全 文 ：收稿日期:2009-03-02
基金项目:国家自然科学基金青年基金项目(30901967);辽宁省教育厅高等学校科研项目(2009A684)
作者简介:王欣杨(1980-), 女(汉族), 黑龙江双城人 ,硕士研究生 , 主要从事中药质量控制与药物动力学研究 , Tel.
13080718807, E-mail4150609wang@sohu.com;于治国(1958-),男(汉族), 山东莱西人 ,教授 , 博士 ,主要从事中药质
量控制与药动学研究 , Tel.024-23986295, E-mailzhiguo-yu@163.com。
文章编号:1006-2858(2009)11-0907-04
HPLC法测定槲寄生中丁香脂素的含量
王欣杨 1 , 赵云丽1 , 石　珊 2 , 王乃丹3 , 王新桃 1 , 于治国 1
(1.沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016;2.中国医科大学 附属第一医院 , 辽宁 沈阳 110032;
3.辽宁省医药实业有限公司 ,辽宁 沈阳 110005)
摘要:目的 建立测定不同产地槲寄生药材中丁香脂素的 HPLC法。方法色谱柱为 DiamonsilC
18
柱
(250 mm ×4.6 mm, 5μm),流动相:乙腈-水(体积比为 30∶70), 流速:1.0 mL·min-1 , 检测波长:
272nm。结果 丁香脂素在 17.4 ～ 348.0mg·L-1内呈良好线性关系 r=0.999 5(n=6),平均回收率
(n=9)为 98.0%(RSD=1.6%)。结论 该方法为槲寄生药材质量评价提供了可靠依据。
关键词:槲寄生;丁香脂素;高效液相色谱法
中图分类号:R917　　　文献标志码:A
　　槲寄生(HerbaVisci)为桑寄生科植物槲寄生
[ Viscumcoloratum(Komar.)Nakai]的干燥带叶茎
枝 ,味苦 、平 ,归肝 、肾经 ,有祛风湿 、补肝肾 、强筋
骨 、安胎的作用 。现代临床主要用于治疗心脑血
管疾病 、抗肿瘤 、抗炎 、抗氧化 、抗衰老和免疫调节
等 [ 1-3] 。其主要化学成分为黄酮 、生物碱 、木脂
素 、三萜等 [ 4 -5] 。丁香脂素(syringaresinol)即为木
脂素类化合物 ,具有抗肿瘤 、抗炎 、抗氧化 、免疫调
节等作用;此外还能抑制乙酞胆碱酯酶活性 、促进
神经元的生长[ 6-7] 。目前关于槲寄生中有效成分
的定量分析研究主要集中于黄酮和生物碱类成
分 [ 8-11] ,木脂素成分的含量测定未见报道。鉴于
丁香脂素具有较好的活性 ,本文作者建立了槲寄
生药材中丁香脂素含量的 HPLC方法 ,并应用于
药材的测定 。丁香脂素结构见图 1。
1　仪器与材料
高效液相色谱仪(包括LC-10ATvp输液泵 、
SPD-10Avp可变波长紫外检测器 、HT-130柱温
箱 、ANASTAR色谱数据处理系统 ,日本 Shimadzu
公司)。
丁香脂素(自制 ,通过核磁共振和质谱数据
确证 , HPLC归一化纯度质量分数为 98.5%),乙
腈(色谱纯),甲醇(色谱纯),水(二次蒸馏水)。
槲寄生药材部分采购于全国各地药材公司或
药店 ,部分采自于长白山余脉张广才岭 ,经沈阳药
科大学孙启时教授鉴定为正品 Viscumcoloratum
(Komar.)Nakai。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与色谱系统适用性试验
色 谱 柱:DiamonsilC18 柱 (250 mm ×
4.6mm, 5 μm), 流动相:乙腈 -水 (体积比为
30∶70),流速:1.0 mL·min-1 ,检测波长:272 nm,
进样量:10 μL。在上述色谱条件下分析 ,理论板
数按丁香脂素峰计算不低于 3 000,样品中丁香脂
素与相邻峰分离度大于 1.5。供试品及对照品色
谱图见图 2。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照溶液的制备
精密称取丁香脂素 8.7 mg,置 10 mL量瓶
中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,得丁香脂素
储备液 。精密量取储备液 1.0mL,置 10 mL量瓶
中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得对照溶液 。
Fig.1　Thestructureofsyringaresinol
第 26卷 第 11期
2 0 0 9年 1 1月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.26 　No.11
Nov.2009 p.907
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2009.11.013
1—Syringaresinol
Fig.2　HPLCchromatogramsofreferencepreparation(A)andassaypreparation(B)
2.2.2　供试溶液的制备
取药材粉末约 2.0 g,精密称定 ,加体积分数
为 75%的乙醇溶液 50mL,回流 2h,滤过 ,收集滤
液 ,残渣用体积分数 75%的乙醇溶液洗涤 3次 ,
每次 5 mL,合并洗液与滤液 ,减压回收乙醇并蒸
干 ,残渣加水 20mL溶解 ,用乙酸乙酯萃取 3次 ,
每次 20 mL,合并乙酸乙酯层 ,蒸干 ,残渣用甲醇
溶解并定量稀释至 5 mL,摇匀 ,经 0.45 μm微孔
滤膜滤过 ,取续滤液作为供试溶液。
2.3　方法学考察
线性范围　精密量取丁香脂素储备液 0.1、
0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL,分别置 5 mL量瓶中 ,
加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得系列标准溶液 ,分别
取系列标准溶液按 “2.1”条色谱条件分析。以溶
液质量浓度(mg·L-1)为横坐标(X),峰面积(Y)
为纵坐标 ,得到丁香脂素的回归方程为:Y=1.000
×106X-3.360×103 , r=0.999 5(n=6)。结果
表明 ,丁香脂素在质量浓度 17.4 ～ 348.0 mg·L-1
内呈良好线性关系。
色谱系统重复性试验　精密吸取同一对照溶
液(87.0mg·L-1)10 μL,重复进样 6次 ,记录色
谱图 ,测量峰面积 , 其相对标准偏差 (RSD)为
1.2%,表明仪器精密度良好 。
方法　重复性试验 按 “2.2”条方法平行制备
6份供试溶液(产地:延吉),各精密吸取 10 μL,
进样 ,测量峰面积 ,按外标法以峰面积计算含量 ,
丁香脂素含量的 RSD为 2.1%,表明方法精密度
良好。
溶液稳定性试验　取新制备的同一份供试溶
液 ,分别在室温放置 0、1、2、4、8、12 h后进样 ,记
录色谱图 ,测量峰面积 ,测得峰面积 RSD为 1.8%
(n=6),结果表明供试溶液在 12 h内稳定。
方法回收率试验　称取已知含量的槲寄生样
品(产地:延吉)9份 ,每份 1.0 g,精密称定 ,分别
精密加入对照溶液(87.0 mg·L-1)1.25、 2.50、
3.75mL,每个样品平行 3份 ,按 “ 2.2”条方法操
作 ,在上述色谱条件下进样分析 ,计算丁香脂素含
量 ,并根据加入量计算回收率(见表 1)。
Table1　Recoveriesofadenosine(n=9)
moriginal/mg madded/mg mfound/mg Recovery/% Average/% RSD/%
0.2105 0.1085 0.3180 99.08
0.2110 0.1085 0.3165 97.24
0.2155 0.1085 0.3193 95.67
0.2180 0.2175 0.4300 97.47
0.2200 0.2175 0.4300 96.55 98.02 1.6
0.2185 0.2175 0.4350 99.54
0.2195 0.3260 0.5410 98.62
0.2175 0.3260 0.5450 100.50
0.2200 0.3260 0.5380 97.55
908 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 26卷　
2.4　样品测定
取不同产地的样品 ,按 “2.2”条方法操作 ,精
密取供试溶液 10 μL进样分析 ,按外标法以峰面
积计算样品中丁香脂素的含量 ,结果见表 2。
Table2　Determinationresultsofsamples(n=3)
Origin w/%
Hebei 0.015 6
Xinjiang 0.014 4
Neimenggu 0.025 0
Tangshan 0.006 9
Shanghai 0.017 3
Binxian 0.013 3
Shenyang 0.016 7
Anshan 0.014 6
Liaoning 0.008 8
Shandong 0.025 4
Yanji 0.022 0
3　讨论
a.检测波长的选择:在波长 200 ～ 400 nm内
扫描 ,丁香脂素甲醇溶液(0.1 g·L-1)在 272 nm
波长处有最大吸收 ,且干扰成分吸收较小 ,因此选
择该波长为检测波长 。
b.流动相的选择:分别对甲醇-水 、甲醇 -水 -
磷酸 、乙腈-水 、乙腈-水-磷酸等条件进行考察 ,结
果表明以乙腈 -水系统色谱峰峰形好 ,柱效高 ,可
达到理想的分离度。
c.样品提取条件的选择:对提取方式(煎煮 、
回流和超声)和提取溶媒(水 、不同浓度的甲醇和
乙醇溶液)进行同时考察 ,确定体积分数为 75%
的乙醇溶液回流提取效果最好 ,但存在较多干扰
峰 ,且本底高 ,因此采用萃取方法 ,分别考察乙酸
乙酯和氯仿萃取后色谱图 ,结果显示乙酸乙酯萃
取后干扰峰少 ,本底降低 ,分离度理想 。
d.本文作者首次对不同产地槲寄生中丁香
脂素进行了含量测定 ,测定结果表明不同产地中
丁香脂素含量差异较大 ,其中山东东圣含量最高 ,
唐山含量最低 ,且含量差别近 3.7倍。作者所建
立的槲寄生中丁香脂素含量的 HPLC测定法可为
槲寄生药材的后期研究提供依据。
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909第 11期 王欣杨等:HPLC法测定槲寄生中丁香脂素的含量
HPLCdeterminationofthecontentofsyringaresinol
inHerbaVisci[ stemsandleavesofViscumColora-
tum(Komar.)Nakai]
WANGXin-yang1 , ZHAOYun-li, SHIShan2 , WANGNai-dan3 , WANGXin-tao, YUZhi-
guo1
(1.SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceutical, Shenyang110016, China;2.TheFirstHospitalOfChina
MedicineUniversit, Shenyang110001 , China;3.LiaoningProvinceIndustryLimitedCompany, Shenyang
110005, China)
Abstract:ObjectiveTodevelopahighperformanceliquidchromatography(HPLC)methodforthedetermi-
nationofsyringaresinolinHerbaVisci.MethodsSyringaresinolwasisolatedbysilicagelcolumnchroma-
tographyandidentifiedbyspectraldata.ADiamonsilC18 column(250 mm×4.6mm, 5μm)withamobile
phaseconsistingofacetonitrile-water(V∶V=30∶70)wasused, theflowratewas1mL·min-1 , andthedetec-
tivewavelengthwassetat272nm.ResultsGoodlinearitywasobtainedintherangeof17.4-348.0mg·L-1
withcorelationcoeficientof0.999 5(n=6).Theaveragerecoveryofsyringaresinolwas98.0%withRSD
of1.6%(n=9).ConclusionsThemethodissensitive, accurate, rapid, andsuitableforthequalitycontrolof
ChineseMistletoe.
Keywords:HerbaVisci;syringaresinol;HPLC
(上接第 903页)
Antioxidant constituents of Sarcandra glabra
(Thunb.)Nakai
LIBo1 , HUANGMing-ju2 , LIYan-lan2 , ZENGGuang-yao2 , TANJian-bing2 , ZHOUYing-
jun2
(1.Hunanfoodanddrugadministration, Changsha410013, China;2.Schoolofpharmaceuticalscience,
CentralSouthUniversity, Changsha410013 , China)
Abstract:ObjectiveTostudytheantioxidantconstituentsofSarcandraglabra(Thunb.)Nakai.Methods
Theconstituentswereisolatedbyaseriesofcolumnchromatography.Thestructureswereelucidatedonthe
basisofphysico-chemicalpropertiesandspectroscopicanalysis.Theantioxidantactivitywascharacterizedby
themethodof1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)radicalassay.ResultsFourcompoundswereisolated
andidentifiedas4-O-cafeoylquinicacid(1), 3-O-cafeoylquinicacid(2), 4-O-caffeoylquinicacidmethyl
ester(3), 3-O-cafeoylquinicacidmethylester(4).ConclusionsCompounds1-4areisolatedfromSarcandra
forthefirsttime.Thesestudyresultsrevealthatthecafeicacidderivates, salvianicacidderivatesandfla-
vonoidswithortho-diphenylhydroxylgrouphavestrongDPPHradicalscavengingactivity(IC50 =9.64-
29.43 μmol·L-1).Theyareexcelentnaturalantioxidants.
Keywords:Sarcandraglabra;chemicalconstitute;structuralidentification;antioxidant
910 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 26卷