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茶藨子木层孔菌多糖的体内抗肿瘤作用研究



全 文 :山东中医杂志 2015 年 2 月第 34 卷第 2 期
茶藨子木层孔菌(Phellinus ribis)为针层孔菌属
真菌,在中国、韩国等国家作为传统药物用于抗肿
瘤[1-2],疗效确切。 茶藨子木层孔菌多糖 (PRP)是从
茶藨子木层孔菌中分离获得的一种结构新颖的葡聚
糖,分子质量为 8.59 kDa,体外实验表明,PRP 具有
促进脾淋巴细胞增殖作用 [3],本文通过建立 S180 荷
瘤小鼠模型,研究了 PRP 及与化疗药合并用药的体
内抗肿瘤作用。
1 材料与仪器
1.1 动物及瘤株 昆明小鼠,雄性,清洁级,体质量
18~22 g,由山东大学实验中心提供;S180 肉瘤小鼠
引自山东省医学科学院。
1.2 试药与仪器 注射用环磷酰胺(CTX,江苏恒
瑞医药股份有限公司);茶藨子木层孔菌多糖 PRP,
参照文献方法自制 [3];倒置光学显微镜(德国 LE-
ICA);AE100 电子天平(梅特勒 -托利多上海有限公
司)。
2 方法
2.1 肿瘤模型的建立 按移植性肿瘤研究法建立
小鼠模型[4]。取接种 9 d生长良好的 S180小鼠,消毒
腹部皮肤,抽吸腹水,生理盐水稀释,台盼蓝染色后
在倒置式显微镜下计数,活细胞数应为 98%以上。 调
整细胞浓度为每毫升 1×107个,无菌条件下接种细
胞悬液于小鼠右腋窝下,每只 0.2 mL,建立荷瘤小鼠
模型。
2.2 分组及给药 将 70 只接种 S180 瘤株的小鼠
称重,随机分为 7 组:模型对照组,阳性对照组或称
CTX 对照组,PRP 低、中、高剂量组,PRP 低剂量联
合 CTX 组,PRP 中剂量联合 CTX 组,每组 10 只,另
设正常对照组(10 只,不接种瘤株)。 接种 24 h 后,
开始给药,CTX 组剂量为每天 CTX 20 mg/kg,PRP
低、中、高剂量组分别为每天 10,30,90 mg/kg,PRP
低剂量联合 CTX 组剂量为每天 PRP 10 mg/kg+CTX
20 mg/kg,PRP 中剂量联合 CTX 组剂量为每天 PRP
30 mg/kg+CTX 20 mg/kg,正常对照组和模型组均给
茶藨子木层孔菌多糖的体内抗肿瘤作用研究
刘玉红,马 艳,蔡梅超
(山东中医药大学药学院,山东 济南 250355)
[摘要] 目的:探讨茶藨子木层孔菌多糖(PRP)的体内抗肿瘤作用。 方法:建立小鼠 S180 实体瘤模型,分为模型对照组、PRP
实验低、中、高剂量组、PRP 联合环磷酰胺组、环磷酰胺对照组,腹腔注射给药。 测定小鼠肿瘤生长抑制率、脾脏指数和胸腺指数。
结果:实验组中、高剂量时,PRP 对小鼠的肿瘤抑制率分别为 23.35%和 34.46%,与模型组比较有显著性意义(P<0.05 和 P<0.01);
在此剂量下,PRP 可以提高荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数,差异有统计学意义(P<0.05)。 PRP 与环磷酰胺合用时抑瘤率有所
提高,但差异不显著;合用时荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数较环磷酰胺单独应用显著提高(P<0.05)。 结论:PRP 具有显著免疫增
强作用,对小鼠肿瘤具有一定的抑制作用,并可以改善环磷酰对荷瘤小鼠造成的免疫损伤。
[关键词] 茶藨子木层孔菌;多糖;体内抗肿瘤;小鼠
[中图分类号] R285.5 [文献标志码] A [文章编号] 0257-358X(2015)02-0124-02
Study on the Antitumor Activity in Vivo of Phellinus Ribis Polysaccharide
LIU Yuhong,MA Yan,CAI Meichao
(School of Pharmaceutical Sciences,Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250355,China)
Abstract Objectives:To explore antitumor activities in vivo of Phellinus ribis polysaccharide(PRP). Methods:
S180 tumor-bearing mice models were established and divided randomly into the following groups:model
group,PRP group,PRP combined with cyclophosphamide group,cyclophosphamide group. Drugs were adminis-
trated through intraperitoneal injection. The tumor growth inhibitory rate,spleen index and thymus index were
calculated. Results:The tumor inhibition rates of medium and high-dose PRP were 23.35% and 34.46%,re-
spectively,which were significantly different from the model group (P<0.01 or P<0.05). Spleen index and
thymus index significantly increased in medium and high-dose PRP groups. The inhibitory rates of tumor in-
creased in PRP combined with cyclophosphamide group,but the difference was not significant. Spleen index
and thymus index were higher in group of PRP combined with cyclophosphamide than that in cyclophos-
phamide group(P<0.01 or P<0.05). Conclusions:PRP could improve the immunity obviously and inhibit the
growth of tumor to some extent. It could relief the immune damage caused by cyclophosphamide.
Key words Phellinus ribis;polysaccharide;antitumor in vivo;mouse
[收稿日期] 2014-09-29
[基金项目] 国家自然科学基金(编号:81402833);山东省优秀
中青年科学家科研奖励基金(编号:BS2009SW041)
[作者简介] 刘玉红(1975-),山东定陶人,医学博士,副教授,主
要从事天然药物活性成分研究。
124· ·
DOI:10.16295/j.cnki.0257-358x.2015.02.040
山东中医杂志 2015 年 2 月第 34 卷第 2 期
表 2 PRP 及与 CTX 合用对荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺
指数的影响(x±s,n=10)
组别
剂量
(m/mg·kg-1)
脾脏指数
(m/mg·kg-1)
胸腺指数
(m/mg·kg-1)
正常对照组 - 5.07±0.96 2.19±0.41
模型组 - 5.11±0.93 1.81±0.33
PRP 10 6.06±1.12 2.21±0.37
30 7.25±1.14* 2.68±0.38**
90 7.73±1.21** 2.73±0.40**
PRP+CTX 10+20 4.33±0.88 1.13±0.27Δ
10+30 4.86±0.87 1.29±0.29ΔΔ
CTX 20 3.40±0.71* 0.57±0.28**
与模型组比较 *P< 0.05,**P< 0.01;ΔP< 0.05,ΔΔP< 0.01,与 CTX
组比较 ΔP< 0.05,ΔΔP< 0.01
表 1 PRP 及与 CTX 合用对荷瘤小鼠体重和肿瘤的
影响(x±s,n=10)
组别
剂量
(m/mg·kg-1)
体质量增加量
(m/g)
肿瘤重量
(m/g)
肿瘤抑制率
(100%)
正常对照组 - 8.54±0.88 - -
模型组 - 8.30±0.92 1.77±0.20 -
PRP 10 9.92±1.14 1.52±0.23 14.33
30 8.78±1.04 1.36±0.19* 23.35
90 10.63±1.16* 1.16±0.21** 34.46
PRP +CTX 10+20 -4.35±1.03**Δ 0.77±0.18** 56.88
30+20 -3.97±0.93**ΔΔ 0.58±0.14** 67.23
CTX 20 -6.35±0.89** 0.85±0.18** 51.87
与模型组比较 *P< 0.05,**P< 0.01;与 CTX 组比较 ΔP< 0.05,
ΔΔP< 0.01
等量的生理盐水,给药方式为腹腔注射(ip)。 每天固
定时间给药 1次,连续 10 d。
2.3 PRP及与 CTX 合并用药对荷瘤小鼠的作用
末次给药 24 h 后称体质量,计算体质量增加值;颈
椎脱臼处死小鼠,摘取瘤块、脾脏及胸腺并称重,计
算抑瘤率、脾脏指数及胸腺指数。 公式如下:
抑瘤率 =(模型组瘤重 -给药组瘤重)/模型组
瘤重×100%
脾脏指数=小鼠的脾重(mg)/小鼠的体质量(g)
胸腺指数 =小鼠的胸腺重(mg)/小鼠的体质量
(g)
2.4 统计学处理 采用 SPSS 11.5 统计软件,所有
数据均以 x±s 表示,采用 t 检验,取 α=0.05 为检验
水准。
3 结果
3.1 PRP 对小鼠移植性 S180 实体瘤生长的抑制作
用 结果如表 1,PRP 在低、中、高剂量时对 S180 肉
瘤的抑制率分别为 14.33%、23.35%和 34.46%,其中
中、 高剂量时具有显著性意义,P< 0.05 和 P< 0.01。
值得关注的是,CTX 在抑制肿瘤的同时,对小鼠的
生长抑制明显,体质量显著减少,P< 0.01;而 PRP 实
验组小鼠体质量均增加,并且高剂量组与模型组比
较有显著性差异,P< 0.05。
3.2 PRP 对荷瘤小鼠免疫器官的影响 如表 2,
CTX 可降低荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数,具有
明显的免疫抑制不良反应。 低剂量的 PRP对小鼠脾
脏指数和胸腺指数没有明显的影响,而中、高剂量
的 PRP 可以显著提高荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺
指数,P< 0.05 和 P< 0.01,显示出较强的体内免疫促
进作用。
3.3 PRP 与 CTX 的联合抗肿瘤作用 结果见表 1,
PRP 与 CTX 联合用药后,抑瘤率较 CTX 单独应用
有所提高。 从小鼠体质量变化结果得知,PRP 与
CTX 联合用药后可以改善 CTX 单独应用时对荷瘤
小鼠的生长抑制作用。
3.4 PRP 与 CTX 合用对荷瘤小鼠免疫器官的影
响 结果见表 2,CTX 单独应用时,对小鼠的脾脏和
胸腺具有明显的抑制作用。 CTX 与 PRP合用后可明
显提高荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数,说明 PRP
可以改善 CTX 对小鼠的免疫损伤。
4 讨论
PRP为从药用真菌茶藨子木层孔菌中提取获得
的多糖组分,实验显示,CTX 组虽然有很高的肿瘤
抑制率,但小鼠正常功能受到抑制,表现为体质量和
免疫器官明显下降;PRP 对肿瘤的抑制率虽然不如
环磷酰胺高,但其对荷瘤小鼠的生长没有不良影响,
并且可以提高小鼠的免疫功能,表现为脾脏指数和
胸腺指数增加,这一点符合多糖治疗肿瘤时不良反
应低的特点。
肿瘤患者经过化疗后,免疫功能低下尤为明显。
由于机体免疫功能与肿瘤的发病及预后密切相关,
因此,改善机体免疫状态,提高机体免疫功能已成为
肿瘤防治中不可忽视的环节。 PRP 与 CTX 联合用
药,在提高抑瘤率的同时,可以明显提高荷瘤小鼠的
脾脏指数和胸腺指数,说明 PRP 在辅助抗肿瘤的同
时,能够改善化疗药物对于机体造成的免疫损伤。这
一结果提示 PRP 在抗肿瘤方面的另一应用价值在
于与化疗药物的联合应用。 关于 PRP免疫增强的活
性及其深入的机制,正在进一步的研究中。
[参考文献]
[1] Lee I K,Lee J H,Yun B S. Polychlorinated compounds with
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ribis[J]. Bioorg Med Chem Lett,2008,18:4566-4568.
[2] 陶美华,章卫民,钟韩,等. 针层孔菌属(Phellinus)中药用真菌的
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[4] 徐淑云,卞如濂,陈修. 药理实验方法学[M]. 3 版 . 北京:人民
卫生出版社,2002:1758-1762.
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