全 文 ：南瓜及刺山柑多糖对小鼠免疫功能的影响
包晓玮1 ,李凤鸣2 ,韩海霞1 ,朱金芳1 ,戴小华1 ,王 颖1 ,黄 娇1
(1.新疆农业大学药学院 ,乌鲁木齐　830052;2.新疆农业大学动物科学学院 ,乌鲁木齐　830052)
摘　要:【目的】研究南瓜和刺山柑多糖对正常小鼠免疫功能调节作用的影响。【方法】利用超声提取法得到
80%的乙醇粗提物 ,并绘制葡萄糖标准曲线。实验小鼠分为 2 组 , 将南瓜和刺山柑多糖配成(50 mg/kg·d), 分
别经胃灌注南瓜及刺山柑多糖 ,每天 1 次连续 7 d , 对照组小鼠用等量蒸馏水代替。于实验第 8 d 进行小鼠体
内免疫功能测试。【结果】南瓜和刺山柑多糖含量分别为 67.30%和 37.39%, 南瓜多糖能提高小鼠免疫器官
重量 、巨噬细胞的吞噬功能 , 刺山柑多糖作用不明显。【结论】南瓜多糖具有免疫调节活性作用。
关键词:南瓜和刺山柑多糖;免疫调节活性
中图分类号:S188;S642.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-4330(2010)03-0508-04
Effects of Pumpkin Polycose and Capparis spinosa Linn Polycose
on Immune Function of Mice
BAO Xiao-wei1 ,LI Feng-ming2 ,HAN Hai-xia1 ,ZHU Jin-fang1
DAI Xiao-hua1 ,WANG Ying1 ,HUANG Jiao1
(1.College of Pharmaceutical Science of Xinjiang Agricultural University , Urumqi 830052 , China ;2.College
of Animal Science of Xinjiang Agricultural University ,Urumqi 830052 , China)
Abstract:【Objective】To observe the effects of pumpkin polycose and Capparis spinosa L.inn polycose on
immune function of mice.【Method】80%Alcohol crude extract was obtained by supersound pheresis , and draw
glycose standard curve.The experiment mice were divided into two groups , the pumpkin polycose and Capparis
spinosa L.inn are prepared for 50 mg/kg·d , the pumpkin polycose and Capparis spinosa L.inn are infused via
stomach separately , one time a day , 7 days in succession , the control group mice were substituted by distilled
water.The mice vivo immune function test is carried out on the 8th day;【Result】The content of pumpkin polycose
and Capparis spinosa L.inn polycose were 67.30% and 37.39% respectively ,Pumpkin polycose can increase the
weight of the immune organs of mice ,phagocytic function of the macrophages , the effects of Capparis spinosa L.inn
polycose is not obvious.【Conclusion】Pumpkin polycose can enhance the immune functions of mice.
Key words:Pumpkin polycose and Capparis spinosa L.inn polycose ;immune functions
0　引言
【研究意义】南瓜为草本植物 ,对自然环境要求不高 ,其环境适应力强 ,在我国各地均有栽培。【前人
研究进展】刺山柑的经济用途很广泛 ,其可药用 ,据《新疆药用植物志》记载 ,刺山柑叶 、果和根皮均能入
药 ,主要功能有祛风除湿 、止痛 、消肿 ,外敷患处治风湿性关节炎和疮毒 ,对其多糖的研究几乎没有[ 2～ 3] 。
多糖是生物体内普遍存在的一大类生物大分子 ,具有许多重要的生物功能 ,各国学者从各种生物体内提
取研究了大量活性多糖[ 5] ,发现多糖具有促进机体免疫功能 、抗菌 、抗病毒抗寄生虫 、抗肿瘤和抗辐射等
一系列作用。【本研究切入点】迄今为止 ,对南瓜的研究大多集中在南瓜具有降血压 ,提高免疫力等多项
保健功能的研究上 ,但对南瓜多糖的免疫功能的实验研究还不多[ 1] 。【拟解决的关键问题】针对南瓜多
糖和刺山柑多糖对小鼠的免疫作用进行了研究。
收稿日期:2009-09-22
基金项目:新疆农业大学校前期资助项目
作者简介:包晓玮(1969-),女 ,浙江松阳人 ,讲师 ,博士研究生 ,研究方向为动物营养
通讯作者:王颖(1957-),女 ,教授 ,研究方向为药理与毒理学 ,(E-mail)wy2028@yahoo.com.cn
新疆农业科学　2010 ,47(3):508-511
Xinjiang Agricultural Sciences
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
1　材料与方法
1.1　材 料
　　南瓜购于乌鲁木齐市北园春农贸市场;维药材刺山柑为新疆吐鲁番野生果实 。昆明种小鼠 60只
(20±2)g♀♂各半 ,购于新疆乌鲁木齐市新疆医科大学实验动物中心 ,健康三黄鸡购于乌鲁木齐市北园
春农贸市场。葡萄糖标准品购自中国药品生物制品检定所 ,所有化学试剂均为分析纯。
1.2　主要仪器
KQ-250DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);FZ102粉碎机(北京医疗仪器厂);RE-
52A旋转蒸发仪(上海亚荣仪器有限责任公司);UV-2500紫外分光光度计(岛津);YHG-500BS 型远红
外快速恒温干燥箱(上海跃进医疗器械厂);FA2004电子精密天平(上海民桥);HH-S4电热恒温水浴锅
(上海金坛)。
1.3　方 法
1.3.1　提取多糖[ 4]
超声法粗提南瓜多糖:南瓜粉的制备:南瓜※去皮 、去籽※切成厚度约 3 mm的薄片※自然晒干※
粉碎※过筛(40目)※南瓜粉。南瓜多糖粗提:称取 80 g南瓜粉等分成 4份 ,置于4个 500 mL 的烧杯中 ,
各加 80%乙醇200 mL浸泡约 10 min。将各烧杯内混合物搅匀利用超声波辅助提取 30 min后抽滤 ,将滤
液合并至旋转蒸发仪的蒸馏瓶中 ,65℃水浴减压蒸馏浓缩滤液 ,回收乙醇 ,同时将南瓜残渣置于原烧杯
加200 mL 80%乙醇浸泡后超声提取 20 min ,抽滤 ,用装有头次浓缩液的蒸馏瓶收集滤液 ,再以 65℃水浴
减压蒸馏浓缩 ,即得到含南瓜多糖的粗提物。待其冷却后转移至烧杯中密封 、冷藏保存。观察可见 ,南
瓜醇提物黏稠 ,呈浅黄棕色 ,有甜香味。将醇提物分铺于两个蒸发皿中 ,厚度约 1 mm ,先于干燥箱中
60℃烘 2 h ,除去乙醇和部分水分 ,再于 65℃继续烘干水分 ,取蒸发皿内的干物质备用。
超声法粗提刺山柑多糖:刺山柑原料的制备:自然晒干的刺山柑果实※粉碎※过筛(40目)※刺山
柑粉 。刺山柑多糖粗提方法同南瓜多糖的提取。
1.3.2　标准曲线绘制
苯酚溶液的配制:苯酚(纯苯酚为针状无色结晶)水浴加热后称取 100 g ,蒸馏收集 178 ～ 182 ℃的馏
分 ,取馏出液 3 g ,加入水 50 mL得 6%的苯酚溶液 ,置棕色瓶中备用。
标准曲线绘制:取干燥至恒重的葡萄糖标准品 50 mg ,加蒸馏水溶解并定容于 500 mL容量瓶中 。精
密量取标准液 0.1 、0.2 、0.4 、0.6 、0.8和 1 mL ,分别置具塞试管中 ,加蒸馏水稀释至 2.0 mL ,摇匀 ,加 6%
苯酚溶液 1 mL ,迅速加浓硫酸 5mL ,室温放置 40 min ,以2.0 mL蒸馏水 ,1 mL 6%苯酚液 ,5 mL 浓硫酸混
合液按上述操作做空白对照 ,于 490 nm测吸光度 A 。得出数据。绘制葡萄糖标准曲线 ,建立回归方程
A=13.755 C , A为吸光度;C为浓度(mg/mL),线性相关系数 R2=0.99。
1.3.3　多糖含量测定[ 4]
取干燥至恒重的南瓜多糖干物质17.5 mg ,加蒸馏水溶解并定容于 50mL容量瓶 ,精密量取 0.1mL ,
加蒸馏水至2 mL ,再加 1 mL 6%苯酚液 ,迅速加5 mL浓硫酸 ,于室温放置40 min ,于 490 nm测其吸收度
A 为 0.162。相同方法测刺山柑多糖吸收度 A为 0.090。
1.3.4　对正常小鼠免疫器官重量的影响[ 5～ 6]
于健康鸡翅静脉处采取健康鸡血 5 mL后 ,迅速注入装有抗凝剂的锥形瓶内 。将此抗凝血混匀后于
3 000 r/min离心5 min。弃去上层清亮液体 ,下层为沉淀红细胞 。沉淀的红细胞用 0.9%生理盐水吹打
悬起后 ,再次于 3 000 r/min离心 5 min ,共重复 3次 。最后一次弃去上层清亮液体 ,留下层沉淀红细胞。
然后取沉淀的鸡红细胞 2 mL加 0.9%生理盐水 18 mL ,即为 10%鸡红细胞溶液。此液体须在末次给药
前1 d提前配制 ,于 4℃冰箱保存 ,用时稀释 1倍。
选取体重 18 ～ 22 g昆明种小鼠 30只 , ♀♂各半。随机分为空白对照(蒸馏水)组 , 南瓜多糖(50
mg/kg·d)组 , 刺山柑多糖(50 mg/kg·d)组 ,每组 10只 。分别每日灌胃给药1次 ,连续 7 d。于末次给药
后24 h ,颈椎脱臼处死 ,称体重 ,摘除胸腺及脾脏称重 ,以胸腺或脾脏重量(mg)与体重之比(g)作为胸腺
或脾脏指数。
1.3.5　对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[ 7～ 8]
选取体重18 ～ 22 g 昆明种小鼠30只 , ♀♂各半。随机分为空白对照(蒸馏水)组 ,南瓜多糖(50 mg/
·509·3期　　　　　　　包晓玮等:南瓜及刺山柑多糖对小鼠免疫功能的影响　　　　　　　　　　　
kg·d)组 ,刺山柑多糖(50 mg/kg·d)组 ,每组 10只 。分别每日灌胃给药1次 ,连续7 d。于给药后 1 h 、给 1
mL 5%鸡红细胞后 6 h处死小鼠 ,剪开腹部皮肤 ,并向腹腔注射 2 mL生理盐水冲洗腹腔 ,轻揉小鼠腹部
后 ,吸取腹腔冲洗液滴于 2片载玻片上 ,放入垫有湿纱布的托盘内置于 37℃温育 30 min ,孵毕用生理盐
水漂洗去未被吞噬的 CRBC 及其他的细胞 ,吹干 ,用丙酮∶甲醇(1∶1)溶液固定 5 min ,晾干后用瑞氏染液
染色 ,在油镜下观察计数 100个吞噬细胞 。其中计算吞噬细胞 CRBC 的巨噬细胞数和被吞噬的 CRBC
数 ,按下列公式:吞噬百分率(%)=吞噬 CRBC的吞噬细胞数/100个巨噬细胞数(包括吞噬及未吞噬的
巨噬细胞)×100%;吞噬指数=被吞噬 CRBC/100个巨噬细胞数。
2　结果与分析
2.1　葡萄糖标准曲线
于490 nm波长处测吸光度 A ,得出数据绘制葡萄糖标准曲线。建立回归方程 A=13.755 C ,ABS为
吸光度;Conc为浓度(mg/mL),线性相关系数 R2=0.99。图 1
图 1　葡萄糖标准曲线
Fig.1　Standard curve of glucose
2.2　多糖含量测定
2.2.1乙醇粗提物中南瓜多糖的含量计算
南瓜多糖供试液的吸收度 A南瓜=0.162 ,且由回归方程 A=13.755C ,供试液中多糖的浓度 C南瓜多糖
=A南瓜/13.755=0.011 777 54 mg/mL。又供试液的浓度 C供试液=0.017 5 mg/mL ,南瓜粗提物中多糖含
量M南瓜多糖(%)=100·C南瓜多糖/C供试液=67.30%。
2.2.2　乙醇粗提物中刺山柑多糖的含量计算
刺山柑多糖供试液的吸收度 A刺山柑 =0.090 ,且由回归方程 A =13.755 ,供试液中多糖的浓度
C刺山柑多糖=A刺山柑/13.755=0.006 543 1 mg/mL。供试液的浓度 C供试液=0.017 5 mg/mL ,刺山柑粗提物
中多糖含量M刺山柑多糖(%)=100·C刺山柑多糖/C供试液=37.39%。
2.3　对正常小鼠免疫器官的影响
结果表明 ,与空白对照组比较 , 南瓜多糖能明显增加小鼠胸腺指数和脾脏指数 ,具有细胞免疫增强
作用 ,刺山柑多糖能明显增加小鼠脾脏指数 ,但对小鼠胸腺指数增加不明显 。表 1
2.4　对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
结果表明 ,与空白对照组比较 ,南瓜多糖组能明显增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率和吞
噬指数 ,有非特异性细胞免疫增强作用 ,而刺山柑多糖与对照相比没有显示出相应的增强小鼠非特异性
细胞免疫的作用 。表 2
·510·　　　　　　　　　　　　　　　新疆农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　47卷
表1　南瓜及刺山柑多糖对小鼠免疫器官的影响
Table 1　The ffects of pumpkin polycose and Capparis spinosa L.inn polycose
on the immune organs of the mice(n=10)
分组　　　　　　　　　　
Group　　　　　　　　　　
胸腺指数(mg/ g)
Thymus index
脾脏指数(mg/g)
Spleen index
对照 Control 5.59 ±0.89 5.49 ±0.58
南瓜多糖 Pumpkin polycose 6.78 ±0.78＊＊ 6.17 ±0.63＊
刺山柑多糖 Capparis spinosa L.inn polycose 5.97 ±0.71＊ 5.53 ±0.67
注:＊P <0.05 , ＊＊P< 0.01 vs control
表2　南瓜及刺山柑多糖对小鼠吞噬功能的影响
Table 2　Effects of pumpkin polycose and Capparis spinosa L.inn polycose on
phagocytic function of the mice
分组　　　　
Group　　　　
吞噬百分率(%)
Phagocytic percent
吞噬指数
Phagocytic index
对照 Control 24.36±2.17 0.26±0.09
南瓜多糖 Pumpkin polycose 34.69±1.98＊ 0.54±0.13＊＊
刺山柑多糖 Capparis spinosa L.inn polycose 25.15±1.65 0.29±0.11
　　注:＊P <0.05 , ＊＊P < 0.01 vs control
3　讨论
相对于对照组蒸馏水而言 ,南瓜和刺山柑多糖都能在一定程度上增加小鼠免疫器官的重量 ,尤其是
南瓜多糖作用更为明显 , 刺山柑多糖对胸腺几乎没有增加作用 ,只是表现在对脾脏有作用 ,这可能表
明 ,刺山柑多糖在对小鼠免疫调节作用方面没有什么作用 ,此结论有待于进一步的免疫学试验来证明。
植物多糖是一种良好的免疫调节剂 ,主要通过影响内皮系统的功能来实现免疫调节[ 8] 。大量免疫试验
证明 ,多糖不仅能激活 T 、B淋巴细胞 、巨噬细胞(MФ)、自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞 ,还能活化补体 ,
促进细胞因子和抗体生成 ,对免疫系统起着多方面的调节作用[ 9] 。从实验结果看出南瓜多糖对机体的
细胞免疫和非特异性免疫均有明显的免疫增强作用。
另外 ,通常从植物中提取多糖后要经过洗涤 、除杂 、精制后才能得到成分比较单一 ,纯度较高的精多
糖 ,但是植物中很多的成分作用并不是单一的 ,许多成分相辅相成才创造了人们需要的保健价值。对给
小鼠灌胃后 ,观察药理作用的南瓜多糖及刺山柑多糖而言 ,精制的过程不但消耗试剂 ,增加实验成本 ,还
有可能会破坏植物本身的作用效果 。所以 ,选择使用多糖粗提物能更加客观地体现植物本身对实验动
物的效果 ,更好的说明植物的功效 。
4　结论
植物多糖免疫调节作用的研究无论是在药学还是药理学方面都已取得明显的进步 ,其独特的活性
和低毒效应在临床应用中具有很大的发展潜力。进一步探讨多糖的药理作用机制 ,把植物多糖作为免
疫调节剂广泛应用于临床医学上和畜牧生产中 ,将能产生很大的经济价值 ,南瓜作为一种来源丰富 ,使
用方便 ,价格低廉的原料来源具有很大的开发前景 ,研究对今后南瓜多糖的开发利用有一定的实际指导
意义 。
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