全 文 ：肝癌的发病率和死亡率均占癌症中的第二
位，国内外普遍采用手术、放疗和化疗相结合的手
段治疗，效果较好，但毒副作用大。 如何更加有效
地治疗肝癌， 提高患者的生存期和生活质量至关
重要，中药在这方面起到重要作用 ［1］。
田基黄，味甘、微苦，性凉，归肝、胆、大肠经，
具有清热利湿，消肿解毒之功效。现代药理研究表
明具有保肝、抗肿瘤、调节免疫功能、抗病毒、抗氧
化、止血等作用 ［2］。 作为我国传统中药，田基黄在
民间用途十分广泛，用于治疗肝炎、阑尾炎等，疗
效确切。 目前田基黄已被提炼制成针剂用于临床
急、慢性肝炎，并取得了较好的疗效。 我们前期的
研究表明 ， 水煎提取的田基黄能有效地抑制
HepG2 细胞增殖 ［3］。 本实验拟通过系统分级萃取
田基黄，得到不同的提取部位，观察田基黄在体外
条件下对人 HepG2 细胞的影响，以探讨其在肝癌
治疗中的可能应用价值。
1 材料与方法
1.1 田基黄不同提取部位的药物制备 田基黄
购自福建同春药业股份有限公司（产地：福建，批
号：080817）， 经福建中医药大学药学院中药鉴定
教研室鉴定为藤黄科金丝桃属植物地耳草 Hyper-
icum japonicum Thumb 的干燥全草。田基黄粉碎后
烘干称重，以 95%乙醇浸泡 2 h 后经 2 次回流后，
抽滤浓缩合并滤液，50℃旋转蒸发后置蒸发皿上
蒸干得浸膏。浸膏水溶解后依次以石油醚、二氯甲
烷、乙酸乙酯、正丁醇 4 种有机溶剂进行分级萃取
［4］，置蒸发皿上蒸干得各部位提取物浸膏，分别称
取 50 mg 提取部位浸膏溶于含 50 μL DMSO 的 1
mL PBS 中（0.01 M，Ph7.2），配成 50 mg ／mL 母液，
经 0.22 μm 微孔过滤器过滤除菌后分别标记为药
液 I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，4℃冰箱保存待试，实验前以完全
培养基稀释成所需浓度。 实验分组如下：A 组（空
白对照组 ，0.5%DMSO 的完全培养基 ）；B 组 （0.5
mg ／mL药液 I）；C组（0.5 mg ／mL 药液Ⅱ）；D 组（2.5
mg ／mL药液Ⅲ）；E 组（2.5 mg ／mL 药液Ⅳ）。
1.2 细胞株 人肝癌细胞株 HepG2，购自中科院
上海生化所细胞库。
1.3 实验试剂 DMEM 高糖培养液、 胰蛋白酶
（trypsin）、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、PBS
（0.01M，Ph7.2）等购自 Hyclone 公司；四甲基偶氮
唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）干粉、台盼
蓝，Sigma 公司。
1.4 实验仪器 ELX800酶标仪（BioTek 公司）；二
氧化碳培养箱（德国 Heraeus）；超纯水装置（MILLI
-Q 公司）；IX70 荧光倒置相差显微镜（日本 OLYM-
PUS）。
田基黄不同提取部位对人肝癌细胞 HepG2生长的抑制作用
庄群川 1，2，林久茂 1，2，李 晶 3，赵锦燕 1，2，魏丽慧 1，2，赖发泽 1，林心灯 1，彭 军 1，2
（1. 福建中医药大学，福建 福州 350108；2. 福建中西医结合研究院，福建 福州 350108；
3. 福建卫生职业技术学院，福建 福州 350101）
摘 要： 目的 探讨田基黄不同提取部位对人肝癌细胞 HepG2 生长的抑制作用。 方法 田
基黄以不同极性的有机溶剂进行较系统的分级萃取得到不同的提取部位 。 体外培养人肝癌细胞
HepG2 细胞株，用倒置相差显微镜观察细胞在田基黄不同提取部位的作用后在形态学变化，用 MTT
法检测在不同的作用时间下，不同提取部位对人肝癌细胞 HepG2 生长的抑制作用，计算细胞存活率。
结果 一定浓度的石油醚提取部位，二氯甲烷提取部位，乙酸乙酯提取部位，正丁醇提取部位均会抑
制肝癌细胞 HepG2 的生长，且呈剂量依赖性。 结论 四种田基黄提取部位能有效的抑制人肝癌细
胞 HepG2 的生长。
关键词：田基黄；肝癌；HepG2；萃取；提取部位；生长抑制
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1004-5627（2011）02-0033-04
收稿日期：2010-05-26
基金项目：福建省高校中西医结合基础重点实验室开放课题基金资助（ZXY2008003），陈可冀中西医结合发展基金资助（CKJ2008007），福
建省教育厅科技项目 A 类资助（JA10169），福建省卫生厅青年科研课题资助（2010-1-39）
作者简介：庄群川（1981—），男，理学硕士，主要从事细胞与分子生物学研究。
通讯作者：彭军（1969—），男，理学博士，硕士生导师。 E-mail：pjunlab@hotmail.com
Journal of Fujian University of TCM April 2011，21（2）
福建中医药大学学报 2011 年 4 月 第 21 卷 第 2 期
33
DOI:10.13261/j.cnki.jfutcm.002476
图 1 田基黄 4 种提取部位对 HepG2 细胞形态的影响（×100）
注：A 空白对照组；B 药液Ⅰ组；C 药液Ⅱ组；D 药液Ⅲ组；E 药液Ⅳ组
1.5 实验方法
1.5.1 细胞培养 将人肝癌细胞 HepG2 置于含
10%的胎牛血清（FBS）的 DMEM 高糖培养基中 ，
于 37℃，5% CO2 饱和湿度的细胞培养箱中培养。
取传代数少于 20 代的对数生长期细胞用于实验。
1.5.2 细胞形态学观察 HepG2 细胞培养 24 h
后加入一定浓度的各组提取部位的药液进行干预
24 h，用倒置显微镜下观察细胞的形态变化。
1.5.3 活细胞计数 台盼蓝配成 0.4%，使用时与
细胞悬液以 1：1 混合，1 min 左右可看到死细胞被
染上蓝色，活细胞拒染。
1.5.4 MTT 法测定细胞存活率 取对数生长期
的人肝癌细胞 HepG2， 用 0.25%胰酶消化并收集
细胞。 以 DMEM 高糖培养基（含 10%FBS）制成细
胞悬液， 进行细胞计数， 调整细胞密度为 5×105
个 ／mL，接种于 96 孔培养板中，每孔 100 μL，常规
培养 24 h，使细胞同步化后加药干预。 每组均设 8
个复孔。 继续培养 24 h，吸弃各孔中的液体，每孔
加入 0.5 mg ／mL 的 MTT 溶液 100 μL，37℃孵育 4
h，然后吸弃各孔中的液体，各加入 100 μL DMSO，
振荡混匀，室温放置 10 min，使结晶充分溶解并混
匀， 于全自动酶标仪 570 nm 测定各组吸光度值
（即 OD 值），并按下列公式计算，细胞存活率＝实
验组吸光度值 ／对照组平均吸光度值×100%。
2 结 果
2.1 田基黄不同提取部位对 HepG2 细胞形态的
影响 倒置显微镜下观察，对照组 HepG2 细胞胞
质均匀，核仁清楚，伸展性好，生长良好，有多层生
长现象，形成贴壁的梭形细胞，见图 1-A。 药物干
预后的细胞折光性差，生长缓慢，部分或全部细胞
变圆，贴壁疏松。 比如，细胞在 0.5 mg ／mL 的田基
黄提取部位 I、II 干预 24 h 后部分或全部细胞变
圆，贴壁疏松甚至成片悬浮，见图 1-B、图 1-C。 当
用 2.5 mg ／mL 的提取部位 III、IV 干预细胞 24 h
后，细胞呈现不同程度的生长受抑制现象，细胞形
态出现变圆，紧缩，稀松或呈单层细胞，见图 1-D、
图 1-E。上述结果显示田基黄不同提取物对 HepG2
细胞的生长有明显的抑制作用。
2.2 MTT 法测定田基黄不同提取部位对细胞存
活率的影响 田基黄不同提取部位干预细胞后，细
胞存活率发生变化，并具有剂量依赖性。随着剂量
的升高，细胞存活率明显降低，见图 2。 此外，实验
结果显示， 不同的提取部位作用细胞的有效成分
含量不一样，不同提取部位的 IC50，见表 1。
3 讨 论
目前国内外对田基黄的研究大多数停留在对
福建中医药大学学报 第 21卷34
表 1 田基黄不同提取部位 IC50
组 别
石油醚（Ⅰ）
二氯甲烷（Ⅱ）
乙酸乙酯（Ⅲ）
正丁醇（Ⅳ）
IC50 ／ （mg ／mL）
0.14
0.152
1.1
0.98
其化学成分的分离上 ［5-8］和抗炎方面 ［9］，而对其抗
肿瘤方面的研究甚少。研究报道，田基黄对人舌癌
症细胞株 TSCCa 有明显的杀伤作用， 使原发性肝
癌患者病灶缩小 ［10］，对人喉癌 Hep-2、宫颈癌 Hela
细胞株也有抑制作用 ［11－12］，其抑制及杀伤作用与
药物浓度和作用时间， 与线粒体超微结构受损程
度有关。 细胞内线粒体和粗面内质网受到严重干
扰后细胞无法生存而死亡。 这可能是田基黄具有
抗癌活性的原因。
国内外未见对田基黄进行系统提取分离并进
行抗肝癌作用分子机理研究的报道。 本研究为田
基黄在肿瘤防治的开发应用提供实验依据， 解析
田基黄促肝癌细胞凋亡的作用机理， 为其在肝癌
治疗领域研究提供了新的靶点和新的思路， 具有
一定的理论价值和实用意义。
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第 2期 庄群川等：田基黄不同提取部位对人肝癌细胞 HepG2 生长的抑制作用 35
Inhibitory Effect of Different Extract Parts from Hypericum
japonicum on Growth of Human Hepatoma Cell Line HepG2
ZHUANG Qunchuan1,2, LIN Jiumao1,2, LI Jing3, et al
(1. Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou, Fujian 350108, China;
2. Fujian Academy of Integrative Medicine, FUTCM, Fuzhou, Fujian 350108, China;
3. Fujian Health College, Fuzhou, Fujian 350101, China)
ABSTRACT: Objective To explore the inhibitory effect of different extract parts from Hypericum
japonicum on human hepatoma cell line HepG2. Methods Hypericum japonicum was suspended in 95%
ethanol, and then extracted successively with petroleum ether, methylene chloride, ethyl acetate and n-butanol.
Human hepatoma cell line HepG2 were cultured in vitro and treated with different extract parts from
Hypericum japonicum, then cellular morphology was observed via phase -contrast microscopy, and the cell
viability was determined by MTT assay. Results The four extract parts from Hypericum japonicum with a
certain concentration inhibited the growth of human hepatoma cell line HepG2 in a dose dependent manner.
Conclusion The four extract parts from Hypericum japonicum can inhibit the growth of human hepatoma cell
line HepG2 effectively.
KEY WORDS: Hypericum japonicum; hepatoma; HepG2; extract; extract parts; growth inhibition
灵芝为多孔菌科真菌赤芝 Ganoderma lucidum
（Leyss.ex Fr.）Karst．或紫芝 Ganoderma sinense Zhao，
Xu et Zhang 的干燥子实体 ［1］。灵芝始载于《神农本
草经》，被列为上品，是典型的药食两用类药品，为
多孔菌科灵芝亚科灵芝属灵芝的干燥子实体。 现
代药理研究显示其具有抗肿瘤、 免疫调节、 抗辐
射、清除自由基、调节血脂、平喘、保肝等广泛的药
理作用。 其主要成分为三萜类、多糖类、氨基酸类
和肽类等。实验研究表明，灵芝多糖具有免疫调节
作用， 对氧自由基的产生和红细胞脂质过氧化反
应均有抑制作用，能清除羟自由基。水提醇沉等传
统提取工艺粗，多糖得率低、含量少 ［2-3］。 超声-微
波协同法用于中草药有效成分提取已经得到了较
广泛的应用，但未见到用于灵芝多糖提取的报道。
本文以多糖提取率为检测指标， 采用苯酚硫酸法
测其含量，以正交试验确定多糖提取的最佳工艺。
1 仪器与试药
1.1 仪器 CW-2000 型超声-微波协同萃取仪
（新拓微波溶样测试技术有限公司）；RE-2000 旋
转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；中草药粉碎机
超声-微波协同萃取灵芝多糖最佳工艺研究
张玉朝，李小艳，宋 强，吴水生
（福建中医药大学药学院，福建 福州 350108）
摘要： 目的 获得超声-微波协同萃取灵芝多糖最佳工艺。 方法 以苯酚-硫酸法测定灵芝
多糖的含量，用正交试验考察灵芝多糖的最佳提取工艺。 结果 灵芝多糖的最佳提取工艺是提取
温度 75℃、料液比 1：10、浸提时间 30 min，在此条件下灵芝多糖的提取率为 0.95%。 结论 利用超
声-微波协同萃取灵芝多糖省时，提取率高，该方法为提取灵芝多糖提供了新途径。
关键词：灵芝多糖；超声-微波协同萃取；苯酚-硫酸法；正交试验
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1004-5627（2011）02-0036-03
收稿日期：2010-10-22
作者简介：张玉朝（1985—），男，方剂学硕士研究生，主要从事中药复方物质基础研究。
通讯作者：吴水生（1965—），男，教授，博士生导师。 E-mail：wsstcm@yahoo.com.cn
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Journal of Fujian University of TCM April 2011，21（2）
福建中医药大学学报 2011 年 4 月 第 21 卷 第 2 期
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