkestanorum 为 1 年
或 2 年生草本植物，全草入药［2-4］。本文对新疆假
龙胆的总多酚及抗氧化能力进行测定，为假龙胆检
测提供新的方法依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
Spectrumlab 22 可见分光光度计(上海棱光技
术有限公司制造);KQ2200DE型数控超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司);AL204 电子天平(梅
特勒—托利多仪器有限公司)。
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1. 2 实验材料
药材:假龙胆(产地:新疆奇台县兴场大东沟;
经纬度:E89°53 N43°35 高度:1659. 8 m)药材粉
碎，过 40 目筛，即得。
试剂:维生素 C(vitamin C，Vc)三羟基甲基氨
基甲烷、冰醋酸、香草醛、碳酸钠、钨酸钠、钼酸钠、
磷酸、浓盐酸、硫酸锂、双氧水、无水乙醇、甲醇均为
分析纯，实验用水为蒸馏水。没食子酸对照品(天
津市光复精细化工研究所，含量:99%)。
2 实验方法
2. 1 试剂的制备
福林酚试剂的制备:称取钨酸钠 50 g，钼酸钠
12. 5 g，用 350 ml 蒸馏水溶解于圆底烧瓶中，加入
25 ml磷酸(≥85%)和 50 ml浓盐酸充分混匀，小火
加热回流 12 小时，放冷，再加入 75 g 硫酸锂、25 ml
蒸馏水及 0. 1ml双氧水，开口继续沸腾 15 分钟，使
得双氧水完全挥发，冷却后用蒸馏水定容至500 ml，
过滤，于棕色瓶中避光储存。试液应呈亮黄色，如
放置后变为绿色，可加双氧水 0. 2 ml，煮沸 15 分钟
即可［5-7］。
对照品溶液液的制备:精密称取 5. 0001 mg 没
食子酸化学对照品于 100 ml容量瓶中，用蒸馏水定
容，制成浓度为 0. 05 mg /ml总多酚对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备
称取假龙胆药材 1 g，加入 65%的乙醇 25 ml超
声处理 30 分钟，离心，将上清液定容至 100 ml，
即得。
2. 3 最佳测量波长的选择
准确吸取 1. 5 ml总多酚对照储备液于 25 ml容
量瓶中，分别加入 18. 0 ml 蒸馏水、福林试剂 1 ml，
用 15%Na2CO3 溶液定容，于 30℃水浴中恒温反应
1. 5 小时。以蒸馏水为空白对照，在 650 ～ 800 nm
波长下扫描其吸光度，结果表明没食子酸在 758 nm
处有强吸收峰，故选择 758 nm 作为总多酚的测定
波长。
2. 4 清除羟基自由基能力
参照文献［8-9］的实验方法，取 4. 5 mmol /L 的
FeSO4 溶液 1. 00 ml，加 4. 5 mmol /L 的水杨酸—乙
醇溶液 1. 00 ml，再加不同浓度的待测溶液 1. 00 ml，
最后加入 4. 4 mmol /L 的 H2O2 溶液 1. 00 ml 启动整
个反应。37℃水浴中反应 0. 5 小时，随行空白，并
以 Vc为阳性对照，在 510 nm下测定吸光值。并以
Vc为阳性对照，按公式:清除率 (= 1 － Ai － AjA0 ×
)100% 计算清除能力。式中 A0 为未加提取液时溶
液的吸光度，Ai 为加提取液后溶液的吸光度，Aj 为
提取液的吸光度。
2. 5 清除超氧阴离子能力
参照文献［10-14］的实验方法，取 pH 8. 2 的 Tris-
HCl缓冲液 3. 00 ml，加入 0. 50 ml 不同浓度的样
品，置于 30℃水浴中预热 20 分钟，再加入 7 mmol /L
邻苯三酚 3. 00 ml，混匀后于 25℃水浴中反应 5 分
钟，加入 8 mol /L的 HCI溶液 1. 00 ml终止反应，以
Vc为阳性对照，420 nm 处测吸光度值。按公式:清
楚率 (= 1 － Ai － AjA0 )× 100% 计算清除能力，式中
A0 为未加提取液时溶液的吸光度，Ai 为加提取液
后溶液的吸光度，Aj 为提取液的吸光度。
3 结果
3. 1 标准曲线
取总多酚对照品溶液 1 ml 、2 ml、3 ml、4 ml、
5 ml、6 ml于 10 ml容量瓶中蒸馏水定容，分别取上
述溶液各 3 ml加 3 ml 水，然后加 0. 5 ml 福林酚试
剂，最后加 1. 5 ml的 20%碳酸钠溶液混匀，加水定
容，75℃加热 10 分钟，758 nm 波长下测定吸光度，
以浓度为横坐标，测定得吸光度值为纵坐标，绘制
标准曲线，计算回归方程 Y = 0. 2034X + 0. 0502，r =
0. 9999，线性范围 0. 005 ～ 0. 03 mg /ml。
3. 2 方法学考察
3. 2. 1 稳定性试验 精密吸取同一份总多酚供试
品溶液 3 ml，加入蒸馏水 3 ml，分别于 0 分钟、10 分
钟、20 分钟、30 分钟、40 分钟、50 分钟、60 分钟按照
“3. 1”方法显色后测定吸光度值，计算得到假龙胆
总多酚含量的 ＲSD 为 1. 05%，样品在 60 分钟内显
色稳定。
3. 2. 2 精密度试验 取 6 份总多酚对照品溶液，每
份 3 ml，按照“3. 1”方法显色后测定吸光度值，计算
得到薰衣草总多酚含量的 ＲSD为 1. 58%，说明该方
法测定假龙胆总多酚含量精密度良好。
3. 2. 3 重现性试验 取同一批假龙胆样品 6 份，分
别按照“2. 2”方法制成总多酚供试品溶液，每份精
密吸取 3 ml，按照“3. 1”方法显色后测定吸光度值，
计算得到 ＲSD为 2. 88%，表明该方法测定假龙胆总
多酚含量重现性良好。
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3. 2. 4 加样回收率试验 精密吸取已知浓度的总
多酚供试品溶液 9 份分成 3 组，每份 1. 5 ml，分别精
密加入高、中、低不同浓度的总多酚对照品溶液适
量，按照“3. 1”方法显色后测定吸光度值，并计算回
收率，结果见表 1。
表 1 假龙胆中总多酚的回收率
编号 样品含量
(mg)
对照品加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
ＲSD%
1 0. 76 0. 3 1. 098 105
2 0. 76 0. 3 1. 041 97. 5
3 0. 76 0. 3 1. 070 101. 3
4 0. 76 0. 45 1. 224 101. 8
5 0. 76 0. 45 1. 196 98. 2 101. 1 2. 4
6 0. 76 0. 45 1. 239 103. 8
7 0. 76 0. 6 1. 365 100. 7
8 0. 76 0. 6 1. 337 97. 0
9 0. 76 0. 6 1. 393 104. 3
3. 3 样品含量测定
取假龙胆三份，每份平行 3 个样品，按照“2. 2”
方法制成总多酚样品溶液，每份精密吸取 3 ml，按
照“3. 1”方法显色后测定吸光度值，结果如表 2。
表 2 假龙胆中总多酚含量(n = 3)
样品编号 1 2 3
总多酚的含量(mg /g) 7. 96 ± 0. 06 7. 66 ± 0. 30 7. 27 ± 0. 67
3. 4 对羟基自由基的清除能力
由图 1 分析可知，假龙胆提取液和阳性对照 Vc
对羟基自由基的清除作用均随着浓度的增大而增
加。当浓度为 40 μg /ml时，假龙胆提取液对羟基自
由基的清除作用是 Vc对羟基自由基的清除作用的
2. 97 倍;当浓度为 400 μg /ml 时，假龙胆提取液对
羟基自由基的清除作用是 Vc 对羟基自由基的清除
作用的 1. 13 倍。假龙胆提取液对羟基自由基的清
除作用整体大于 Vc对羟基自由基的清除作用。
3. 5 对超氧阴离子的清除能力
由图 2 分析可知，假龙胆提取液和阳性对照 Vc
对超氧阴离子的清除作用均随着浓度的增大而增
加。当浓度为 40 μg /ml 时，Vc 对超氧阴离子的清
除作用比假龙胆提取液对超氧阴离子的清除作用
小;当浓度为 400 μg /ml 时，Vc 对超氧阴离子的清
图 1 对羟基自由基的清除能力
图 2 对超氧阴离子的清除能力
除作用是假龙胆提取液对超氧阴离子的清除作用
的 1. 66 倍。在 40 ～ 400 μg /ml浓度范围内，假龙胆
提取液对超氧阴离子的清除率增长趋势较为平缓，
而 Vc对超氧阴离子的清除作用增长趋势较大。
4 结论
从研究结果可以看出，假龙胆中具有较为丰富
的总多酚，采用可见分光光度法测定假龙胆总多酚
含量，简单易行，重现性好，结果稳定可靠，可作为
测定假龙胆药材总多酚含量的检测方法。对假龙
胆抗氧化作用研究发现，假龙胆提取液具有一定的
抗氧化能力，可作为天然抗氧化资源进行开发。
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(收稿日期:2013-11-20)
(本文编辑:董历华)
基金项目:四川省高校科研创新团队建设计划(11TD004);成都中医药大学藏药学特色专业建设项目(2012-特色-5);成都中医药大学藏
药学专业综合改革项目(2012-专业-13);西藏藏医学院藏药有限公司资助项目
作者单位:611137 成都中医药大学民族医药学院
作者简介:赖先荣(1971 －)，本科，副研究员。研究方向:中药及民族药创新药物的研究与开发。E-mail:laixianrong@ 163． net
HPLC 法测定藏药巴桑母酥油颗粒中没食
子酸的含量
赖先荣 何新友
【摘要】 目的 建立藏药巴桑母酥油颗粒中没食子酸的含量测定方法。方法 采用高效液相
色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)测定巴桑母酥油颗粒中没食子酸的含量，色谱
柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱 Welch Materials，流动相为乙腈—0. 1%磷酸水溶液(3∶ 97)，流速为
1. 0 ml /min;柱温为 30℃，检测波长为 215 nm，外标一点法定量。结果 没食子酸在 0. 2 ～ 1. 6 μg范
围内，与峰面积积分值线性关系良好(n = 6)。该方法的平均回收率为 98. 34%，相对标准偏差(rela-
tive standard deviation，ＲSD)为 1. 62%(n = 9)。四批样品的含量分别是 0. 3224 mg /g、0. 3354 mg /g、
0. 3288 mg /g、0. 3269 mg /g。结论 高效液相色谱法准确、简便、快速，适合于该制剂的质量控制。
【关键词】 藏药; 巴桑母酥油颗粒; 没食子酸; 高效液相色谱法; 含量测定
【中图分类号】 Ｒ29 【文献标识码】 A doi:10. 3969 / j． issn． 1674-1749． 2014． 02． 008
Content determination of gallic acid in Tibetan medicine Basangmu butter granules by HPLC
LAI Xian-rong，HE Xin-you． Ethnomedicine College，Chengdu University of Traditional Chinese． Medicine，
Chengdu 611137，China
Corresponding author:LAI Xian-rong，E-mail:laixianrong@ 163． net
【Abstract】 Objective To establish a content determination method of gallic acid in Tibetan medi-
cine Basangmu butter granules． Methods The content of gallic acid in Basangmu butter granules was de-