全 文 ：第 33 卷第 5 期
2014 年 10 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Ｒesources
Vol． 33 No． 5
Oct． 2014
收稿日期:2014 － 04 － 28
基金项目:本项目获山东中医药大学 2013 年 SＲT资助。
作者简介:韩晨晨，山东中医药大学 2011 级中药学专业本科生。
* 通讯作者:高德民，博士，副教授，研究方向:中药资源与质量控制。E-mail:gdm0115@ 163． com。
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2014． 05． 008
有柄石韦中黄酮类成分的分离纯化工艺的研究
韩晨晨1，程丹丹1，张颖颖2，高德民1*
(1．山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355;2．山东中医药大学 基础医学院，山东 济南 250355)
摘 要 通过正交试验对有柄石韦中黄酮类成分分离纯化工艺进行研究，为有柄石韦的深入开发利用提供基础材
料。以黄酮得率为指标，通过单因素和正交试验，对有柄石韦中多糖提取的工艺参数进行优化。在黄酮纯化中影
响因素的大小顺序为:萃取溶剂 ＞萃取次数 ＞溶剂用量 ＞萃取时间。有柄石韦中黄酮分离纯化的最佳工艺参数组
合为:萃取溶剂为正丁醇，萃取时间 30 min，溶剂的量为 200 mL，萃取 4 次。实验验证该工艺可行，稳定。
关键词 有柄石韦;黄酮类成分;分离工艺; 正交试验
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2014)05 － 0029 － 02
Study on Separation and Purification of Flavonoids in
Pyrrosia petiolosa(Christ)Ching
Han Chenchen1，Cheng Dandan1，Zhang Yingying2，Gao Demin1*
(1． School of Pharmacy，Shandong University of TCM，Jinan 250355，China;2． School of Basic Medical
Science，Shandong University of TCM，Jinan 250355，China)
Abstract The purification of flavonoids from Pyrrosia petiolosa (Christ)Ching was studied through or-
thogonal experiment，and this will provide a basis material for further development and utilization． The
purification process parameters for flavonoids were optimized by the single factor and the orthogonal exper-
iment． The factors were as follows:extraction solvent ＞ extraction times ＞ solvent dosage ＞ extraction time．
The optimum conditions were:extraction solvent is n-butanol，extraction time is 30 min，the amount of sol-
vent is 200 mL，extracted four times． The method is proved to be stable and feasible．
Key words Pyrrosia petiolosa (Christ)Ching;flavonoids;separation processes;orthogonal experiment
中药石韦为水龙骨科(Polypodiaceae)植物石韦属
(Pyrrosia)有柄石韦的地上部分［1］。性甘、苦，微寒。
归肺、膀胱经。具利水通淋，清肺泄热之功效，可治淋
痛，尿血，尿路结石，肾炎，崩漏，痢疾，肺热咳嗽，慢性气
管炎，金疮，痈疽等［2］。石韦煎剂对金黄色葡萄球菌、
变形杆菌、大肠杆菌等有不同程度的抑制作用［3］。临
床中用石韦治疗支气管哮喘、慢性支气管炎、急、慢性
肾炎及肾盂肾炎等疾病，具有较好的效果。
黄酮类化合物是天然的抗氧化剂，具有清除人
体中超氧离子自由基的生理活性，且具有抗癌、抗衰
老和抗氧化等多种药理作用，因此对有柄石韦中黄
酮类成分提取纯化工艺的探讨具有重要意义。
1 仪器与试剂
1． 1 材料
有柄石韦(购自建联中药店)。
1． 2 主要试剂
芦丁对照品(生化试剂，上海阿拉丁试剂有限
公司) ，乙酸乙酯、正丁醇、乙醚(天津市富宇精细化
工有限公司)和石油醚(天津市达森化工产品销售
有限公司)均为分析纯。95% 乙醇、亚硝酸钠
(AＲ)、氢氧化钠(AＲ)、三氯化铝(AＲ)。
1． 3 仪器
DS － T250高速多功能粉碎机(上海市顶帅工贸
有限公司) ;SHB － III 循环水多用真空泵(菏泽市鑫
—92—
中 国 野 生 植 物 资 源 第 33 卷
源仪器仪表有限公司) ;ＲE52AA旋转蒸发器(菏泽市
鑫源仪器仪表有限公司) ;HH － S 数显恒温水浴锅
(济南启科仪器设备有限公司) ;PS －40A超声波清洗
机(深圳市超艺达科技有限公司) ;754PC紫外 －可见
分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)。
2 方法与结果
2． 1 黄酮类成分的分离纯化
取药材洗净，自然风干，粉碎机粉碎后过 40 目
筛，称量 270 g。将有柄石韦置于烧杯中用石油醚浸
泡过夜。将药液抽滤，向药渣中加入 70%浓度的乙
醇［4］超声，回流浸提，抽滤得滤液，滤液减压浓缩并
回收乙醇，得浸膏。浸膏在水浴锅上蒸干，水溶浸膏
并用石油醚多次萃取，下层平均分成 9 份，待用，水
溶后分别用乙酸乙酯、正丁醇、乙醚在不同因素下萃
取，分离时各因素水平如下表［5 － 6］:
表 1 因素水平表
水平
A 萃取
溶剂
B萃取时间
t /min
C溶剂的量
v /mL
D萃取次数
n /次
1 乙酸乙酯 30 100 2
2 正丁醇 60 200 4
3 乙醚 90 240 6
表 2 L9(3
4)正交试验设计及结果分析
试验号
因素
A B C D
总黄酮的
浓度(g /L)
总黄酮的
提取量(g)
1 1 1 1 1 3． 374 0． 1687
2 2 1 2 2 8． 034 0． 4017
3 3 1 3 3 1． 553 0． 0777
4 1 2 2 3 4． 901 0． 2451
5 2 2 3 1 7． 176 0． 3588
6 3 2 1 2 1． 430 0． 0715
7 1 3 3 2 5． 051 0． 2525
8 2 3 1 3 7． 839 0． 3920
9 3 3 2 1 1． 521 0． 0761
K1 0． 6663 0． 6481 0． 6322 0． 6036
K2 1． 1525 0． 6754 0． 7229 0． 7257
K3 0． 2253 0． 7206 0． 689 0． 7148
k1 0． 2221 0． 2160 0． 2107 0． 2012
k2 0． 3842 0． 2251 0． 2410 0． 2419
k3 0． 0751 0． 2402 0． 2230 0． 2383
Ｒ 0． 3091 0． 0242 0． 0303 0． 0407
将分别用乙酸乙酯、正丁醇、乙醚萃取得到的黄
酮提物旋蒸后置于水浴锅上蒸干，称重。
2． 2 黄酮类成分的测定
准确称取芦丁对照品 3． 5 mg，用 70%乙醇溶解
并定容至 50 mL，摇匀得浓度为 0． 070 0 g /L标准溶
液。用该溶液配制十份不同梯度浓度的标准溶液，
并显色，用紫外可见光分光光度计在 510 nm处测量
吸光值。以浓度对吸光度值做标准曲线［7］。，所得
黄酮回归方程为，y = 6． 8302x + 0． 0052;r = 0． 9997
同样方法测定九份样品提取物的吸光度。由回归方
程及稀释的关系计算出每份中黄酮浓度及含量。结
果见表 2。
3 结 论
3． 1 结果分析
由表 2 可知，4 个因素对分离纯化效果影响的
主次顺序为萃取溶剂 ＞萃取次数 ＞萃取溶剂用量 ＞
萃取时间。萃取溶剂和萃取次数是主要影响因素，
萃取时间和每次萃取溶剂的量次之。故应选
A2B1C2D2 为分离纯化的最佳方案。
3． 2 验证试验
根据正交试验结果对 A2B1C2D2 条件进行 3 次
实验，结果无显著差异。本次试验最佳分离纯化工
艺为 200 mL的正丁醇萃取 4 次，每次萃取 30 min。
4 讨 论
本研究以中药有柄石韦为研究对象，采用乙醇热
回流法提取其中的总黄酮，并用不同的有机溶剂萃取
分离，并运用紫外分光光度法在波长 510 nm处对黄酮
含量进行了测定。通过正交试验法对提取工艺条件进
行优化，并进行了验证试验，结果显示最佳提取工艺为
200 mL的正丁醇，萃取 4次，每次萃取 30 min。
研究表明，黄酮类化合物具有抗过敏、降血压、
抗炎、抗菌、抗突变、抗溃疡、抗病毒、保肝和降血脂
等活性［8］。黄酮作为重要的药效成分在有柄石韦
中有着丰富的种类和较高的含量。本研究对有柄石
韦中黄酮类成分分离纯化工艺进行优选，以使石韦
中黄酮类有效成分能够充分的被人类利用，同时提
高了石韦资源的利用率，减少了不必要的浪费，对于
建设资源节约型社会具有重大的意义，为进一步对
黄酮类成分的理化性质的研究提供有利的条件。
参考文献:
［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会． 中国植物志:第 62 卷
［M］．北京:科学出版社，2000:116．
［2］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［S］． 北京:化学
工业出版社，2000:68．
［3］ 陈 露，刘布鸣，马军花，等． 中药石韦的研究概况［J］． 广西医
学，2011，33(11) :1486 － 1489．
［4］ 邓源喜，李妍，许晖，等．荷叶中黄酮提取及测定方法的研究进
展［J］．饲料研究，2011(5) :18 － 20．
［5］ 王自军，杨红兵，齐誉，等．正交设计研究石韦总黄酮和鞣质提
取工艺［J］．时珍国医国药，2007，18(2) :463 － 464．
［6］ 易俗，王瑞兰，谭新中，等． 庐山石韦总黄酮的提取工艺初探
［J］．湘潭师范学院学报，2004，26(1) :76 － 78．
［7］ 马陶陶，张群林，李俊．中药总黄酮的含量测定方法［J］安徽医
药，2007，11(11) :1030 － 1032．
［8］ Parellade J，Guinea M． Flavonoid inhibitors of typsin and leucine
aminopeptidase:A proposed mathematical model for IC50 Estima-
tion［J］． J Nat Prod，1995，58(6) :823 － 829．
—03—