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玄参破壁粉粒对便秘模型小鼠增液通便作用的研究



全 文 :·L -1天花粉多糖即具有显著的促人 PBMC 淋巴细胞增殖作用,
与 10% FCS RPMI 1640 对照组比较具有显著性差异(P < 0. 05) ,
且随着天花粉多糖的浓度增高,其促淋巴细胞增殖作用逐步增
强。其中 10. 0,20. 0 mmol·L -1的天花粉多糖的促人 PBMC增殖
作用与 50. 0 mmol·L -1植物血凝素(PHA)的相似(P > 0. 05)。
提示:天花粉多糖在低浓度下即具有促人 PBMC的增殖作用。
a -正常对照组 b - 10. 0 mmol·L -1天花粉多糖组
图 2 10. 0 mmol·L -1天花粉多糖对 MCF - 7 细胞生长抑制作用(200 ×)
a -正常对照组 b - 10. 0 mmol·L -1天花粉多糖组
图 3 10. 0 mmol·L -1天花粉多糖对 HeLa细胞生长抑制作用(200 ×)
肿瘤的发生是由于细胞增殖和凋亡平衡失调的结果。通过
抑制肿瘤细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡来消除肿瘤已成为目前
一种有效治疗肿瘤的途径[8,9]。由于中药天花粉主要用于治疗
宫外孕、引产和良恶性葡萄胎等症。因此,在本研究中我们选择
了人乳腺癌细胞(MCF - 7 细胞)和人子宫颈癌细胞(HeLa细胞)
为药物作用的靶细胞,以不同浓度天花粉多糖,观察其对 MCF -
7 细胞和 HeLa细胞生长的抑制作用。结果显示,5. 0,10. 0,20. 0
mmol·L -1的天花粉多糖对 MCF - 7 和 HeLa 细胞生长均可产生
明显抑制作用,MCF - 7 细胞和 HeLa细胞主要出现细胞膜皱缩,
核质浓缩等肿瘤细胞生长抑制现象,该抑制作用在第 3 天达到高
峰(P < 0. 05)。其中 5. 0 mmol·L -1的天花粉多糖处理 HeLa细
胞和 MCF - 7 细胞 1 ~ 2 d,其平均生长抑制率即可明显增高(P
< 0. 05)。提示:低浓度的天花粉多糖对 MCF - 7 细胞和 HeLa细
胞生长的抑制作用较弱,而高浓度的则抑制作用相对较强。由
此,我们推测,天花粉多糖可通过激活大量的 T淋巴细胞,上调人
淋巴细胞 CD3、CD4、CD8 的表达,活化的 T 淋巴细胞又可分泌多
种细胞因子(如 IL - 2、IL - 6、TNF - α、TNF - β 等) ,而产生的细
胞因子(如 TNF - α)又可通过细胞凋亡等途径引发肿瘤细胞的
凋亡与坏死,从而表现出抗肿瘤活性。
综合上述,天花粉多糖具有促人 PBMC增殖和抑制肿瘤细胞
MCF - 7 和 HeLa 细胞的生长作用,为进一步研究天花粉多糖作
为安全有效的淋巴细胞激活分子和中草药抗肿瘤药物打下基础。
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收稿日期:2010-04-21; 修订日期:2011-05-26
基金项目:粤港关键领域重点突破项目(No. 20080106 - 2)
作者简介:刘 瑶(1980 -) ,女(汉族) ,四川成都人,现任广东省中药研
究所讲师,硕士学位,主要从事中药复方药理研究工作.
* 通讯作者简介:成金乐(1962 -) ,男(汉族) ,湖北麻城人,现任广东省中
山市中智药业集团有限公司主任中药师,硕士学位,主要从事中药新药、
保健食品、食品的开发研究工作.
玄参破壁粉粒对便秘模型小鼠增液通便作用的研究
刘 瑶1,张洪利2,成金乐3* ,徐吉银3,杨记宗3
(1.广东省中药研究所,广东 广州 510520; 2.广东食品药品职业学院,广东 广州 510520
3.广东省中山市中智药业集团有限公司 528437)
摘要:目的 研究玄参破壁粉粒的增液通便作用。方法 采用灌胃甲状腺素和利血平的造模方法复制阴虚津伤证便秘动
物模型,观测玄参破壁粉粒对便秘模型小鼠的一般状态、便质、排便时间、粪便粒数、小肠炭末推进率等指标的影响。结
果 玄参破壁粉粒能明显缩短小鼠首粒排便时间,促进便秘模型小鼠小肠运动,增加 6h 内的排便粒数。结论 玄参破壁
粉粒具增液通便的作用。在同等剂量下,玄参破壁粉粒通便作用强于玄参常规饮片。
关键词:玄参破壁粉粒; 便秘; 增液通便
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2011. 09. 040
中图分类号:R285. 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)09-2142-02
玄参来源玄参科植物玄参 Scrophularia ningpoensis Hemsl 的
干燥根,具有凉血滋阴,泻火解毒之功效,用于热病伤阴、津伤便
秘、目赤、咽痛等病症[1]。玄参用治肠燥津枯便秘,常配生地黄、
麦冬同用,以“增水行舟”。玄参破壁粉粒是中山中智药业集团
公司利用现代先进的超微粉碎技术,将玄参饮片进行细胞级粉
碎,并采用专利成型技术加工而成的一种新型中药饮片。本实验
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL. 22 NO. 9
通过研究玄参破壁粉粒的增液通便作用,并与常规饮片进行药效
学比较,为玄参破壁粉粒用于阴虚津伤便秘的临床开发利用提供
理论依据和数据支持。
1 材料
1. 1 药品及试剂 玄参破壁粉粒(每克粉粒含 1g 生药)、玄参饮
片均由中山中智药业集团有限公司提供,生产批号为:20090504。
将玄参饮片按临床常规煎煮方法进行煎煮,制成含生药 1 g /ml
的水煎液,4℃冰箱保存备用。甲状腺片(南宁康诺生化制药有
限责任公司,产品批号 070301,规格 40mg) ;复方利血平片(江西
桔王药业有限公司,产品批号 080701) ;麻仁润肠丸(北京同仁堂
股份有限公司同仁堂制药厂,产品批号:8013114)。
1. 2 动物 NIH小鼠,全雄,体质量 18 ~ 22 g,由南方医科大学实
验动物中心提供 (许可证号:SCXK粤 2006 - 0015)。
2 方法
取雄性小鼠 80 只,体质量 18 ~ 22 g,随机分成 8 组,每组 10
只。模型组和各给药组小鼠每只每天按 3 mg 甲状腺素和 0. 02
mg利血平灌胃,连续 7 d,并禁水 1 d。实验第 1,3,5,7 天,分别
测小鼠的体质量。
造模结束后,各给药组小鼠灌胃相应药液,模型组和空白组
灌胃等体积的生理盐水。给药后将小鼠单独放置于铺有滤纸的
饲养笼内进行观察,记录小鼠首粒排黑便的时间和 6 h内排便的
粒数。同时观察动物粪便的形状、质地。
分组和给药剂量见表 1。
禁食不禁水 18 小时后各给药组再次灌服药液(各药液中每
毫升含有 0. 1 g炭末) ,空白组、模型组灌服每毫升含有 0. 1 g 炭
末的生理盐水。给药 30 min 后,脱颈椎处死小鼠,打开腹腔,剪
取幽门至盲段的小肠,置于水平光滑面上,轻轻将小肠拉成直线,
测量自幽门端至炭末最前端和盲肠端的长度,以二者之百分比为
小肠推进率[2,3]。
实验数据以 珋x ± s表示,应用 SPSS 13. 0 统计软件进行单因素
设计的方差分析。
表 1 各组给药剂量
组别 给药剂量
空白 等体积的生理盐水
模型 等体积的生理盐水
阳性 麻仁润肠丸 2. 8 g /kg(折合临床给药 12 g /60 kg)
玄参饮片等剂量 3. 5 g /kg(折合临床给药 15 g /60 kg)
玄参破壁粉粒等剂量 3. 5 g /kg(折合临床给药 15 g /60 kg)
玄参破壁粉粒 4 /5 剂量 2. 8 g /kg(折合临床给药 12 g /60 kg)
玄参破壁粉粒 3 /5 剂量 2. 1 g /kg(折合临床给药 9 g /60 kg)
玄参破壁粉粒 2 /5 剂量 1. 4 g /kg(折合临床给药 6 g /60 kg)
3 结果
3. 1 一般状态 造模第 7 天,造模小鼠出现粪便干结、量少,饮食
减少。动物正常反射存在,未出现中毒症状及死亡情况。造模期
间,各组动物体质量之间无显著性差异。结果见表 1。
表 1 造模期间动物体质量情况(珋x ± s) g
组别 第 1 天 第 3 天 第 5 天 第 7 天
空白 20. 44 ± 0. 99 23. 43 ± 1. 13 25. 81 ± 1. 53 27. 69 ± 1. 60
模型 20. 94 ± 0. 84 23. 58 ± 0. 73 25. 59 ± 1. 38 27. 30 ± 1. 83
阳性 20. 72 ± 0. 94 23. 85 ± 1. 21 25. 86 ± 1. 49 27. 70 ± 1. 72
饮片 20. 52 ± 1. 14 23. 14 ± 0. 73 25. 32 ± 0. 94 27. 18 ± 1. 59
粉粒 20. 49 ± 1. 05 24. 06 ± 1. 02 25. 84 ± 1. 45 27. 90 ± 1. 61
粉粒 4 /5 剂量 20. 70 ± 0. 86 23. 64 ± 0. 99 25. 59 ± 0. 99 27. 45 ± 1. 55
粉粒 3 /5 剂量 20. 44 ± 1. 16 23. 75 ± 1. 28 25. 87 ± 1. 68 27. 28 ± 1. 88
粉粒 2 /5 剂量 20. 43 ± 1. 15 23. 09 ± 1. 24 24. 71 ± 0. 97 26. 34 ± 1. 14
= 10
3. 2 玄参破壁粉粒对小鼠排便的影响 由表 2 可见,与空白组比
较,模型组首粒排便时间明显延长,6h 内排便粒数明显减少,表
明津伤便秘模型小鼠建立成功(P < 0. 001)。与模型组相比,阳
性组、玄参饮片组、玄参破壁粉粒等剂量组动物的首粒排便时间
显著缩短。饮片组 6h内排便粒数较模型组显著增多。玄参破壁
粉粒等剂量组、破壁粉粒 4 /5 剂量组动物首粒排便时间与饮片组
无显著性差异,玄参破壁粉粒等剂量组、破壁粉粒 4 /5 剂量组、3 /
5 剂量组动物 6h内排便粒数与饮片组无显著性差异。
3. 3 玄参破壁粉粒对小鼠小肠推进运动的影响 由表 3 可知,模
型组的小肠推进率明显低于空白组(P < 0. 001) ,说明模型建立
成功。与模型组比较,各剂量玄参破壁粉粒组、饮片组和阳性组
对便秘模型小鼠的小肠蠕动和推进率有显著增强(P < 0. 05,P <
0. 01,P < 0. 001)。各剂量玄参破壁粉粒组与饮片组比较,小肠
炭末推进率无显著性差异。
表 2 玄参破壁粉粒及其常规饮片对小鼠排便的影响(珋x ± s)
组别 首粒排便时间 / s 6h内排便粒数
空白 14. 30 ± 16. 97 17. 10 ± 5. 07
模型 156. 60 ± 80. 46*** 10. 40 ± 3. 13***
阳性 21. 30 ± 12. 72 ### 13. 10 ± 2. 81*
饮片 75. 10 ± 63. 84* ## 14. 40 ± 4. 50#
粉粒 83. 70 ± 45. 63* # 12. 10 ± 2. 64**
粉粒 4 /5 剂量 113. 00 ± 48. 35*** 12. 50 ± 3. 69**
粉粒 3 /5 剂量 133. 10 ± 75. 36*** ▲ 12. 50 ± 2. 72**
粉粒 2 /5 剂量 181. 80 ± 108. 21***▲▲▲ 10. 90 ± 4. 07***▲
与空白对照组比较,* P <0. 05 ,**P < 0. 01 ,***P < 0. 001;与模型组比较,
#P <0. 05,###P <0. 001;与饮片组比较,▲P < 0. 05,▲▲P < 0. 01 ,▲▲▲P < 0. 001;
n =10
表 3 玄参破壁粉粒及其常规饮片对小鼠小肠推进运动的影响(珋x ± s)
组别 炭末推进长度 /cm 小肠全长 /cm 推进率(%)
空白 34. 15 ± 4. 39 43. 05 ± 3. 80 79. 50 ± 8. 91
模型 30. 60 ± 4. 14 46. 40 ± 4. 84 66. 01 ± 6. 31***
阳性 36. 20 ± 3. 85 47. 20 ± 2. 69 76. 61 ± 6. 08##
饮片 37. 50 ± 4. 43 47. 40 ± 4. 79 79. 29 ± 7. 21###
粉粒 37. 50 ± 3. 98 47. 45 ± 1. 89 79. 11 ± 8. 36###
粉粒 4 /5 剂量 36. 20 ± 2. 53 48. 65 ± 2. 19 74. 48 ± 5. 26#
粉粒 3 /5 剂量 35. 10 ± 7. 37 47. 00 ± 4. 71 74. 29 ± 10. 61#
粉粒 2 /5 剂量 34. 55 ± 3. 90 46. 60 ± 3. 57 74. 37 ± 8. 80#
与空白对照组比较***P < 0. 001,与模型组比较#P < 0. 05 ##P < 0. 01###P <
0. 001;n =10
4 讨论
玄参始载于《神农本草经》,列为中品,性微寒,味甘、苦、咸,
具有滋阴、降火、生津、凉血、解毒等功效[4]。临床用治肠燥津枯
便秘,常配生地黄、麦冬同用,以“增水行舟”,如增液汤。玄参破
壁粉粒是将玄参饮片进行细胞级粉碎后加工而成的一种新型中
药饮片,较传统中药饮片,具有生物利用度高、药材利用率高、应
用方式便捷等优势。
本实验采用灌胃甲状腺素和利血平的造模方法复制阴虚津
伤证便秘。造模动物躁动不安,粪便干结量少,饮食减少,首粒排
便时间明显延长,6h内排便粒数、小肠炭末推进率较空白组明显
下降。该模型体现了临床阴虚津伤便秘的特征表现,因此是研究
玄参治疗阴虚津亏证便秘的较为理想的病证结合动物模型。
玄参破壁粉粒与常规饮片药效学对比研究结果:破壁粉粒等
剂量组、破壁粉粒 4 /5 剂量组的首粒排便时间与饮片组无显著性
差异。破壁粉粒等剂量组、破壁粉粒 4 /5 剂量组、破壁粉粒 3 /5
剂量组 6h内排便粒数与饮片组无显著差异;各剂量玄参破壁粉
粒组与饮片组之间小肠炭末推进率无显著性差异,且明显高于模
型组。综合各项指标,玄参破壁粉粒 3 /5 剂量组与常规饮片组的
增液通便作用等效。在同等剂量下,玄参破壁粉粒通便作用强于
玄参常规饮片。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL. 22 NO. 9 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期