全 文 ：柠条根瘤内生细菌的抗逆性及遗传多样性*
代金霞摇 王玉炯**摇 武雪娟摇 张晓玲
(宁夏大学生命科学学院, 银川 750021)
摘摇 要摇 采用 16S rDNA PCR鄄RFLP和序列分析方法对分离自柠条根瘤的 40 株内生细菌的遗
传多样性及系统发育进行分析,并对菌株的耐盐性、耐酸碱性和生长温度范围进行测定.结果
表明: 40 株供试菌株共产生 9 种遗传图谱类型;对各类型代表菌株进行 16S rDNA序列测定,
结合形态特征和生理生化检测结果,表明供试菌株分别归属于芽孢杆菌属(Bacillus)、Inquili鄄
nus属、申氏杆菌属(Shinella)和不动杆菌属(Acinetobacter),遗传多样性较为丰富;57. 5%的菌
株可耐受 4%的 NaCl,75%的菌株可在 pH 11. 0 的条件下生长,85%的菌株经 60 益热激处理
后仍能继续生长,显示柠条根瘤内生细菌具有较强的抗逆性,菌株 LWEN 07 和 LWEN 15 抗
逆能力最为显著.
关键词摇 柠条摇 内生细菌摇 抗逆性摇 16S rDNA摇 系统发育
文章编号摇 1001-9332(2012)02-0519-06摇 中图分类号摇 Q939. 9摇 文献标识码摇 A
Stress resistance and genetic diversity of endophytic bacteria isolated from Caragana spp. root
nodules. DAI Jin鄄xia, WANG Yu鄄jiong, WU Xue鄄juan, ZHANG Xiao鄄ling (School of Life Science,
Ningxia University, Yinchuan 750021, China) . 鄄Chin. J. Appl. Ecol. ,2012,23(2): 519-524.
Abstract: By adopting PCR鄄RFLP and 16S rDNA sequencing, this paper analyzed the genetic
diversity and phylogeny of 40 endophytic bacterial strains isolated from Caragana spp. root nod鄄
ules, and determined the salt resistance, acid鄄 and alkali resistance, and growth temperature range
of the strains. A total of 9 genotypes were obtained from the 40 strains by RFLP. The 16S rDNA
sequencing, morphological observation, and biochemical test of representative strains showed that
the strains belonged to Bacillus, Inquilinus, Shinella and Acinetobacter, respectively, and had rich
genetic diversity. 57. 5% of the strains could tolerate 4% NaCl stress, 75% of the strains could
grow in YMA medium with an initial pH 11. 0, and 85% of the strains could survive after heat
shock treatment at 60 益, suggesting that the endophytic bacteria of Caragana spp. had strong
resistance capacity. Among the strains, LWEN 07 and LWEN 15 were most resistant.
Key words: Caragana spp. ; endophytic bacteria; stress resistance; 16S rDNA; phylogeny.
*宁夏自然科学基金项目(NZ1040)资助.
**通讯作者. E鄄mail:wyj@ nxu. edu. cn
2011鄄04鄄20 收稿,2011鄄11鄄24 接受.
摇 摇 植物内生细菌是指那些在其生活史的某一段时
期生活在植物组织内,对植物组织没有引起明显病
害症状的细菌.内生细菌在长期的协同进化过程中,
与植物形成了互惠互利的关系[1] . 许多内生菌能够
产生活性物质,可作为生防资源、外源基因的载体和
新药的来源,还可通过固氮、分泌生长素、抗植物病
原菌等作用促进植物生长,提高植物的抗逆性[2] .
植物内生细菌因具有多方面的生物学和生态学功
能,成为潜力巨大、尚待开发的微生物新资源而受到
广泛重视[3] .近年来,在根瘤菌多样性研究中,能够
从根瘤中分离得到某些非共生固氮细菌,如土壤杆
菌 (Agrobacterium)、芽孢杆菌 (Bacillus)、假单胞菌
(Pseudomonas) [4-6]等,这些细菌定植于根瘤内,它
们的遗传多样性与根瘤菌、宿主植物以及环境之间
的关系如何,其种群结构和分布特点与宿主其他组
织部位的内生细菌有何异同,均有待于深入研究.
柠条是豆科蝶形花亚科锦鸡儿属(Caragana)
的小叶锦鸡儿(C. microphylia)、中间锦鸡儿(C. in鄄
termedia)和柠条锦鸡儿(C. korshinskii)等几种灌木
的俗称,是我国北方大部分地区特别是黄土高原和
干旱风沙区的优良豆科灌木,生物产量高、饲用价值
好,在放牧补饲方面起着极大的作用.柠条具有极强
的生命力和抗逆性,在防风固沙、水土保持、改善生
应 用 生 态 学 报摇 2012 年 2 月摇 第 23 卷摇 第 2 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
Chinese Journal of Applied Ecology, Feb. 2012,23(2): 519-524
态环境方面也有突出作用,是中国西北、华北、东北
西部水土保持和固沙造林的重要树种[7] . 柠条根瘤
菌具有丰富的多样性和较强的抗逆性,其共生固氮
体系对干旱半干旱地区荒漠化的治理具有重要意
义[8] .本研究从宁夏荒漠草原采集的柠条根瘤中分
离获得 40 株内生细菌,采用 16S rDNA PCR鄄RFLP
和序列分析方法对其遗传多样性和系统发育进行分
析,同时对菌株的耐盐性、耐酸碱性、生长温度范围
进行测定,旨在为进一步研究内生细菌与根瘤菌、宿
主植物及环境因子之间的相互作用关系奠定基础.
1摇 材料与方法
1郾 1摇 供试菌株
柠条根瘤样品采自宁夏白芨滩国家自然保护
区.该区位于毛乌素沙漠边缘(37毅49忆—38毅20忆 N,
106毅20忆—106毅37忆 E),保护区内集中分布着干旱沙
地、荒漠草原和流动沙丘等荒漠类型生态系统,是我
国典型的荒漠类型自然保护区,年均降水量 255. 2
mm,年均蒸发量 2862. 2 mm,土壤类型以灰钙土为
主,区内分布的以柠条为主的 1. 7 万 hm2天然荒漠
灌木群落是我国面积最大最集中的特有类型.
采集的根瘤样品用无菌水浸泡吸涨,用 75%的
乙醇和 0. 1%的 HgCl2分别进行表面消毒后,用无菌
水漂洗多次,再用镊子夹碎,挤出汁液接种于 YMA
培养基上,28 益下培养 3 ~ 5 d,取最后一次无菌水
清洗液涂布 YMA 平板进行无菌检测. 通过种子回
接结瘤试验,不能结瘤的确定为内生细菌.本试验共
筛选出根瘤内生细菌 40 株.菌株编号见表 1.
1郾 2摇 遗传多样性研究
1郾 2郾 1 菌株基因组 DNA提取及 16S rDNA 扩增摇 将
供试菌株接入 TY 液体培养基中, 28 益 下 150
r·min-1振荡培养 3 d,4 益下 8000 r·min-1离心收
集菌体,弃去上清液,用 TE 洗涤 3 次,用细菌基因
组 DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)
进行总 DNA 提取. 采用细菌 16S rDNA 通用引物
27F、1492R进行 PCR扩增[8-9] .
1郾 2郾 2 16S rDNA PCR鄄RFLP分析及序列测定摇 选用
Hinf 玉 、Hae芋、Msp玉、Taq玉等 4 种限制性内切酶
消化 16S rDNA扩增产物,经 2%琼脂糖凝胶电泳检
测,用 Bio鄄Rad凝胶成像系统拍照.分析各酶切图谱
类型,选取代表菌株进行 16S rDNA 全序列测定(由
上海生工生物工程技术服务有限公司进行). 将所
测序列在 GenBank中进行 blast同源性搜索,获得同
源性相近的菌种序列,Clustal X 多重比对后,运用
MEGA5. 0 软件构建系统树.
1郾 2郾 3 代表菌株的形态和生理生化特征鉴定摇 挑取
酶切组合类型的代表菌株进行形态观察和生理生化
特征检测,包括革兰氏染色、芽孢染色、鞭毛染色、需
氧性、V鄄P试验、淀粉水解、硝酸盐还原、氧化酶及接
触酶等试验测定[10] .根据菌落特征、形态、染色结果
和生理生化特征,参照东秀珠和蔡妙英[11]的方法进
行细菌分类鉴定.
1郾 3摇 抗逆性测定
将供试菌株进行活化培养后接种于待测指标平
板上,在恒温培养箱中 28 益下培养 3 ~ 10 d,观察平
板上菌株生长情况,生长记为 “ +冶,不生长记为
“-冶,各处理均 3 次重复[12-14] .
1郾 3郾 1 耐盐性测定摇 将 NaCl 加入到 YMA 培养基中
配成质量分数为 1% 、2% 、3% 、4% 、5%和 6%等 6
个梯度,灭菌后倒平板.以含 0. 01%NaCl的 YMA平
板作为阳性对照.
1郾 3郾 2 耐酸碱性测定 摇 将高压灭菌的YMA培养基
表 1摇 供试菌株及其 16S rDNA PCR鄄RFLP图谱类型
Table 1摇 Tested strains and the types of 16S rDNA PCR鄄RFLP
菌株
Strain
16S rDNA酶切类型
Types of 16S rDNA PCR鄄RFLP
Hinf I Hae III Msp I Taq I
酶切组合类型
Combination of
RFLP type
LWEN01,LWEN02,LWEN04,LWEN05,LWEN10,LWEN11,LWEN26,
LWEN15,LWEN18,LWEN30
A A A A AAAA(玉)
LWEN5鄄3,LWEN5鄄4,LWENY3 B B B B BBBB(域)
LWEN2. 4,LWEN4鄄7,LWEN8D,LWEN8E,LWEN31 C C C C CCCC(芋)
LWEN22,LWEN23,LWEN28, D D D D DDDD(郁)
LWEN08,LWEN16,LWEN29,LWEN32 E E E E EEEE(吁)
LWEN13,LWEN19,LWEN27,LWEN03,LWEN06,LWEN07,LWEN12 F F F E FFFE(遇)
LWEN801 A B B B ABBB(喻)
LWEN09,LWEN2A,LWEN5A,LWEN33 C C B C CCBC(峪)
LWEN3D2,LWEN 3A,LWEN21 B B B A BBBA(御)
025 应摇 用摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 23 卷
用 HCl 和 NaOH 调节 pH 值为 4. 0、5. 0、6. 0、8郾 0、
9郾 0、10郾 0、11. 0、12. 0 等 8 个梯度后倒平板. 以 pH
7郾 0 的 YMA平板作为阳性对照.
1郾 3郾 3 生长温度范围测定 摇 在 YMA 平板上接种供
试菌株后置于 4、10、40 益下培养,将菌株经 60 益热
激处理 10 min后置于 28 益下培养.以 28 益下生长
的 YMA平板作为阳性对照.
2摇 结果与分析
2郾 1摇 柠条根瘤内生细菌的遗传多样性
40 株供试菌株用通用引物 27F 和 1492R 扩增
后均产生约 1500 bp的单一条带. 16S rDNA 的 PCR
产物经 4 种限制性内切酶消化后分别产生 5 ~ 6 种
图谱类型(图 1).所有待测菌株的 4 种酶切图谱类
型组合后共获得 9 种遗传型(表 1),表明柠条根瘤
内生细菌具有较丰富的遗传多样性. 选取不同组合
类型的代表菌株进行 16S rDNA 序列测定,与 Gen鄄
Bank中的同源序列比对后用 Neighbour鄄Joining 法构
建系统发育树状图(图 2).从树状图可以看出,各代
表菌株共形成 4 个系统发育分支:酶切组合类型玉、
吁、遇的代表菌株 LWEN01、LWEN08、LWEN07 在系
统树上与芽孢杆菌属(Bacillus)的已知菌株聚在一
起,其 16S rDNA 序列与 Bacillu 属内各参比菌株的
序列相似性最小为 99% ;测试菌株 LWEN5鄄3、
LWEN3D2、LWEN801 与 Inquilinus 属的菌株聚为一
个分支,与参比菌株 Inquilinus limosus AU430、Inquil鄄
inus limosus AU476 和 Inquilinus ginsengisoli Mq鄄10
的序列相似性分别为 100% 、99%和 99% ;组合类型
郁的代表菌株 LWEN22 与 Shinella 属的菌株聚为一
支,与 S. kummerowiae CCNWGS0228、 Shinella sp.
HZN7 和 S. zoogloeoides BC026 的序列相似性分别
为 100% 、99. 6%和 99% ;LWEN2A 和 LWEN2. 4 与
Acinetobacter属菌株形成一个系统发育分支,二者与
A. calcoaceticus和 A. rhizosphaerae 的序列相似性均
为 100% .
各代表菌株形态和生理生化特征见表 2. 根据
鉴定结果,结合 16S rDNA 序列和系统发育关系,表
明菌株LWEN01、LWEN08、LWEN07所代表的酶切
图 1摇 供试菌株 16S rDNA PCR产物酶切图谱类型
Fig. 1摇 16S rDNA PCR鄄RFLP fingerprint patterns of the tested strains.
a)Taq玉; b)Msp玉; c)Hae芋; d)Hinf玉.
表 2摇 代表菌株的生理生化特征
Table 2摇 Biological and chemical characteristics of representative strains
菌株
Strain
细胞形态摇 摇
Shape摇 摇
需氧型
Aerobic
革兰氏
Gram
鞭毛
Flagllum
芽孢染色
Spore
氧化酶
Oxidase
接触酶
Catalase
淀粉水解
Starch
硝酸盐还原
Nitrate
reduction
VP反应
Voges鄄
proskauer
LWEN2A 短杆状 Short rod + - - - - + - - -
LWEN2. 4 短杆状 Short rod + - - - - + - - -
LWEN5鄄3 杆状 Rod - - + - + + - - -
LWEN3D2 杆状 Rod - - + - + + - - -
LWEN801 杆状 Rod - - + - + + - - -
LWEN01 杆状 Rod + + - + + + + + +
LWEN07 杆状 Rod + + + + + + + + +
LWEN08 杆状 Rod + + + + + + + - -
LWEN22 杆状 Rod + - + - + + + - -
+:阳性反应 Positive; -:阴性反应 Negative.
1252 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 代金霞等: 柠条根瘤内生细菌的抗逆性及遗传多样性摇 摇 摇 摇 摇
图 2摇 供试菌株 16S rDNA全序列系统发育关系树状图
Fig. 2摇 Phylogenetic dendrogram of tested strains based on 16S rDNA sequences.
组合类型玉、吁、遇的 21 株菌隶属于芽孢杆菌属
(Bacillus);LWEN5鄄3、LWEN3D2 和 LWEN801 代表
的 7 株菌属于 Inquilinus 属;LWEN22 代表的 3 株菌
属于申氏杆菌属( Shinella);LWEN2A 和 LWEN2郾 4
与二者代表的菌株属于不动杆菌属(Acinetobacter) .
2郾 2摇 柠条根瘤内生细菌的抗逆性
经检测,供试菌株普遍具有较强的耐盐性,但各
菌株之间有较大差异. 所有菌株都能在含 1% NaCl
的培养基中生长,95%的菌株可以耐受 2%的 NaCl,
73%的菌株可耐受 3% 的 NaCl,57. 5% 的菌株可
耐受 4% 的 NaCl. LWEN5鄄3、 LWEN5鄄4、 LWEN07、
LWEN12 等菌株能耐受 5%的 NaCl.但随着 NaCl 浓
度的升高,菌株的生活力逐渐下降,平板上的菌落数
目减少,菌株的生长变得十分缓慢,当 NaCl 浓度达
到 6%时,所有菌株都不能生长.
供试菌株在 pH 6. 0 ~ 10. 0 的培养基中均能保
持较强的生活力.在 pH 4. 0 时,所有菌株不能生长.
菌株 LWEN01、 LWENW07、 LWEN12、 LWEN08 和
LWEN15 能在 pH 5. 0 的培养基中生长,表现出较强
的耐酸性;当 pH 达到 11. 0 时,75%的菌株仍能生
225 应摇 用摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 23 卷
长.菌株 LWEN07、LWEN08、LWEN15 在 pH 12郾 0 的
培养基中仍能生长良好.
以 28 益下生长菌株为对照,所有供试菌株可在
10 和 40 益下生长,菌株 LWEN07、LWEN15 可在
4 益下生长. 60 益热激处理 10 min 后置于 28 益下
培养,除酶切组合芋类型中的所有菌株和 LWEN21
不能生长外,其余菌株都能继续生长,表现出极强的
耐高温性质.
3摇 讨摇 摇 论
近些年来,许多研究者从豆科植物根瘤内分离
出多种根瘤内生细菌,这些内生细菌并不是由分离
污染或根瘤腐败所致,而是分离自成熟或健康的根
瘤. 其中,芽孢杆菌属 ( Bacillus )、土壤杆菌属
(Agrobacterium)、肠杆菌属(Enterobacter)及假单胞
菌属(Pseudomonas)等属于常见类群[15-17] . 本研究
通过对表型特征和 16S rDNA 序列结果进行分析,
发现分离自柠条根瘤的内生细菌属于 Bacillus、In鄄
quilinus、Shinella 和 Acinetobacter 4 个属. 其中 Bacil鄄
lus 属为优势菌群,这与龚明福等[18]研究苦豆子
(Sophora alopecuroides)根瘤内生细菌的结果相一
致. Bacillus属是促生内生细菌中研究较多的一类,
该属中许多菌株可以分泌吲哚乙酸或赤霉素等,能
有效促进植物的生长、抑制多种病原菌活性、显著提
高植物的抗病性. 申氏杆菌属(Shinella)是 2006 年
建立的新属,在系统分类中隶属于根瘤菌科,目前已
从多种植物的根瘤中分离出该属的菌株. Lin 等[19]
从鸡眼草(Kummerowia stipulacea)根瘤中分离出一
株共生细菌 Shinella kummerowia CCBAU25048,并扩
增获得该菌株的共生基因 nodD 和 nifH 的产物,但
进一步的交叉结瘤试验表明,该菌株并不能与原宿
主植物及其他豆科植物结瘤,从而认为该菌株是不
同于其他共生根瘤菌的内生细菌. 本研究分离出的
Shinella属的菌株经种子回接试验也不能与原宿主
植物结瘤,是否存在共生基因还需要进一步的试验
验证.不动杆菌属(Acinetobacter)广泛存在于自然界
的土壤和水体中,该属许多菌株能够降解环境中的
多种污染物,如苯酚、DBP(邻苯二甲酸二丁酯)、菲、
石油等,对环境污染的治理和土壤修复具有重要作
用.有些菌株能产生脂肪酶、胆固醇氧化酶等,在化
工、医药等行业有广泛用途. 目前,有较多报道从多
种植物的根际和根内组织中分离出不动杆菌[20-21],
尚未见从根瘤中分离该类群的报道. Inquilinus 属隶
属于 琢鄄变形菌纲 ( Alphaproteobacteria ) 红螺菌目
(Rhodospirillales)红螺菌科 ( Rhodospirillaceae),该
科的许多种类具有固氮作用. Jung 等[22]和 Deng
等[23]分别从种植人参(Panax ginseng)的土壤和苦
马豆(Sphaerophysa salsula)根瘤中分离出 Inquilinus
属菌株,但对其生物学功能的研究尚未开展.
在抗逆性试验中,供试菌株表现出不同的耐盐、
耐酸碱和耐高温能力.其中,经 16S rDNA 序列和形
态鉴定为芽孢杆菌属的 2 株菌 LWEN07 和 LWEN15
抗逆性较为显著,可以耐受 5%的 NaCl,在 pH 4郾 0
~ 12郾 0 的酸碱范围内能生长良好,而且表现出极强
的耐高温性质,值得进一步研究. 龚明福等[18]对塔
里木盆地苦豆子根瘤内生细菌抗逆性的研究表明,
许多菌株都具有很强的抗逆能力. 这可能是由于供
试菌株及其宿主分布于干旱半干旱的荒漠区,土壤
盐碱化程度较高,它们所具有的特殊性状是其在长
期逆境胁迫下经过双重选择、逐渐进化并适应生态
环境的结果.
根瘤内生细菌在根瘤菌与豆科植物共生固氮的
过程中,与宿主植物、根瘤菌相互作用,在复杂的环
境条件下对共生固氮作用产生相应的影响[24-25] .已
有研究证实,某些根瘤内生细菌可以产生植物生长
调节物质,如乙烯、生长素、细胞激动素等,促进植物
根系发育,进而有利于根瘤菌与豆科植物的根系相
互作用并共生结瘤固氮[1] . 我们在采集根瘤时发
现,在极端干旱的毛乌素沙漠南缘,柠条仍长势良
好,这可能与其体内定植的内生细菌和根瘤菌有关.
这些内生细菌是否具有促生作用,它们是通过何种
途径作用于宿主植物使其适应逆境的,根瘤内生细
菌的高抗性以及根瘤菌与其宿主植物之间是否有着
密切联系,这些问题有待于深入研究.
作为防风固沙的先锋物种,柠条的生态学意义
远大于其经济学意义,发掘与其共生的微生物资源
不仅对探索极端环境中根瘤菌鄄内生细菌鄄宿主植物
的协同进化研究有着重要的指导意义,而且有助于
我们更加透彻地认识其共生固氮体系的形成及抗逆
机理,期待能够从中找到提高结瘤固氮效率、增强抗
逆性的合适途径,进而对沙漠化的治理起到积极的
作用.
参考文献
[1] 摇 Hallmann J, Quadt鄄Hallmann WF, Mahaffee A, et al.
Bacterial endophytes in the agricultural crops. Canadian
Journal of Microbiology, 1997, 43: 895-914
[2] 摇 Schulz B, Boyle C. The endophytic continuum. Myco鄄
logical Research, 2005, 109: 661-686
3252 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 代金霞等: 柠条根瘤内生细菌的抗逆性及遗传多样性摇 摇 摇 摇 摇
[3]摇 Jiang Y (姜摇 怡), Yang Y (杨摇 颖), Chen H鄄H (陈
华红), et al. Resourses of plant endophyte. Microbiol鄄
ogy (微生物学通报), 2005, 32(6): 146 -147 ( in
Chinese)
[4]摇 Mhamdi R, Mrabet M, Laguerre G. Colonization of
Phaseolus vulgaris nodules by Agrobacterium like
strains. Canadian Journal of Microbiology, 2005, 51:
105-111
[5]摇 Ib觃觡ez F, Angelini J, Taurian T, et al. Endophytic
occupation of peanut root nodules by opportunistic Gam鄄
maproteobacteria. Systematic and Applied Microbiology,
2009, 32: 49-55
[6]摇 Cummings SP, Gyaneshwar P, Vinuesa P, et al. Nodu鄄
lation of Sesbania species by Rhizobium ( Agrobacteri鄄
um) strain IRBG74 and other rhizobia. Environmental
Microbiology, 2009, 11: 2510-2525
[7]摇 Niu X鄄W (牛西午). The distribution and description of
Caragana Fabr. in China. Acta Botanica Boreali鄄Occi鄄
dentalia Sinica (西北植物学报), 1999, 19(5): 107-
133 (in Chinese)
[8] 摇 Berkum PV, Beyene B, Eardly BD. Phylogenetic rela鄄
tionships among Rhizobium species nodulating the com鄄
mon bean. International Journal of Systematic Bacteriol鄄
ogy, 1996, 46: 240-244
[9]摇 Wu S鄄H (吴少慧) , Zhang H鄄W (张惠文) , Xiong Z
(熊 摇 智), et al. Biodiversity of Frankia strains in
nodules from Alnus and Hippophae by ARDRA. Chinese
Journal of Applied Ecology (应用生态学报), 2001, 12
(6): 883-886 (in Chinese)
[10]摇 Shen P (沈摇 萍), Fan X鄄R (范秀容). Experimental
Instruction of Biology. Beijing: Higher Education Press,
2003 (in Chinese)
[11]摇 Dong X鄄Z (东秀珠), Cai M鄄Y (蔡妙英). Manual of
Systematic Bacteriology. Beijing: Science Press, 2001
(in Chinese)
[12]摇 Gao L鄄F (高丽锋), Deng X (邓 摇 馨), Wang H鄄X
(王洪新), et al. Diversity and resistance of rhizobia
isolated from Caragana intermediain in Maowusu sand鄄
land. Chinese Journal of Applied Ecology (应用生态学
报), 2004, 15(1): 44-48 (in Chinese)
[13]摇 Chen M鄄Z (陈明周), Xie F鄄L (谢福莉), Zhou J鄄C
(周俊初). Diversity of Sinorhizobium fredii strains.
Chinese Journal of Applied Ecology (应用生态学报),
2001, 12(4): 597-600 (in Chinese)
[14]摇 He H鄄B (何恒斌), Jia K鄄F (贾昆峰), Jia G鄄X (贾
桂霞), et al. A preliminary study on the stress resist鄄
ance of rhizobia isolated from Ammopiptanthus mongoli鄄
cus. Chinese Journal of Plant Ecology (植物生态学
报), 2006, 30(1): 140-146 (in Chinese)
[15]摇 Wang LL, Wang ET, Liu J, et al. Endophytic occupa鄄
tion of root nodules and roots of Melilotus dentatus by
Agrobacterium tumefaciens. Microbial Ecology, 2006,
52: 436-443
[16]摇 Benhizia Y, Benhizia H, Benguedouar A, et al. Gamma
proteobacteria can nodulate legumes of the genus
Hedysarum. Systematic and Applied Microbiology, 2004,
27: 462-468
[17]摇 Li JH, Wang ET, Chen WF, et al. Genetic diversity
and potential for promotion of plant growth detected in
nodule endophytic bacteria of soybean grown in Hei鄄
longjiang Province of China. Soil Biology and Biochem鄄
istry, 2008, 40: 238-246
[18]摇 Gong M鄄F (龚明福), Ma Y鄄H (马玉红), Li C (李
超), et al. Phenotypic diversity of endophytic bacteria
isolated from nodule of Sophora alopecuroides. Acta Bo鄄
tanica Boreali鄄Occidentalia Sinica (西北植物学报),
2009, 29(2): 408-411 (in Chinese)
[19]摇 Lin XD, Wang ET, Tang H, et al. Shinella kummer鄄
owiae sp. nov. , a symbiotic bacterium isolated from
root nodules of the herbal legume Kummerowia stipula鄄
cea. International Journal of Systemmatic and Evolution鄄
ary Microbiology, 2008, 58: 1409-1413
[20]摇 Zhao XH, He X, Wang JN, et al. Biodegradation of
swainsonine by Acinetobacter calcoaceticus strain YLZZ鄄1
and its isolation and identification. Biodegradation,
2009, 20: 331-338
[21]摇 Gulati A, Vyas P, Rahi P, et al. Plant growth鄄promo鄄
ting and rhizosphere鄄competent Acinetobacter rhizospha鄄
erae strain BIHB 723 from the cold deserts of the Hima鄄
layas. Current Microbiology, 2009, 58: 371-377
[22]摇 Jung HM, Lee JS, Bae HM, et al. Inquilinus ginsen鄄
gisoli sp. nov. , isolated from soil of a ginseng field.
InternationalJournal of Systematic and Evolutionary Mi鄄
crobiology, 2011, 61: 201-204
[23]摇 Deng ZS, Zhao LF, Kong ZY, et al. Diversity of endo鄄
phytic bacteria within nodules of the Sphaerophysa
salsula in different regions of Loess Plateau in China.
FEMS Microbiology Ecology, 2011, 76: 463-475
[24]摇 Muresu R, Polone E, Sulas L. Coexistence of predomi鄄
nantly nonculturable rhizobia with diverse enophytic bac鄄
terial taxa within nodules of wild legumes. FEMS Micro鄄
biology Ecology, 2008, 63: 383-400
[25] 摇 Barrett CF, Parker MA. Coexistence of Burkholderia,
Cupriavidus, and Rhizobium sp. nodule bacteria on two
Mimosa spp. in Costa Rica. Applied and Environmental
Microbiology, 2006, 72: 1198-1206
作者简介摇 代金霞,女,1973 年生,博士.主要从事资源微生
物的开发与利用研究. E鄄mail: daijx05@ 163. com
责任编辑摇 肖摇 红
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