全 文 ：黄杞总黄酮对脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用
冯 静1，2)，柴东燕2)，秦玉花2)，乔海灵1)#
1)郑州大学基础医学院临床药理学教研室 郑州 450001 2)河南省人民医院药学部 郑州 450003
#通讯作者，男，1963 年 4 月生，博士，教授，研究方向:药理学，E-mail:qiaohailing@ zzu． edu． cn
关键词 黄杞总黄酮;脑缺血再灌注;抗氧化;大鼠
中图分类号 R743
摘要 目的:探讨黄杞总黄酮对脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用及可能机制。方法:48 只 SD大鼠随机分成 6
组，假手术组、模型组、黄杞总黄酮(200、100、50 mg /kg)组、脑心通(292 mg /kg)组，每组 8 只。采用线栓法建立脑
缺血再灌注模型。进行神经行为评分和脑组织含水量测定。然后检测血清中一氧化氮(NO)水平、脑组织匀浆中
丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果:各组间神经行为评分、
脑组织含水量、血清中 NO 水平、脑组织匀浆中 MDA 含量、SOD 和 GSH-Px 活性比较，差异均有统计学意义(F 为
35． 305、40． 259、15． 338、21． 022、10． 497 和 12． 381，P 均 ＜ 0． 001)。除 100 mg /kg 黄杞总黄酮组 GSH-Px 外，200 和
100 mg /kg黄杞总黄酮组各指标与模型组比较，差异均有统计学意义(P均 ＜ 0． 05)。结论:黄杞总黄酮对脑缺血再
灌注损伤具有改善作用，可能与其抗氧化活性有关。
Protective effects of total flavonoids of engelhardtia roxburghiana on brain
of cerebral ischemic / reperfusion rats
FENG Jing1，2)，CHAI Dongyan2)，QIN Yuhua2)，QIAO Hailing1)
1)Department of Clinical Pharmacology，College of Basic Medical Sciences，Zhengzhou University，Zheng-
zhou 450001 2)Department of Pharmacology，Henan Provincial People’s Hospital，Zhengzhou 450003
Key words total flavonoids of engelhardtia roxburghiana;cerebral ischemia / reperfusion;antioxidant;rat
Abstract Aim:To investigate the protective effects of total flavonoids of engelhardtia roxburghiana(TFER)on brain
of cerebral ischemic / reperfusion rats and the possible mechanism． Methods:A total of 48 SD rats were randomly divided in-
to six groups (8 rats per group) :sham group，model group，200，100，50 mg /kg TFER groups and 292 mg /kg Naoxintong
group． The model of cerebral ischemia / reperfusion was set up using suture method． The neurobehavioral scores and brain
water content were determined，and then，serum NO level，MDA content，SOD and GSH-Px activities were evaluated． Re-
sults:There were significant differences in the neurobehavioral scores，brain water content，NO level，MDA content，SOD
and GSH-Px activities among six groups(F = 35． 305，40． 259，15． 338，21． 022，10． 497，12． 381，P ＜ 0． 001)． Except
GSH-Px of 100 mg /kg TFER group，there were significant differences in other indexes of 100 and 200 mg /kg TFER groups
compared with those of model group(P ＜ 0． 05)． Conclusion:TFER possesses protective effects on brain of cerebral ische-
mic / reperfusion injury． The efficacy may be due to its antioxidant activity．
黄杞总黄酮是一类从胡桃科植物黄杞干燥叶
中提取的活性成分。现代药理研究［1-2］表明，它具
有抗动脉粥样硬化、降血糖等作用。但黄杞总黄
酮对脑的保护作用鲜有报道。作者采用线栓法建
立大鼠脑缺血再灌注模型，观察黄杞总黄酮对神
经行为评分、脑组织含水量、一氧化氮(NO)水平、
丙二醛(MDA)含量以及抗氧化物酶活性等指标的
影响，报道如下。
1 材料与方法
1． 1 药品、试剂与仪器 黄杞总黄酮由郑州大学药
学院提供，脑心通胶囊为陕西省咸阳步长制药有限
公司产品。NO、MDA、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱
甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒由南京建成生物
工程研究所提供，其他试剂均为国产分析纯。AR-
2140 型万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有
·019· 郑州大学学报(医学版) 2011 年 11 月 第 46 卷 第 6 期
DOI:10.13705/j.issn.1671-6825.2011.06.013
限公司) ，TGL 16M 离心机(湖南凯达科学仪器有限
公司) ，多功能酶标仪(Sigma公司)。
1． 2 动物分组及给药 清洁级 SD 雄性大鼠 48
只，体质量 240 ～ 260 g，由河南省实验动物中心提
供，合格证号:410116。将 SD 大鼠采用随机数字表
法分为假手术组、模型组、黄杞总黄酮(200、100、50
mg /kg)组、脑心通(292 mg /kg)组，每组 8 只。灌胃
给药，1 次 /d，第 7 次给药后 1 h造模，造模后再给药
1 次。假手术组和模型组给予等量的生理盐水(10
mL /kg)。
1． 3 造模方法 采用线栓法制备大脑中动脉局灶
性栓塞模型［3］。大鼠用体积分数 10% 水合氯醛
(350 mg /kg)麻醉。将麻醉后的大鼠仰卧固定，颈
部备皮，消毒皮肤，沿颈部中线切开皮肤，分离皮下
筋膜及肌肉组织。手术显微镜下分离左侧颈总动脉
(CCA)及其颈内动脉(ICA)和颈外动脉(ECA)分
支。根部结扎 ECA。夹闭 CCA 和 ICA。在 CCA 上
开一小口，将鱼线沿着 CCA，穿过 ICA 和 ECA 分叉
处进入 ICA。松开 ICA，继续将鱼线插入到 ICA 颅
内段。自 ICA起始部的插入长度约为 1． 8 cm，表明
线的头端已穿过大脑中动脉起始部。结扎 CCA 和
ICA。术中白炽灯加温，维持大鼠肛温约 37 ℃。术
后缝合伤口，动物回笼。假手术组大鼠仅施行手术
而不插入鱼线，余 3 组缺血 2 h 后拔出线栓至 ECA
和 ICA分叉处。
1． 4 神经症状评分 采用 5 分制评分标准，于术后
24 h进行评定。0 分:正常，无神经损伤症状;1 分:
不能完全伸展对侧前爪;2 分:提尾后向外侧转圈;3
分:行走时向对侧倾倒;4 分:不能自发行走或意识
丧失。
1． 5 脑组织含水量测定 再灌注 22 h 后，将大鼠
迅速断头取脑，用干湿法测脑组织含水量。在冰块
上迅速取脑，用万分之一天平准确称取脑质量，然后
置于 100 ℃烘箱 24 h后，再次称量，(1 －干质量 /湿
质量)× 100%即为含水量。
1． 6 生化指标测定 再灌注 22 h 后，腹主动脉取
血，1 500 r /min 离心 10 min，取上清液，保存待测。
取血后，大鼠断头取脑，用滤纸吸干脑表面残血，去
除嗅脑、脑干、小脑。将脑组织置于匀浆器中，用冰
生理盐水冰浴下制备成 100 g /L的脑组织匀浆。匀
浆 3 000 r /min离心 10 min，取上清液。血清中 NO
和脑组织匀浆中 MDA、SOD、GSH-Px 的检测按照试
剂盒说明书操作。
1． 7 统计学处理 采用 SPSS 11． 5 进行数据分析，
组间各指标的比较均应用单因素方差分析，两两比
较采用 SNK-q检验，检验水准 α = 0． 05。
2 结果
2． 1 各组大鼠神经行为评分及脑组织含水量测定
结果 见表 1。
表 1 各组大鼠神经行为评分及脑组织含水量的比较(n = 8)
组别
神经行为
评分
脑组织含水量 /%
假手术组 0 ± 0* 75． 48 ± 0． 96*
模型组 3． 38 ± 0． 52 81． 29 ± 1． 12
200 mg /kg黄杞总黄酮组 2． 13 ± 0． 64* 78． 26 ± 1． 03*
100 mg /kg黄杞总黄酮组 2． 63 ± 0． 74* 78． 93 ± 1． 05*
50 mg /kg黄杞总黄酮组 3． 00 ± 0． 76 80． 78 ± 1． 16
脑心通组 2． 00 ± 0． 76* 77． 95 ± 0． 97*
F 35． 305 40． 259
P ＜ 0． 001 ＜ 0． 001
* 与模型组比较，P ＜ 0． 05。
2． 2 各组大鼠血清 NO 水平和脑组织 MDA 含量
比较结果 见表 2。
表 2 各组大鼠 NO水平和MDA含量的比较(n = 8)
组别
c(NO)/
(μmol·L －1)
MDA/
(μmol·g －1)
假手术组 16． 19 ± 4． 25* 3． 47 ± 0． 58*
模型组 32． 07 ± 5． 44 5． 50 ± 0． 56
200 mg /kg黄杞总黄酮组 22． 52 ± 4． 61* 3． 94 ± 0． 60*
100 mg /kg黄杞总黄酮组 27． 63 ± 4． 85* 4． 77 ± 0． 54*
50 mg /kg黄杞总黄酮组 30． 59 ± 5． 53 5． 33 ± 0． 59
脑心通组 21． 82 ± 4． 38* 3． 86 ± 0． 60*
F 15． 338 21． 022
P ＜ 0． 001 ＜ 0． 001
* 与模型组比较，P ＜ 0． 05。
2． 3 各组大鼠脑组织中抗氧化物酶活性比较结果
见表 3。
表 3 各组大鼠抗氧化物酶活性的比较(n = 8)
组别
SOD /
(U·mg －1)
GSH-Px /
(U·mg －1)
假手术组 312． 69 ± 47． 56* 53． 75 ± 5． 85*
模型组 190． 89 ± 49． 50 27． 41 ± 4． 72
200 mg /kg黄杞总黄酮组 258． 87 ± 52． 63* 43． 31 ± 5． 23*
100 mg /kg黄杞总黄酮组 237． 52 ± 44． 26* 32． 05 ± 6． 01
50 mg /kg黄杞总黄酮组 205． 36 ± 53． 85 29． 21 ± 5． 33
脑心通组 261． 32 ± 50． 37* 44． 36 ± 5． 37*
F 10． 497 12． 381
P ＜ 0． 001 ＜ 0． 001
* 与模型组比较，P ＜ 0． 05。
·119·Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences) Nov． 2011 Vol． 46 No． 6
3 讨论
氧化应激是引起脑缺血再灌注损伤的关键因素
之一。脑缺血时，脑内源性抗氧化系统功能降低，活
性氧大量堆积;再灌注恢复血流后，氧重新进入脑组
织，生成急剧增加的活性氧作用于细胞膜，诱导膜磷
脂结构中不饱和脂肪酸过氧化，导致脑细胞损
伤［4-5］。此外，氧化应激促使神经元 NO 产生增多，
而 NO又可增加活性氧对神经细胞的损伤作用。作
者观察到，脑缺血再灌注后，大鼠血清 NO 水平和
MDA含量明显升高，SOD 和 GSH-Px 活性下降，表
明脑组织处于氧化应激状态。而黄杞总黄酮各组同
模型组比较，血清中 NO 水平、脑组织中 MDA 含量
降低，脑组织中 SOD和 GSH-Px活性受抑，说明黄杞
总黄酮具有较强的抗氧化作用，能增强缺血脑组织
的抗氧化能力。
脑缺血再灌注后，活性氧引起神经元损伤及神
经功能损害，大鼠出现神经功能障碍。该实验结果
显示黄杞总黄酮可明显降低神经功能评分及脑含水
量，表明黄杞总黄酮可有效地改善大鼠神经功能障
碍，对脑组织具有保护作用，其机制可能与降低血清
NO水平、增强脑组织抗氧化物酶活性以及抑制脂
质过氧化有关。
参考文献
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ischemia-reperfusion injury［J］． Curr Med Chem，2008，15
(1) :1
(2011-04-08 收稿 责任编辑姜春霞)
亳菊中木犀草素和木犀草苷含量的反相高效液相色谱法测定
王存良1)△，李远哲2)
1)郑州大学第一附属医院药剂科 郑州 450052 2)河南工业大学生物制药系 郑州 450001
△男，1973 年 2 月生，主管药师，研究方向:药理学，E-mail:wangcunliang730217@ 163． com
关键词 反相高效液相色谱;亳菊;木犀草素;木犀草苷
中图分类号 R284
摘要 目的:建立亳菊中木犀草素和木犀草苷含量的反相高效液相色谱测定方法。方法:采用反相高效液相
色谱法，色谱柱为 Scienhome C18 (4． 6 mm × 200 mm，5 μm) ，检测波长 350 nm，柱温 30 ℃，流速 1 mL /min。结果:
木犀草苷含量在 0． 004 8 ～ 0． 038 4 μg内线性良好，Y = 10 000 000X － 6 650，r = 0． 999 9，回收率为 104． 9%，RSD为
1． 64%;木犀草素含量在 0． 032 ～ 0． 256 μg 内线性良好，Y = 8 000 000X － 20 581，r = 0． 999 9，回收率为 101． 7%，
RSD为 1． 68%。结论:该测定方法准确可靠，重现性好，对亳菊的质量控制有重要意义。
Determination of luteolin-7-O-glucoside and luteolin in Chrysanthemum
morifolium by RP-HPLC
WANG Cunliang1)，LI Yuanzhe2)
1)Department of Pharmacy，the First Affiliated Hospital，Zhengzhou University，Zhengzhou 450052
2)Department of Biological Pharmaceutical，Henan University of Technology，Zhengzhou 450001
·219· 郑州大学学报(医学版) 2011 年 11 月 第 46 卷 第 6 期