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2016,45(1): 13～16.
Subtropical Plant Science
有柄石韦醇提物抗氧化活性研究
丁文慧，种贝贝，邵 尉，高德民
(山东中医药大学药学院，山东 济南 250355)

摘 要：通过 DPPH 自由基清除测定、还原能力、总抗氧化能力、羟自由基清除测定，评价有柄石韦 Pyrrosia
petiolosa 醇提物的抗氧化活性。结果显示，有柄石韦醇提物清除 DPPH·的 IC50为 75.82 μg·mL-1，清除·OH 的
IC50为 46.30 μg·mL-1。有柄石韦醇提物清除 DPPH· 的能力强于抗坏血酸，清除·OH 的能力弱于抗坏血酸；同
时，其还原能力和总抗氧化能力均强于抗坏血酸。该结果说明有柄石韦醇提物具有较强的抗氧化活性。
关键词： 有柄石韦；醇提物；抗氧化活性
Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2016.01.003
中图分类号：Q946 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2016)01-0013-04

Antioxidant Activity of Extracts of Ethanol in Pyrrosia petiolosa
DING Wen-hui, CHONG Bei-bei, SHAO Wei, GAO De-min
(School of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, Shandong China)

Abstract: To study the antioxidant activity of the ethanol extraction of Pyrrosia petiolosa, DPPH
radical scavenging, reducing power, total antioxidant activity and hydroxyl radical scavenging assay
were determined. The results showed that the IC50 of the DPPH· and ·OH radical scavenging were
75.82 and 46.30 μg·mL-1, respectively. Compared with the ascorbic acid, the ability of DPPH free
radical scavenging was higher, while the ·OH radical scavenging activity was lower. It indicated that
the ethanol extraction of P. petiolosa had strong antioxidant activity.
Key words: Pyrrosia petiolosa; alcohol extract; antioxidant activity

有柄石韦 Pyrrosia petiolosa 为水龙骨科 Polypodiaceae 石韦属植物，始载于《神农本草经》，性味甘、
苦，微寒，有利尿通淋、清肺止咳、止血等功效。临床上常用于小便不通，淋沥涩痛，肺热咳嗽等病
症[1]。研究表明，有柄石韦富含有黄酮类、多酚、多糖、三萜类、有机酸、挥发油等多种化学成分[2—6]，
其中黄酮作为主要的化学成分之一，已得到广泛研究。黄酮具有抗氧化自由基、抗菌、抗病毒、抗肿
瘤及保护肝和心血管系统等药理活性。Ben 等[7]和 Abraham 等[8]对黄酮的抗氧化性做过一系列研究。本
试验在前人研究的基础上，采用不同方法对有柄石韦醇提物的抗氧化活性进行研究，以期为有柄石韦
临床应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
高速多功能粉碎机 DS-T250 型(上海市顶帅工贸有限公司)；RE52AA 旋转蒸发器(菏泽市鑫源仪器
仪表有限公司)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(菏泽市鑫源仪器仪表有限公司)；DZTW 型调温电热套(北
京市永光明医疗仪器厂)；KQ-250E 型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HH-S 数显恒温水
浴锅(济南启科仪器设备有限公司)；FA2004N 型电子天平(上海菁海仪器有限公司)；745PC 紫外-可见
分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)。芦丁(上海金穗生物科技有限公司)，1,1-二苯基-2-三硝基苯
收稿日期：2016-02-05
基金项目：山东中医药大学 2015 年 SRT 资助项目(2015287)
作者简介：丁文慧，本科生，药学专业。E-mail: 529389457@qq.com
注：高德民为通讯作者。E-mail: gdm607@126.com
第 45 卷 ﹒14﹒
胼(DPPH)(上海如吉生物科技发展有限公司)，抗坏血酸(天津市福晨化学试剂厂)，没食子酸(北京鼎国
昌盛生物技术有限公司)，Folin-Ciocalteu 试剂(北京鼎国昌盛生物技术有限公司)；其他试剂均为分析纯。
有柄石韦采自吉林红眼子山，经山东中医药大学高德民副教授鉴定为正品。
1.2 方法
1.2.1 样品提取 取药材粉末 100 g，石油醚脱脂后抽滤，加入 60%乙醇 800 mL，超声 15 min 并回流
提取 1 h 后，抽滤，滤液减压浓缩，浸膏蒸干。水溶浸膏，石油醚多次萃取至无色，水层蒸干得醇提物，
备用[9]。
1.2.2 总黄酮含量测定
1.2.2.1 芦丁标准曲线绘制 精密称取一定量的芦丁标准品，用 60%乙醇溶解并定容为标准液。分别吸
取不同体积芦丁标准液，用 60%乙醇定容至 6 mL，加 5% NaNO2 0.3 mL，摇匀，放置 6 min 后加 10% AlCl3
0.3 mL，摇匀，6 min 后加 1 mol·L-1 NaOH 溶液 4 mL，摇匀，静置 15 min，于 510 nm 测定吸光度。
1.2.2.2 总黄酮含量测定 精密称取一定量醇提物，用 60%乙醇定容至 50 mL，摇匀。精密量取一定体
积的样液置入试管，按 1.2.2.1 的方法测定醇提物中总黄酮含量。
1.2.3 多酚含量测定
1.2.3.1 没食子酸标准曲线绘制 精密称取一定量的没食子酸标准品，用 60%乙醇溶解并定容。分别吸
取不同体积的没食子酸标准液，用 60%乙醇定容，加 Folin-Ciocalteu 试剂 1.1 mL，摇匀，3 min 后加
10% Na2CO3，摇匀，静置 1 h 后，于 760 nm 处测定吸光度。
1.2.3.2 多酚含量测定 精密称取一定量醇提物，用 60%乙醇定容至 50 mL，摇匀。精密量取一定体积
的样液置入试管，按 1.2.3.1 的方法测定醇提物中总多酚含量。
1.2.4 抗氧化活性
1.2.4.1 DPPH 自由基清除能力测定 参照石恩慧等[10]的方法。将样液稀释至浓度分别为 40、50、60、
70、80、90、100 μg·mL-1 的水溶液，各吸取 0.1 mL，加 3.0 mL 0.1 mmol·L-1 DPPH 无水乙醇溶液，混
匀后室温避光反应 30 min，于 517 nm 处测定吸光度值 Ai。同时，空白组(A0)以等体积蒸馏水代替样品
溶液，对照组(Aj)以等体积无水乙醇代替 DPPH 溶液，以抗坏血酸作阳性对照。
DPPH·清除率= [1－(Ai－Aj) /A0] × 100%
1.2.4.2 还原能力测定 参照张艳君等[11]的方法。各取 2.5 mL 浓度分别为 10、15、20、25、30、35、
40 μg·mL-1 样品溶液，依次加入 2.5 mL 0.2 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH= 6.6)和 1% K3Fe(CN)6 溶液，摇匀，
50 ℃水浴 20 min。快速冷却，加 2.5 mL 10% 三氯乙酸(TCA)，摇匀，静置 30 min。取上清液 5 mL，
加 5 mL 蒸馏水和 1 mL 0.1% FeCl3，摇匀，静置 10 min，于 700 nm 处测吸光度。
1.2.4.3 总抗氧化能力测定 参照董晓等[12]的方法。取 0.4 mL 不同浓度样品溶液(10、20、30、40、50、
60、70、80、90 μg·mL-1)，加入 4 mL 磷钼试剂，混匀，于 95 ℃恒温水浴 90 min，冷却后，于 695 nm
波长处测吸光度。
1.2.4.4 OH 自由基清除能力测定 参照陈佳等[13]的方法。取 2.0 mL 不同浓度样品溶液 (5、10、15、20、
25、30、35、40 μg·mL-1)，加入 2.5 mmol·L-1 FeSO4 溶液和 2.5 mmol·L-1 H2O2 溶液各 2.0 mL，混匀，静
置 10 min，加 2.5 mmol·L-1 水杨酸溶液 2.0 mL，摇匀，静置 30 min，于 510 nm 处测吸光度值 Ai。同时，
空白组(A0)以等体积蒸馏水代替样品溶液，对照组(Aj)以等体积蒸馏水代替水杨酸溶液，以抗坏血酸作
阳性对照。
·OH 清除率＝[1－(Ai－Aj) /A0]×100%
2 结果与分析
2.1 总黄酮含量
以浓度 C 对吸光度 A510绘制芦丁标准工作曲线(图 1)。由图 1 可见，在 2.0～6.0 μg·mL-1 浓度范围
内，该方法线性关系较好，可用于有柄石韦总黄酮得率测定。测得总黄酮含量为 9.89 mg·g-1。
第 1 期 丁文慧,等：有柄石韦醇提物抗氧化活性研究 ﹒15﹒
2.2 总多酚含量
以浓度 C 对吸光度 A760绘制没食子酸标准曲线(图 2)。由图 2 可见，在 15.0～40.0 μg·mL-1 浓度范
围内，该方法线性关系较好，可用于有柄石韦多酚得率测定。测得多酚含量为 17.92 mg·g-1。
y＝0.0116x －0.0266
R 2＝0.9994
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0 10 20 30 40 50
浓度/μg•mL-1
吸
光
度
值
A
76
0
y ＝0.0952x ＋0.0197
R 2＝0.9909
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0
浓度/μg•mL-1
吸
光
度
值
A
51
0
图 2 没食子酸标准曲线
Fig. 2 The standard curve of gallic acid
图 1 芦丁标准曲线
Fig. 1 The standard curve of rutin
2.3 DPPH·清除能力测定
从图 3 可以看出，在 40.0～100.0 μg·mL-1 浓度范围内，随着样品浓度的增加，DPPH·的清除率升高。
抗坏血酸和醇提物清除 DPPH·的 IC50 分别为 103.13、75.82 μg·mL-1。说明样品溶液清除 DPPH·的能力
明显强于抗坏血酸。
2.4 还原能力测定
图 4 表明，在 10.0～35.0 μg·mL-1 浓度范围内，样品溶液的吸光度值随浓度的增大而增大，且同比
高于抗坏血酸的吸光度值。当浓度为 35.0 μg·mL-1 时，抗坏血酸和样品溶液的吸光度值分别为 0.364、
0.823，说明有柄石韦醇提物还原能力明显强于阳性对照。
0.0
10.0
20.0
30.0
40.0
50.0
60.0
70.0
40 50 60 70 80 90 100
浓度/μg•mL-1
清
除
率
/%
维生素C 样品

0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
10 15 20 25 30 35
浓度/μg•mL-1
吸
光
度
值
维生素C 样品

图 3 醇提物和抗坏血酸对 DPPH·的清除能力
Fig. 3 The DPPH· scavenging capacity of alcohol
extraction and ascorbic acid
图 4 醇提物和抗坏血酸的还原能力
Fig. 4 The reduction ability of alcohol extraction
and ascorbic acid


2.5 总抗氧化能力
如图 5 所示，在 10.0～90.0 μg·mL-1 浓度范围内，随着样品溶液浓度的增大，吸光度值不断增加，
且同比高于抗坏血酸的吸光度。当浓度为 90.0 μg·mL-1 时，抗坏血酸和样品溶液的吸光度值分别为
0.431、0.890，说明相对于阳性对照，有柄石韦具有更强的抗氧化能力。
2.6 ·OH 清除能力测定
图 6 显示，在 5.0～40.0 μg·mL-1 浓度范围内，样品对·OH 的清除率随着浓度的增大呈现先升高后
平稳的趋势；抗坏血酸对·OH 的清除率则不断增强。 抗坏血酸和样品清除·OH 的 IC50 分别为 23.23、
46.30 μg·mL-1。说明在一定浓度范围内，有柄石韦溶液对·OH 具有一定的清除能力，但其清除能力要弱
于抗坏血酸。
第 45 卷 ﹒16﹒
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
10 20 30 40 50 60 70 80 90
浓度/μg•mL-1
吸
光
度
A
69
5n
m
抗坏血酸
样品
0
20
40
60
80
100
5 10 15 20 25 30 35 40
浓度/μg•mL-1
清
除
率
/%
维生素C 样品

图 5 醇提物和抗坏血酸的总抗氧化能力
Fig. 5 The total antioxidant capacity of ethanol
extraction and ascorbic acid
图 6 醇提物和抗坏血酸对·OH 的清除能力
Fig. 6 The ·OH scavenging capacity of alcohol
extraction and ascorbic acid

3 讨论
抗氧化剂是一类能帮助捕获并中和自由基，以去除自由基对人体损害的物质。因此，抗氧化剂在
抗癌、抗衰老研究中具有重要意义。黄酮和多酚作为广泛存在于自然界的天然抗氧化剂，引起了国内
外的广泛重视。抗坏血酸作为一种被公认为较好的抗癌、抗衰老物质，在人体内也扮演着抗氧化剂的
角色，保护身体免于自由基的威胁。
本研究通过对 DPPH·清除能力、总还原能力、总抗氧化能力及对·OH 清除能力的测定，对有柄石
韦抗氧化活性进行初步研究。这四种方法稳定性好，灵敏度高，操作简单快捷，适用于大学实验室的
抗氧化活性研究。研究结果表明，有柄石韦醇提物具有一定程度的抗氧化能力，甚至明显强于抗坏血
酸，这为有柄石韦的进一步研究和临床应用提供理论依据。
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