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藤紫珠化学成分研究



全 文 :图 5 玉龙鞭叶横切面显微特征详图(×40)
1. 上表皮 2. 腺毛 3. 栅栏组织 4. 海绵组织 5. 木质
部 6. 韧皮部 7. 下表皮 8. 非腺毛
2. 5 粉末显微特征 墨绿色。腺鳞头部扁球形,
直径 5. 5 ~ 14. 2 μm,由 2 ~ 4 个细胞,柄单细胞,极
短,长 6. 6 ~ 10 μm。腺毛 3 ~ 8 个细胞组成,长 6. 3
~ 8 μm,排成 1 ~ 2 列,长 6. 4 ~ 16. 4 μm。非腺毛由
1 ~ 5 个细胞组成,表面可见疣状突起,多碎断,顶端
一个细胞细长且尖,中间有 1 ~ 2 个细胞隘缩。纤维
长 58. 8 ~ 128. 1 μm,平直,具单纹孔多碎断。花粉
粒类圆形或类三角形,黄色,直径 25 ~ 51 μm,表面
具有较密的刺状突起,具萌发孔 3 个。上表皮细胞
垂周壁略平直,气孔直轴式、偶有不等式,下表皮细
胞垂周壁弯曲,保卫细胞隘缩,多为直轴式。导管多
为螺纹、具缘纹孔。见图 6。
3 小结
图 6 玉龙鞭全草粉末显微特征图
1. 腺毛 2. 腺鳞 3. 非腺毛 4. 花粉粒 5. 导管 6. 纤
维 7. 下表皮细胞及气孔 8. 上表皮细胞及气孔
玉龙鞭根横切面中木质部导管大而散在;茎横
切面中在四棱脊处木质部较发达,中柱鞘部位有纤
维束断续排列成环;粉末中非腺毛顶端细胞多细长
而尖,中间有 1 ~ 2 个细胞极度隘缩,可见腺鳞及腺
毛。以上特征可作为玉龙鞭的显微鉴定依据。
参 考 文 献
[1]江苏新医学院 . 中药大辞典[M]. 上册 . 上海:上海科
学技术出版社,1977:554.
[2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 中华本草
[M].第六册 . 上海:上海科技出版社,1999:591.
收稿日期:2013-01-10
基金项目:国家自然科学基金项目资助课题(81001613 /H2803);广东省中医药管理局资助项目(2010396) ;广州市珠江科技新星专项
(2012J2200001) ;广东省大学生创新实验项目(1057210010)
作者简介:胡敏(1986-),女,硕士,专业方向:中药活性成分及质量评价。
* 通讯作者:林朝展,E-mail:linchaozhan@ sina. com。
·化学成分·
藤紫珠化学成分研究
胡 敏,宁 娱,吴爱芝,夏玉英,祝晨蔯,林朝展*
(广州中医药大学临床药理研究所,广东 广州 510405)
摘要 目的:研究马鞭草科紫珠属植物藤紫珠的化学成分。方法:应用多种色谱方法进行分离纯化,综合运用
紫外光谱、红外光谱、质谱以及核磁共振光谱等现代波谱学方法和技术鉴定化合物的结构。结果:从藤紫珠甲醇提
取物的乙酸乙酯萃取部位中分离得到 10 个化合物,分别鉴定为:齐墩果酸(1)、2β,3β,19α-三羟基熊果酸(2)、木犀
草素-7,4-二甲醚(3)、木犀草素-3,4,7-三甲醚(4)、木犀草素-4-甲醚(5)、次大风子素(6)、木犀草素(7)、lyoni-
resinol 3α-O-β-D-glucopyranoside(8)、3,4,5-三甲氧基苯酚-β-D-呋喃芹糖氧基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、山柰
酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(10)。结论:以上化合物均为首次从藤紫珠中分离得到,其中,化合物 3、4、6、8 和 10 为
首次从紫珠属植物中分离得到。
关键词 藤紫珠;化学成分;黄酮类
中图分类号:R284. 1 /R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)04-0563-04
·365·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 4 期 2013 年 4 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.04.043
Study on Chemical Constituents of Callicarpa peii
HU Min,NING Yu,WU Ai-zhi,XIA Yu-ying,ZHU Chen-chen,LIN Chao-zhan
(Institute of Clinical Pharmacology,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China)
Abstract Objective:To study the chemical constituents of Callicarpa peii. Methods:The chemical constituents were isolated and
purified by chromatographic methods and elucidated by spectral analysis,including UV,IR,MS,1H-NMR and 13C-NMR. Results:Ten
compounds were obtained and identified as oleanolic acid(1),2β,3β,19α-trihydroxy-12-en-28-ursolic acid(2) ,luteolin -7,4-dimeth-
ylether(3) ,luteolin -3,4,7,-trimethylether(4) ,luteolin -4-methylether(5) ,hydnocarpin(6) ,luteolin(7) ,lyoniresinol 3α-O-β-D-
glucopyranoside(8) ,kelampayoside A(9) ,kaempferol -3-O-glucuronide(10). Conclusion:All these compounds are isolated from Calli-
carpa peii for the first time and compounds 3,4,6,8 and 10 are isolated from this genus for the first time .
Key words Callicarpa peii H. T. Chang;Chemical constituents;Flavonoid
马鞭草科 Verbenaceae 紫珠属 Callicarpa L. 多
种植物作为止血药应用,民间习称止血草〔1〕。藤紫
珠 Callicarpa peii H. T. Chang 的干燥叶和嫩枝在广
东粤北地区亦作为止血药用,然而有关其化学成分
研究鲜见报道。为探明其药效物质基础,本课题组
对藤紫珠的甲醇提取物乙酸乙酯部位进行了系统的
化学成分研究,采用正相硅胶、反相硅胶、大孔树脂、
Sephadex LH-20 凝胶等多种色谱技术,分离得到 10
个化合物,利用理化性质和波谱学方法并与文献数
据对照,分别鉴定为:齐墩果酸(1)、2β,3β,19α-三
羟基熊果酸(2)、木犀草素-7,4-二甲醚(3)、木犀草
素-3,4,7-三甲醚(4)、木犀草素-4-甲醚(5)、次大
风子素(6)、木犀草素(7)、lyoniresinol 3α-O-β-D-glu-
copyranoside(8)、3,4,5-三甲氧基苯酚-β-D-呋喃芹
糖氧基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、山柰酚-3-
O-β-D-葡萄糖醛酸苷(10)。以上化合物均为首次
从藤紫珠中分离得到,其中,化合物 3、4、6、8 和 10
为首次从紫珠属植物中分离得到。
1 仪器与材料
X-6 显微熔点测定仪(数显控温型,温度计未校
正);NMR用 Bruker-AV 400、500 NMR 核磁共振仪
测定;MS用 Agilent 公司质谱仪。柱层析硅胶和薄
层层析硅胶(青岛海洋化工厂),溶剂和试剂均为分
析纯(广州化学试剂厂)。RP-C18(40 ~ 63 μm),
Sephadex LH-20 (25 ~ 100 μm) ,氘代试剂吡啶
(NORELL,USA),氯仿(Cambridge Isotope Laborato-
ries,USA),DMSO(NORELL,USA)。实验所用藤紫
珠原植物于 2009 年 7 月采自广东乳源天井山,经广
州中医药大学潘超美教授鉴定为马鞭草科植物藤紫
珠 Callicarpa peii H. T. Chang 的干燥全草。凭证标
本(CP-20090910)现保存于广州中医药大学中药学
院药物分析研究室。
2 提取与分离
取干燥的藤紫珠全草 10 kg 粉碎,用甲醇冷浸
提取,提取液减压浓缩,将浸膏混悬于蒸馏水中,依
次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行反复萃取,将萃
取液分别进行减压浓缩,得到石油醚萃取物 65 g、乙
酸乙酯萃取物 130 g、正丁醇萃取物 400 g。取藤紫
珠乙酸乙酯部位浸膏(130 g)上硅胶柱,以不同浓度
的氯仿∶ 甲醇(100∶ 1 ~ 1∶ 1)进行梯度洗脱,洗脱液
每 500 mL 接一份,以 TLC 检测合并,得到 16 个流
分,其中 Fr. 1 再次进行硅胶柱层析,以石油醚∶乙酸
乙酯(5∶ 1 ~ 1 ∶ 1)进行洗脱,洗脱液每 100 mL 接一
份,以 TLC 检测合并,得到 13 个流分,Fr. 1-6 反复
进行硅胶柱层析,以石油醚∶丙酮(10∶ 1)洗脱,得到
化合物 1(68. 8 mg)。Fr. 1-4 反复进行硅胶柱层析,
以石油醚 ∶ 丙酮(10 ∶ 1)洗脱,得到化合物 3(80. 9
mg)。Fr. 1-3 反复进行硅胶柱层析,以石油醚∶丙酮
(10∶ 1)洗脱,再进行凝胶柱层析纯化,以甲醇∶氯仿
(1∶ 1)洗脱,得到化合物 4(94. 8 mg)。Fr. 4 再次进
行硅胶柱层析,以氯仿 ∶ 甲醇(50 ∶ 1)洗脱,得到 13
个流分,Fr. 4-7 进行凝胶柱层析纯化,以氯仿∶ 甲醇
(1∶ 1)洗脱,得到化合物 2(103. 9 mg)和化合物 5
(3. 8 mg)。Fr. 5 进行硅胶柱层析,以氯仿 ∶ 甲醇
(30∶ 1)洗脱,得到 11 个流分,其中 Fr. 5-6 析出黄色
粉末,经甲醇重结晶后得到化合物 6(48. 7 mg)。
Fr. 8 进行硅胶柱层析,以氯仿∶甲醇(30∶ 1)洗脱,得
到 8 个流分,其中 Fr. 8-5 进行凝胶柱层析纯化,以
氯仿∶ 甲醇(1 ∶ 1)洗脱,得到化合物 7(10. 9 mg)。
Fr. 9 进行凝胶分离纯化,再上反相硅胶柱,用 10%
甲醇水洗脱,得化合物 8(35 mg),用 20%甲醇水洗
脱得化合物 9(60 mg)。Fr. 10 进行凝胶柱分离纯
化,20%甲醇水洗脱,析出结晶得到化合物 10(32
mg)。最后经过 HPLC 检测,确定以上 10 个化合物
质量分数均达到 99%以上。
3 结构鉴定
化合物 1:白色粉末(甲醇)。Liebermann-bur-
chard反应呈阳性,提示该化合物可能为三萜类化合
物。EI-MS m/z:455. 3[M - H]-。1H-NMR (500
MHz,C5D5N)δ:0. 70(3H,s,H-24),0. 82(3H,s,H-
·465· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 4 期 2013 年 4 月
29),0. 83(3H,s,H-23) ,0. 85(3H,s,H-30) ,0. 87
(3H,s,H-25) ,0. 90(3H,s,H-26) ,1. 06(3H,s,H-
27) ,5. 20(1H,br s,H-12) ;13C-NMR(125 MHz,
C5D5N)δ:38. 55(C-1),27. 45(C-2) ,79. 35(C-3) ,
38. 65(C-4) ,55. 58(C-5) ,18. 1(C-6) ,32. 24(C-7) ,
39. 17(C-8) ,47. 75(C-9) ,38. 65(C-10) ,22. 70(C-
11) ,122. 34(C-12) ,146. 10(C-13) ,41. 24(C-14) ,
27. 45(C-15) ,23. 54(C-16) ,47. 75(C-17) ,41. 02
(C-18) ,43. 77(C-19) ,30. 09(C-20) ,34. 55(C-21) ,
34. 47(C-22) ,27. 45(C-23) ,15. 45(C-24) ,15. 32
(C-25) ,16. 36(C-26) ,25. 94(C-27) ,181. 47(C-
28) ,32. 24(C-29) ,23. 54(C-30)。以上波谱数据与
文献〔2〕报道对照基本一致,故鉴定化合物 1 为齐墩
果酸。
化合物 2:白色粉末(甲醇)。Liebermann-bur-
chard反应呈阳性,提示该化合物可能为三萜类化合
物。EI-MS m/z:487. 3 [M - H]-。1H-NMR(400
MHz,MeOD)δ:5. 23(1H,br t,12-H),3. 25(1H,s,
18-H) ,3. 40(1H,d,J = 4. 4 Hz,H-3)和 6 个甲基氢
信号(δ1. 30,1. 15,0. 95,0. 9,0. 88,0. 83,3H ×6,s)。
以上波谱数据与文献〔3〕报道对照基本一致,故鉴定
化合物 2 为 2β,3β,19α-三羟基熊果酸。
化合物 3:黄色结晶(甲醇)。盐酸-镁粉反应阳
性,提示该化合物可能为黄酮类化合物。EI-MS
m/z:315 [M + H]+。1H-NMR(500 MHz,C5D5N)δ:
3. 72(3H,s,-OCH3),3. 87 (3H,s,-OCH3),6. 65
(1H,d,J = 2. 2 Hz,H-6) ,6. 79(1H,d,J = 2. 2 Hz,H-
8) ,7. 66(1H,s,H-3) ,7. 34(1H,d,J = 8. 5 Hz,H-
5) ,7. 67(1H,dd,J = 8. 5,2. 2 Hz,H-6) ,7. 66(1H,
d,J = 2. 2 Hz,H-2) ,13. 67(1H,s,5-OH) ;13 C-NMR
(125 MHz,C5D5N)δ:164. 40(C-2),103. 84(C-3) ,
182. 39(C-4) ,162. 25(C-5) ,98. 21(C-6) ,165. 40
(C-7) ,92. 45(C-8) ,157. 70(C-9) ,105. 48(C-10) ,
121. 93 (C-1) ,109. 84 (C-2) ,148. 56 (C-3) ,
152. 14(C-4) ,116. 57(C-5) ,120. 97(C-6) ,55. 58
(7-OCH3),55. 46(4-OCH3)。以上波谱数据与文
献〔4〕报道对照基本一致,故鉴定化合物 3 为木犀草
素-7,4-二甲醚。
化合物 4:黄色结晶(甲醇)。盐酸-镁粉反应阳
性,提示该化合物可能为黄酮类化合物。EI-MS
m/z:329 [M + H]+。1H-NMR(500 MHz,C5D5N)δ:
3. 73(3H,s,-OCH3),3. 81 (3H,s,-OCH3),3. 83
(3H,s,-OCH3),6. 62(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-6) ,6. 75
(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-8) ,7. 58(2H,d,J = 2. 0 Hz,H-
2) ,7. 69(1H,dd,J = 8. 5,2. 0 Hz) ,7. 08(1H,d,J =
8. 5 Hz,H-5) ,13. 70(1H,s,5-OH) ;13 C-NMR(125
MHz,C5D5N)δ:164. 2(C-2),104. 7(C-3) ,182. 4(C-
4) ,162. 5(C-5) ,98. 5(C-6) ,165. 7(C-7) ,92. 7(C-
8) ,157. 9(C-9) ,105. 7(C-10) ,123. 8(C-1) ,109. 8
(C-2) ,149. 4(C-3) ,153. 0(C-4) ,111. 8(C-5) ,
120. 5(C-6) ,55. 6(-OCH3),55. 7(-OCH3),55. 8
(-OCH3)。以上波谱数据与文献
〔5〕报道对照基本一
致,故鉴定化合物 4 为木犀草素-3,4,7-三甲醚。
化合物 5:黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉反应呈
阳性,提示该化合物可能为黄酮类化合物。EI-MS
m/z:299[M - H]-。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)
δ:12. 97(1H,s,OH-5),6. 88(1H,s,H-3) ,6. 93(1H,
d,J = 8. 0 Hz,H-5) ,7. 56(1H,dd,J = 8. 0,2. 0 Hz,
H-2,6) ,7. 54(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-2) ,6. 19(1H,
d,J = 2. 0 Hz,H-6) ,6. 51(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-8) ,
3. 88(3H,s,-OCH3);
13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)
δ:163. 77 (C-2),103. 78 (C-3) ,181. 88 (C-4) ,
157. 41(C-5) ,98. 90(C-6) ,164. 20(C-7) ,94. 14(C-
8) ,161. 49(C-9) ,103. 28(C-10) ,121. 59(C-1) ,
115. 85 (C-2) ,148. 11 (C-3) ,150. 79 (C-4) ,
115. 84(C-5) ,120. 46(C-6) ,56. 03(-OCH3)。以
上波谱数据与文献〔6〕报道对照基本一致,故鉴定化
合物 5 为木犀草素-4-甲醚。
化合物 6:淡黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉反应
阳性,提示该化合物可能为黄酮类化合物。EI-MS
m/z:465. 1 [M + H]+。1H-NMR(500 MHz,DMSO-
d6)δ:12. 97(1H,s,5-OH),11. 01(1H,s,7-OH) ,
6. 87(1H,s,H-3) ,6. 27(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-6) ,
6. 59(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-8) ,7. 66(1H,d,J = 2. 0
Hz,H-2) ,7. 14(1H,d,J = 8. 5 Hz,H-5) ,7. 67(1H,
br d,J = 8. 5 Hz,H-6) ,7. 10(1H,br s,H-2″) ,6. 88
(1H,d,J = 8. 0 Hz,H-5″) ,7. 14(1H,br d,J = 8. 0
Hz,H-6″) ,5. 11(1H,br s,H-7″) ,4. 34(1H,br s,H-
8″) ,3. 65(1H,d,J = 12. 0 Hz,H-9″a) ,3. 23(1H,d,
J = 12. 0 Hz,H-9″) ,3. 84(3H,s,3-OCH3);
13 C-NMR
(125 MHz,DMSO-d6)δ:164. 11(C-2),103. 74(C-
3) ,181. 62 (C-4) ,157. 18 (C-5) ,98. 76 (C-6) ,
161. 25(C-7) ,93. 94(C-8) ,162. 78(C-9) ,103. 62
(C-10) ,123. 51(C-1) ,114. 66(C-2) ,143. 49(C-
3) ,147. 48(C-4) ,117. 38(C-5) ,119. 75(C-6) ,
126. 78 (C-1″) ,111. 57 (C-2″) ,147. 48 (C-4″) ,
115. 18(C-5″) ,120. 43(C-6″) ,77. 82(C-7″) ,76. 20
(C-8″) ,59. 90(C-9″) ,55. 53(3″-OCH3)。以上波谱
数据与文献〔7〕报道对照基本一致,故鉴定化合物 6
为次大风子素。
·565·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 4 期 2013 年 4 月
化合物 7:黄色粉末(甲醇),mp 328 ~ 330 ℃。
10%硫酸-乙醇呈黄色斑点,与木犀草素对照品混合
熔点不下降,薄层层析 Rf 值与木犀草素一致,故鉴
定化合物 7 为木犀草素。
化合物 8:白色粉末(甲醇)。ESI-MS m/z:
605. 7[M + Na]+。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:
2. 70(1H,dd,J = 4. 4,15. 2 Hz,H-1a),2. 60(1H,m,
H-1b) ,1. 70(1H,m,H-2) ,3. 41(2H,dd,J = 5. 0,
10. 0 Hz,H-2α) ,2. 07(1H,m,H-3) ,3. 44,3. 89(2H,
m,H-3α) ,4. 41(1H,d,J = 6. 0 Hz,H-4) ,6. 57(1H,
s,H-8) ,3. 84(3H,s,5-OMe) ,3. 33(3H,s,7-OMe) ,
6. 41(2H,s,H-2,6) ,3. 73(6H,s,3,5-OMe) ,
4. 27(1H,d,J = 8. 0 Hz,H-1″) ;13 C-NMR(100 MHz,
CD3OD)δ:33. 9(C-1),40. 6(C-2) ,66. 2(C-2α) ,
46. 7(C-3) ,71. 5(C-3α) ,42. 8(C-4) ,147. 6(C-5) ,
138. 9(C-6) ,148. 7(C-7) ,107. 9(C-8) ,130. 2(C-
9) ,126. 5(C-10) ,139. 4(C-1) ,106. 9(C-2,6) ,
149. 0(C-3,5) ,134. 5(C-4) ,106. 9C(-1″) ,75. 2
(C-2″) ,78. 0(C-3″) ,71. 7(C-4″) ,78. 3(C-5″) ,62. 9
(C-6″)。以上波谱数据与文献〔8〕报道对照基本一
致,故鉴定化合物 8 为 lyoniresinol 3α-O-β-D-gluco-
pranoside。
化合物 9:白色粉末(甲醇)。ESI-MS m/z:
501. 5[M + Na]+。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:
6. 45(2H,s,H-2,6),3. 80(6H,s,3,5-OMe) ,3. 69
(3H,s,4-OMe) ,4. 78(1H,d,J = 7. 2 Hz,H-1) ,
4. 95(1H,d,J = 2. 4 Hz,H-1″) ,4. 03,3. 93(1H,d,
J = 9. 6 Hz,H-4) ;13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ:
155. 9(C-1),154. 8(C-3,5) ,96. 3(C-2,6) ,134. 6
(C-4) ,58. 4(3,5-OMe) ,63. 3(4-OMe) ,103. 2(C-
1) ,74. 9(C-2) ,77. 0(C-3) ,71. 6(C-4) ,77. 9(C-
5) ,68. 8(C-6) ,110. 8(C-1″) ,77. 9(C-2″) ,80. 5
(C-3″) ,74. 9(C-4″) ,65. 4(C-5″)。以上波谱数据与
文献〔9〕报道对照基本一致,故鉴定化合物 9 为 3,4,
5-三甲氧基苯酚-β-D-呋喃芹糖氧基-(1→6)-β-D-吡
喃葡萄糖苷。
化合物 10:浅黄色粉末(甲醇)。EI-MS m/z:
463. 7[M + H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:
12. 75(1H,s,5-OH),6. 83(1H,s,H-6) ,7. 00(1H,s,
H-8) ,7. 94(1H,d,J = 8. 8 Hz,H-2,6) ,6. 95(1H,
d,J = 8. 8 Hz,H-3,5) ,5. 22(H-1,d,J = 7. 6 Hz) ,
5. 50(H-5,d,J = 4. 0 Hz) ;13 C-NMR(100 MHz,DM-
SO-d6)δ:149. 0(C-2),130. 4(C-3) ,182. 2(C-4) ,
161. 2(C-5) ,99. 9(C-6) ,164. 1(C-7) ,93. 5(C-8) ,
146. 4(C-9) ,105. 6(C-10) ,121. 2(C-1) ,128. 4(C-
2,6) ,115. 9(C-3,5) ,151. 0(C-4) ,102. 5(C-
1) ,72. 8(C-2) ,75. 2(C-3) ,71. 3(C-4) ,75. 5(C-
5) ,170. 0(C-6)。以上波谱数据与文献〔10〕报道对
照基本一致,故鉴定化合物 10 为山柰酚-3-O-β-D-葡
萄糖醛酸苷。
参 考 文 献
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·665· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 4 期 2013 年 4 月