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尖叶假龙胆不同提取部位对HepG2细胞胰岛素抵抗改善作用研究



全 文 :2016年6月第22卷第12期 June.2016 Vol.22 No.12
*基金项目:科学技术部国家国际科技合作项目(2010DFB33260)
通讯作者:徐暾海,E-mail:weimozhuo@163.com
尖叶假龙胆不同提取部位对HepG2细胞
胰岛素抵抗改善作用研究*
魏 颖1,2,3,李 蒙1,2,3,秦灵灵2,3,孙 文2,3,李朋收1,2,3,徐暾海1,2,3,刘铜华2,3
(1.北京中医药大学中药学院,北京 100029;2.中医养生学北京市重点实验室,北京 100029;
3.中医养生学教育部重点实验室,北京 100029)
[摘要] 目的:研究尖叶假龙胆不同提取部位对正常HepG2细胞糖消耗及胰岛素抵抗HepG2细胞糖消耗的
影响。方法:CCK-8法检测尖叶假龙胆不同提取部位对HepG2细胞增殖的影响;用葡萄糖氧化酶法检测尖叶假龙
胆不同提取部位对HepG2细胞糖消耗的影响;用含有胰岛素的高糖培养基诱导HepG2细胞,建立胰岛素抵抗模
型,并用葡萄糖氧化酶法检测尖叶假龙胆不同提取部位对胰岛素抵抗HepG2细胞糖消耗的影响。结果:浓度大于
250 μg/mL的各提取部位对细胞增殖均有明显抑制作用,除乙酸乙酯高浓度(250、200 μg/mL)外其余提取部
位对正常HepG2细胞的糖消耗均无显著影响。尖叶假龙胆乙酸乙酯部位、大孔树脂95%部位和大孔树脂70%部
位均对胰岛素抵抗HepG2细胞糖消耗影响明显。结论:除乙酸乙酯高浓度(250、200 μg/mL)外其余提取部位对正
常HepG2细胞的糖消耗无显著影响。除大孔树脂30%部位外,其余各部位均能提高胰岛素抵抗的HepG2细胞的
葡萄糖消耗,改善HepG2细胞的胰岛素抵抗。
[关键词] 尖叶假龙胆;提取部位;HepG2细胞;降糖活性
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X(2016)12-0013-04
Effects of Different Fractions from Gmtianella Acuta on Improving
Insulin Resistance in HepG2 Cells
WEI Ying1,2,3, LI Meng1,2,3, QIN Ling-ling2,3, SUN Wen2,3, LI Peng-shou1,2,3, XU Tun-hai1,2,3, LIU Tong-hua2,3
(1.School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China;
2.Beijing Key Laboratory of Health-cultivation, Beijing 100029, China;
3.Health-cultivation Laboratory, Ministry of Education, Beijing 100029, China)
[Abstract] Objective: To study the effects of different fractions of Gmtianella Acuta on the glucose con-
sumption of normal HepG2 cells and insulin-resistance HepG2 cell models. Methods: Proliferation of HepG2
cells was detected by CCk-8 assay. Detection of glucose consumption in HepG2 cells by using glucose oxidase
method. Insulin resistance cell model was induced by high sugar medium (25 mmol/L) containing insulin. The
influence of different extracts of Gmtianella Acuta on the glucose consumption of insulin-resistance HepG2 cell
models were detected by glucose oxidase method. Results: The results showed that the different fractions from
Gmtianella Acuta with concentration more than 250 μg/mL have obvious inhibitory effect. There were no obvious
influences on glucose consumption of normal HepG2 cells except ethyl acetate fraction with concentration of 250
and 200 μg/mL. Influences of ethyl acetate fraction, macroporous resin-95% fraction and macroporous resin-70%
fraction were remarkable on glucose consumption of insulin resistance HepG2 cell models. Conclusions: It was
concluded that in addition to the high concentration of ethyl acetate (250 and 200 μg/mL), the other rest frac-
tions have no significant effect on glucose consumption of normal HepG2 cells. And different fractions from
Gmtianella Acuta, except macroporous resin-30% fraction, could significantly promote the glucose consumption of
insulin resistance in HepG2 cells and improve insulin resistance in HepG2 cells.
[Key words] Gmtianella Acuta; extractive fractions; HepG2 cells; hypoglycemic activity
!!!!!!

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科研报告
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2016.12.005
2016年6月第22卷第12期 June.2016 Vol.22 No.12
尖叶假龙胆(Gmtianella acuta)为龙胆科 (Gen-
tiananceae)假龙胆属(Gmtianella Moench.)植物,别名
苦龙胆。该属植物全世界约有125种,主要分布在非
州和南北温带地区,我国有9种,分布于东北、西北、
及西南部地区,其中作为药物使用的有5种。尖叶假
龙胆在我国主要用于蒙、藏医学中治疗黄疸型肝炎、
头痛、发烧等,而鄂温克族和鄂伦春族的猎民长期用
其治疗心律失常等心脏病且效果显著[1]。尖叶假龙胆
缺乏现代药理作用研究,在很大程度上限制了其进
一步的应用。其化学成分研究表明其富含大量口山酮
类化合物[3]。文献报道其主要成分口山酮类化合物Bel-
lidifolin可以用于治疗胰岛素抵抗所致的2型糖尿
病,极具开发潜力[2]。为了更好地了解和应用这一药
用植物,阐明其化学成分组成和药理药效物质基础,
深入开发利用这一资源,扩大民族药的适用范围,
笔者对其降糖活性部位进行体外筛选,进一步指导
其降糖活性物质基础研究。
1 仪器与材料
1.1 仪器 R200D型分析天平:德国赛多利斯集团;
HERA cell 150i CO2孵育箱:美国Thermo scientific
公司;HDL型超净工作台:北京东联哈尔仪器制造有
限公司;IX71倒置显微镜:日本Olympus公司;Glomax
multi酶标仪:美国promega公司;Sigma台式高速低温
冷冻离心机:Sigma -Aldrich公司;Alpha 1 -2 LP
plus冻干机:德国CHRIST冻干机;R-1020旋转蒸发仪:
郑州长城科工贸有限公司。
1.2 试剂 DMEM高糖培养基:美国Gibco公司;青
霉素-链霉素混合液:biotopped;胎牛血清:美国O-
RIGIN公司;磷酸盐缓冲液(PBS):biotopped;胰岛
素:诺和灵R;盐酸二甲双胍:中美上海施贵宝制药
有限公司;胰蛋白酶-EDTA溶液:biotopped;葡萄糖
检测试剂盒:北京普利莱基因技术有限公司;CCK-8:
同仁化学;细胞培养瓶:Fisher scientific公司。分析
纯乙醇:北京化工厂;分析纯石油醚:北京化工厂;分
析纯乙酸乙酯:北京化工厂;大孔树脂D101:南开大学;
分析纯乙腈:北京化工厂;色谱纯乙腈:美国Fisher;
超纯水实验室自制美国Millipore。
1.3 材料 人肝癌细胞株HepG2,为北京中医药大
学基础医学院保存细胞株;尖叶假龙胆采自内蒙古
呼伦贝尔海拉尔。经北京中医药大学中药学院刘春
生教授鉴定为龙胆科假龙胆属植物尖叶假龙胆
(Gentianella acuta Hulten)的干燥全草。
2 方 法
2.1 尖叶假龙胆各部位的提取 尖叶假龙胆干燥
全草约3.5 kg,粉碎,加95%的乙醇浸渍,至上层浸渍
液颜色呈浅黄色,回收95%乙醇提取液至无醇味得
到95%乙醇浓缩液。药渣中加70%乙醇浸渍至上层
浸渍液颜色很浅,回收70%乙醇提取液至无醇味得
到70%乙醇浓缩液。将95%乙醇浓缩液加水分散,石
油醚脱脂后,用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物
和水层两个部分。70%乙醇浓缩物按照同样的方法
萃取,得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和水层三
个部分。将95%和70%乙醇浓缩物萃取得到的石油
醚萃取物合并,乙酸乙酯萃取物合并,分别回收试剂
得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物。经95%乙醇和
70%乙醇提取后的药渣加水用超声循环提取机超声
提取,过滤,得到水超声提取液。将95%和70%乙醇
浓缩物萃取后得到的水层加热挥散有机试剂与水超
声提取液合并,然后用D101大孔树脂静态吸附,依
次用水、30%、70%、95%的乙醇洗脱,水洗液弃去,得
到30%、70%、95%的乙醇洗脱液,回收乙醇,冻干,得
到大孔树脂30%、70%、95%的洗脱物。我们将乙酸乙
酯部位,大孔树脂30%、70%、95%的洗脱部位进行细
胞活性实验。
2.2 细胞实验
2.2.1 HepG2细胞的培养 HepG2细胞复苏后用
4.5g/L DMEM高糖培养液(含10%灭活胎牛血清)转
入细胞培养瓶中,于细胞培养箱(37 °C,5.0%CO2)中
培养。当细胞贴壁长满后,弃去培养液,用PBS溶液
轻轻洗涤2次,用0.25%胰蛋白酶消化,每3 d按1:3比
例传代1次,取对数生长期的细胞用于实验。
2.2.2 尖叶假龙胆不同提取部位对HepG2细胞增殖
的影响 取对数生长期细胞,以5×105个/孔的细胞密
度接种于96孔细胞培养板。将细胞分为空白对照组
和样品干预组,样品干预组换无血清的含药培养基,
尖叶假龙胆乙酸乙酯部位、大孔树脂95%部位、70%
部位、30%部位。样品终浓度分别为:0.25、0.2、0.15、
0.1、0.075、0.05、0.025 mg/mL,每个浓度设5个复孔,
加药24 h后,每孔加入10 μLCCK8,放入37℃恒温箱
中,反应1 h后取出置于酶标仪中检测,波长设定为
450 nm,测定吸光度值。
2.2.3 HepG2细胞葡萄糖消耗实验 将处于对数生
长期的HepG2细胞消化后,用含血清的高糖培养基
调整细胞密度为5×104个/mL,接种于96孔培养板中,
每孔加入200 μL细胞悬液。待细胞单层贴壁后,用无
胎牛血清的培养基溶解样品成不同的浓度,每个浓
度3个复孔。实验设为空白对照组、盐酸二甲双胍组、
不同浓度给药组(终剂量分别为0.25、0.2、0.15、
0.1、0.075、0.05、0.025 mg/mL),孵育24 h后,用葡萄
糖测定试剂盒(配制成校准液)检测培养基上清的葡
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2016年6月第22卷第12期 June.2016 Vol.22 No.12
萄糖含量,计算葡萄糖消耗量(GC),计算公式如下:
葡萄糖含量(mmol/L)=(各组吸光度/校准液吸光度)
×校准液浓度,葡萄糖消耗量(GC)=未接种细胞培养
液中葡萄糖含量-各组细胞上清液中葡萄糖含量。
2.2.4 胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗实验 将
处于对数生长期的细胞消化后,同上法将细胞接种
到96孔板中,待细胞单层贴壁后,更换含有胰岛素浓
度为10-6 mol/L的DMEM高糖培养液,于细胞培养箱
中孵育24 h,以建立高胰岛素抵抗细胞模型 [4]。实验
设空白对照组、阳性药组即盐酸二甲双胍组(终剂
量为10-3mol/L)、不同浓度给药组(终剂量分别为0.25、
0.2、0.15、0.1、0.075、0.05、0.025 mg/mL)。弃去培养液,
给药组加入不含血清且不同浓度的含药培养基,空
白对照组则加入不含血清的培养基。于细胞培养箱
中孵育24 h后,用葡萄糖测定试剂盒检测培养上清
液中的葡萄糖含量,计算各组细胞的葡萄糖消耗量。
2.2.4 CCK8实验 葡萄糖消耗实验结束后,每孔加
入10 μLCCK8,放入37℃恒温箱中,反应1 h后取出
置于酶标仪中检测,波长设定为450 nm,测定吸光
度值,记录数值并进行相应的统计学分析。
2.3 统计学方法 结果均以(x±s)表示,数据处理
使用SPSS 19.0统计学软件进行单因素方差分析,组
内比较采用Duncans检验。
3 结果与分析
3.1 HepG2细胞葡萄糖消耗实验 实验结果显示,
相同浓度下乙酸乙酯部位细胞存活率明显小于其
他3个大孔树脂部位。4个不同提取部位在用于实验
的浓度中呈现浓度越高,细胞存活率越低的趋势。当
浓度降低至0.25mg/mL时,乙酸乙酯部位细胞存活率
为85.05%,其余三个大孔树脂部位均大于95%。故设
置实验终浓度为0.25、0.20、0.15、0.10、0.075、0.05、
0.025 mg/mL。(见图1)
图 1 HepG2细胞葡萄糖消耗实验
3.2 各提取部位对HepG2细胞葡萄糖消耗的影响
与空白对照组相比,尖叶假龙胆乙酸乙酯部位高浓
度(250 μg/mL、200 μg/mL)具有促进正常HepG2细胞
葡萄糖消耗作用,分别可使细胞葡萄糖消耗增加26.
123%(P<0.01)与20.449%(P<0.01),但效果不及盐
酸二甲双胍(P<0.01);其余提取部位对正常HepG2细
胞的糖消耗均无明显影响。(见表1)
表 1 各提取部位对正常 HepG2细胞糖消耗的影响 (x±s)
组别 剂量(μg/mL-1)CCK-8(A450) GC(mmol/L-1) /CCK-8(mmol/L-1)
空白组 0 1.247±0.008 2.109±0.021 1.692±0.029
盐酸二甲双胍组 165 1.174±0.007 2.946±0.065 2.510±0.063
乙酸乙酯 250 1.072± .031 2.285±0.052 2.134±0.110ab
200 1.146±0.002 2.335±0.040 2.038±0.040ab
150 1.159±0.009 1.964±0.073 1.694±0.070
100 1.179±0.004 1.980±0.064 1.679±0.062
75 1.181±0.008 1.987±0.037 1.683±0.039
50 1.182±0.009 1.971±0.021 1.668±0.032
25 1.180±0. 06 1.985±0.032 1.682±0.036
大孔树脂95% 250 1.083±0.037 1.809±0.046 1.671±0.038
200 1.088± .052 1.820±0.073 1.676±0.102
150 1.033± .014 1.754±0.037 1.699±0.052
100 1.011± .018 1.739±0.037 1.720±0.037
75 1.111±0.059 1.794±0.031 1.618±0.055
50 1.058± .018 1.810±0.006 1.711±0.026
25 1.093± .048 1.773±0.043 1.624±0.053
大孔树脂70% 250 1.155±0.029 1.916±0.031 1.659±0.032
200 1.235±0.021 2.098±0.080 1.700±0.070
150 1.216±0.009 1.985±0.079 1.632±0.071
100 1.227±0.012 2.079±0.075 1.695±0.068
75 1.203±0.009 2.033±0.074 1.690±0.072
50 1.199±0.005 2.040±0.035 1.703±0.026
25 1.201±0.007 2.003±0.059 1.665±0.050
大孔树脂30% 250 1.207±0.053 2.064±0.048 1.713±0.102
200 1.083± .035 1.833±0.050 1.693±0.038
150 1.089± .048 1.827±0.010 1.681±0.077
100 1.015± .015 1.874±0.045 1.696±0.045
75 1.115±0.022 1.916±0.077 1.720±0.038
50 1.099± .046 1.865±0.055 1.699±0.083
25 1.153±0.030 1.946±0.088 1.688±0.070
注:与空白组相比,aP<0.01;与盐酸二甲双胍相比,bP<
0.01。
3.3 各组提取部位对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖
消耗的影响 尖叶假龙胆的4个提取部位中,除大
孔树脂30%部位外,其余3个部位的前5个实验浓度
(250、200、150、100、75 μg/mL-1)均可显示出不同程
度的改善HepG2细胞胰岛素抵抗的作用。其中,乙酸
乙酯提取部位中,前5个浓度(250、200、150、100、
75 μg/mL)均可使细胞葡萄糖消耗量明显增加,250、
15
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200、150、100 μg/mL与空白组比较差异有统计学意
义(P<0.01),分别可使细胞葡萄糖消耗增加36.766%、
21.700%、20.525%、15.135%,以上浓度组相比,差异
无统计学意义(P<0.05);75 μg/mL与空白组比较差异
有统计学意义(P<0.05),可使细胞葡萄糖消耗增加
11.196%;但效果均不及盐酸二甲双胍组(P<0.01);
其余浓度与空白组相比差异不明显。大孔树脂95%部
位中,前5个浓度(250、200、150、100、75μg/mL)均可使
细胞葡萄糖消耗量明显增加,250、200、150、100μg/mL
与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),分别可使
细胞葡萄糖消耗增加29.855%、19.903%、19.558%、
12.785%,且250 μg/mL与其他各相比差异有统计学
意义(P<0.01);75 μg/mL与空白组比较差异有统计
学意义(P<0.05),可使细胞葡萄糖消耗增加8.293%;
但效果均不及盐酸二甲双胍组(P<0.01);其余浓度与
空白组相比差异不明显。大孔树脂70%部位前4个浓
度(250、200、150、100 μg/mL)均可使细胞葡萄糖消
耗量明显增加,250、200 μg/mL与空白组比较,差异
均有统计学意义(P<0.01),分别可使细胞葡萄糖
消耗增加12.992%、11.472%,以上两浓度组相比,
差异无统计学意义;150、100μg/mL与空白组比较,差
异均有统计学意义(P<0.05),分别可使细胞葡
萄糖消耗增加8 .779%、8.846%,但效果均不及盐
酸二甲双胍组(P<0.01);其余浓度与空白组相比差
异不明显。大孔树脂30%部位中所有实验浓度与空
白组比较,差异均无统计学意义。(见表2)
表 2 各提取部位对胰岛素抵抗 HepG2细胞葡萄糖消耗的
影响 (x±s)
组别 剂量(μg/mL-1)CCK-8(A450) GC(mmol/L-1)GC/CCK-8(mmol/L-1)
空白组 0 1.204± .003 1.717±0.017 1.447±0.017
盐酸二甲双胍组 165 1.174±0.007 2.946±0.073 2.510±0.063
乙酸乙酯 250 1.194±0.006 2.341±0.069 1.979±0.064bc
200 1.204±0.010 2.142±0.085 1.761±0.068bc
150 1.198±0.005 2.115±0.133 1.744±0.104bc
100 1.192±0.004 1.992±0.024 1.666±0.024bc
75 1.197±0.011 1.923±0.006 1.609±0.019ac
50 1.189±0.013 1.784±0.011 1.506±0.013
25 1.202±0.008 1.793±0.010 1.496±0.022
大孔树脂95% 250 1.195±0.003 2.234±0.028 1.879±0.032bc
200 1.196±0.003 2.071±0.037 1.735±0.029bc
150 1.180±0. 12 2.029±0.031 1.730±0.041bc
100 1.199±0.005 1.940±0.048 1.632±0.052bc
75 1.197±0.001 1.885±0.038 1.567±0.032ac
50 1.191±0.006 1.829±0.067 1.542±0.050
25 1.189±0.001 1.765±0.025 1.489±0.021
大孔树脂70% 250 1.187±0.005 1.938±0.034 1.635±0.030bc
200 1.194±0.003 1.907±0.068 1.613±0.048bc
续表2:
组别 剂量(μg/mL-1)CCK-8(A450) GC(mmol/L) GC/CCK-8(mmol/L)
150 1.175±0.002 1.850±0.038 1.574±0.031ac
100 1.204±0.001 1.883±0.033 1.575±0.011ac
75 1.202± .001 1.842±0.062 1.522±0.055
50 1.202±0.001 1.779±0.033 1.506±0.051
25 1.201±0.001 1.765±0.039 1.473±0.030
大孔树脂30% 250 1.187±0.014 1.852±0.086 1.588±0.091
200 1.200±0. 06 1.870±0.007 1.557±0.012
150 1.182±0.002 1.867±0.029 1.585±0.023
100 1.185±0.005 1.813±0.020 1.529±0.014
75 1.190±0. 09 1.776±0.023 1.493±0.027
50 1.193±0.002 1.778±0.050 1.492±0.043
25 1.202±0.005 1.776±0.027 1.484±0.026
注:空白组相比,aP<0.05;与空白组相比,bP<0.01;与盐酸
二甲双胍组相比,cP<0.01。
4 讨 论
胰岛素参与调节糖代谢,控制血糖平衡。胰岛素
抵抗现象是指各种原因使胰岛素促进葡萄糖摄取和
利用的效率下降,机体代偿性的分泌过多胰岛素产
生高胰岛素血症,以维持血糖的稳定[4]。一般而言,胰
岛素抵抗主要发生于肝脏及外周组织[5],HepG2细胞
来源于肝细胞,系一种表型与肝细胞极为相似的肝
胚胎瘤细胞株,保留了肝细胞的许多生物学特性,其
表面含有高亲和力的胰岛素受体,能够满足典型胰
岛素受体的要求,故本实验选择HepG2细胞建立胰
岛素抵抗的细胞模型。
本实验利用体外含较高浓度胰岛素的高糖培养
基诱导HepG2细胞产生胰岛素抵抗模型,首次研究
了尖叶假龙胆不同提取部位对胰岛素抵抗HepG2细
胞糖代谢的影响。结果表明尖叶假龙胆的4个不同提
取部位中,只有乙酸乙酯高剂量的2个浓度组可使细
胞葡萄糖消耗增加,但与盐酸二甲双胍组比较效果相
差较大。其余部位的各个浓度均对正常HepG2细胞的
糖消耗均无明显影响。乙酸乙酯部位,大孔树脂95%
部位,大孔树脂70%部位对胰岛素抵抗HepG2细胞葡
萄糖消耗均有较明显的促进作用,且呈现乙酸乙酯
组>大孔树脂95%部位>大孔树脂70%部位,高浓度>
低浓度的趋势。大孔树脂30%部位无明显促进作用。
尖叶假龙胆在我国民族用药中历史较为悠久,
但较少运用于糖尿病的治疗。值得一提的是,本研究
表明,尖叶假龙胆治疗胰岛素抵抗活性成分可能集
中在极性较小的成分,并提示其对胰岛素抵抗的HepG2
细胞的有一定治疗潜力,其乙酸乙酯部位对正常
HepG2细胞葡萄糖的消耗也具有一定促进作用。预
示着尖叶假龙胆可能是防治胰岛素(下转第20页)
16
2016年6月第22卷第12期 June.2016 Vol.22 No.12
抵抗疾病的一个非常有前景的研究对
象,对其研究,不仅能够对尖叶假龙胆的开发起到
推动作用,也能为其未来开发成保健品及药品提供
理论依据。
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(收稿日期:2015-11-04 编辑:李海洋)
膝为使药,苦善降泄,能导热下泄,引血下行。
现代药理研究表明,金银花中多种成分均有抗
菌作用,其中黄酮类物质对各类肠道致病菌有着显
著的抵抗或抑制效用[12];连翘中的连翘酯苷具有广
谱抗菌、解热、抗炎等作用[13]。白头翁具有抗肿瘤、增
强免疫功能、抗炎、抗病原微生物及治疗内毒素血症
等作用[14-15]。白术可以调节胃肠运动,还能抗溃疡、增
强免疫力。败酱草具有抑菌抗炎、镇静、镇痛等作用。
苦参、黄柏、苍术、仙鹤草也均有抗炎抑菌的作用,仙
鹤草还可以通过改善微循环,减轻黏膜炎症,加速黏
膜修复[16]。
本实验参照韩磊等[17]研究结果,选用9.0 Gy造
出适合临床急性放射性肠炎肠黏膜屏障损伤防治研
究的急性放射性肠炎动物模型。本实验结果显示,肠
复康方能改善急性放射性肠炎大鼠的黏液便或稀烂
便、精神状态、饮食进水、体质量变化等一般情况。
HE染色是目前最基本、应用最广泛的显示组织结构、
细胞形态的染色方式。本实验从组织形态学证实了
肠复康方可显著改善急性放射性肠炎大鼠小肠黏膜
的损伤程度,降低小肠黏膜的炎症反应,促进急性放
射性肠炎受损肠黏膜的修复。这种作用与药物的剂
量有关,剂量过低时疗效一般,达到中剂量时疗效增
强,但再增加剂量疗效又随之降低。肠复康方低剂量
为临床等效剂量,低、中、高剂量比例为1:2:4,高剂
量组大鼠的一般情况及体质量变化不及中剂量组,
考虑与剂量过高,浓度过高,大鼠肠道吸收达到饱
和,使药物不能充分发挥作用有关[18],但具体机制尚
不明确,有待进一步研究探讨。
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(收稿日期:2016-02-19 编辑:蒋凯彪)
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