全 文 ：西北农业学报　2009 , 18(1):230-233
Acta A griculturae Boreali-occidentalis Sinica
刺山柑提取物对 DPPH自由基的清除作用＊
吴翠云1 , 2 ,周忠波1 ,3 ,邓小勤2 ,白红进1 , 3＊
(1.塔里木大学塔里木盆地生物资源保护利用兵团重点实验室 ,新疆阿拉尔　843300;
2.塔里木大学 植物科技学院,新疆阿拉尔　843300;3.塔里木大学 生命科学学院 ,新疆阿拉尔　843300)
摘　要:以石油醚 、甲醇 、乙酸乙酯和水作为提取溶剂 , 用冷浸法提取刺山柑果实中化学成分 , 采用 DPPH 自
由基清除法测定提取物的体外抗氧化活性 ,研究刺山柑果实不同溶剂提取物清除 DPPH 自由基的作用。结
果表明:不同样品对 DPPH·的清除能力依次为甲醇提取物>水提物>乙酸乙酯提取物>石油醚提取物。
vC 、BH T 、甲醇提取物和水提物清除 DPPH· 的 AE 值大小次序为 111.11>17.86>1.38>1.31。 4 种提取
物对 DPPH· 均有一定的清除效果。
关键词:刺山柑果实;DPPH 自由基;抗氧化活性
中图分类号:S663.1　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1004-1389(2009)01-0230-04
Scavenging Effect of Different Extracts from Capparis spinosa L.
Fruit on DPPH Free Radical
WU Cuiyun
1 ,2 , ZHOU Zhongbo1 , 3 , DENG Xiaoqin2 and BAI Hongjin1 , 3＊
(1.Key Laboratory of Protection & Uti lization of Biological Resou rces in T arim Basin of Xin jiang Product ion
and C onst ruction Corps , Tarim Universi ty , Alar Xinjiang 843300, China;2.C ol lege of Plant Science and Techn ology of Tarim
Universi ty , Alar Xinjiang 843300 , China;3.College of Life Science of Tarim University , Alar Xinjiang 843300 , China)
Abstract:The scavenging ef fect of dif ferent ex tracts f rom Capparisspinosa fruit on DPPH free radical
w as invest igated in this pape r.Different solv ents , including pet roleum ethe r , acetic ester , methano l
and wa ter , was used to ext ract the compounds f rom frui t by cold maceration individual ly .T he antiox-
idant activi ty of dif ferent e xt racts in vi t ro w as de termined by DPPH free radical assay .The results
show ed that antiradical eff iciency o f different ex tract w ere:methanol ex t racts >water ex t racts >ace-
tic ester ex t racts>petroleum ether ex t racts , but thei r AE valuer low er than vC and BHT .
Key words:Capparis spinosa f ruit;DPPH free radical;Antio xidative activity
　　刺山柑(Capparis spinosa L.)为山柑科山柑
属植物 ,又称野西瓜 、老鼠瓜 、瓜儿菜 、槌果藤 、菠
里克果和伯格-塔乌孜等[ 1] 。它是生长在炎热干
旱气候条件下的半灌木 ,茎多分枝 ,平铺地面或向
上斜生 ,叶圆形 、倒卵形或椭圆形 , 果期 8 月[ 2] 。
在我国主要分布于新疆 、甘肃 、西藏等省区。在国
外主要分布在地中海地区 ,生长期为 5 ～ 10月[ 3] 。
目前 ,国内外对植物提取物的抗氧化作用的
研究很多[ 4-5] ,主要因为天然抗氧化剂比人工合成
的抗氧化剂安全。我国植物资源丰富 ,原料易得 ,
从中筛选提取天然抗氧化物质具有重要意义 。
国内外关于刺山柑的研究较多 ,主要集中在
化学成分和药理研究方面[ 6-8] 。刺山柑是一种民
间药材 ,具有降血糖活性 ,抗凝血作用 ,抗菌 、抗癌
＊收稿日期:2008-06-26　　修回日期:2008-07-25
基金项目:新疆生产建设兵团科技局政策成果转化与推广项目(2006YD29);新疆维吾尔自治区高等学校科研计划资助项目
(XJEDU2005G07)。
作者简介:吴翠云(1968-),女 ,江苏人 ,副教授 ,硕士 ,从事园艺植物种质资源与遗传育种工作。 E-m ail:w cyby@163.com
＊通讯作者:白红进。 E-mai l:bhj67@163.com
作用 ,抗干细胞毒性等药理作用 ,民间主要用于治
疗风湿 、肩周炎和痛风等疾病[ 9] 。
已有对新疆野生刺山柑化学成分及药理作用
的研究报道 ,但对其果实抗氧化性的研究未见报
道。本文研究了刺山柑果实提取物的抗氧化活
性 ,为其进一步研究开发提供科学依据 。
1　材料与方法
　材料、试剂与仪器
材料　刺山柑果实于 2006年 7月采集于新
疆和硕 , 经鉴定为山柑科山柑属植物刺山柑
(Capparis sp inosal L.)。
试剂　石油醚 、乙酸乙酯 、甲醇(工业级 ,经减
压蒸馏后使用),对二苯代苦味酰肼自由基(DP-
PH)(sigma公司)、2 ,6-叔丁基对甲酚(BH T)(
天津市光复精细化工研究所)、维生素 C(上海山
浦化工有限公司)、无水乙醇(天津市化学试剂三
厂)等试剂均为国产分析纯。
仪器　T6紫外可见分光光度计(北京普析
通用有限责任公司);SK —1型快速混匀器(江苏
金坛医疗仪器厂);DHG —9101—2SA 型电热恒
温鼓风干燥箱(扬州鸿都电子有限公司);旋转蒸
发仪(上海申生科技有限公司);SHZ—D(Ⅲ)循
环水式真空泵(巩义英峪豫华仪器厂);超纯水仪
(美国 M illipo re公司)。
　方法
1.2.1　提取物的制备　精密称取一定质量的刺
山柑果粉 ,采用冷浸法 ,依次用石油醚 、乙酸乙酯 、
甲醇和水提取 ,每种溶剂浸提 3次 ,第 1次浸泡 7
d ,第 2次浸泡 5 d ,第3次浸泡 3 d ,合并相同提取
物 ,在 45℃和 60℃下减压浓缩 ,50℃真空干燥 ,分
别获得石油醚提取物 、乙酸乙酯提取物 、甲醇提取
物和水提物 ,密封 ,冷藏(0 ～ 4℃),备用 。
1.2.2　DPPH 溶液的配制　精密称取 12.0 mg
DPPH ,用无水乙醇溶解并定容于 250 mL 容量瓶
中 ,DPPH 浓度为 2×10-4 mo1/ L ,避光保存(0 ～
4℃)。
1.2.3　待测液的配制　精密称取刺山柑果实不
同提取物 0.4 g ,用 80%的乙醇溶解并定容于
100 mL 容量瓶中 ,即得到 4 mg/mL 的不同提取
物的母液 。再用移液管分别移取 2.5 、5.0 、7.5 、
10.0 、12.5 mL母液 ,用 80%的乙醇定容至50 mL
的 5个容量瓶中 ,浓度分别为 0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、
1.0 mg/mL。
1.2.4　BHT 溶液的配制　精密称取 0.1000 g
BH T ,用无水乙醇溶解并定容于 100 mL 容量瓶
中 ,即得到 1 mg/mL BH T 母液。再用移液管分
别移取 0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、2.5 mL 母液 ,用无水
乙醇定容至 25 mL 的 5个容量瓶中 ,浓度分别为
0.02 、0.04 、0.06 、0.08 、0.10 mg/mL。
1.2.5　vC 溶液的配制　精密称取 0.0100 g vC ,
用蒸馏水溶解并定容于 100 mL 容量瓶中 ,即得
到 0.1 mg/mL vC 母液。再用移液管分别移取
3.0 、3.5 、4.0 、4.5 、5.0 mL母液 ,用蒸馏水定容至
50 mL 的 5 个容量瓶中 , 浓度分别为 0.006 、
0.007 、0.008 、0.009 、0.01 mg/mL 。
1.2.6　自由基的清除率 、半抑制浓度的计算与清
除自由基能力的评价方法　将 2 mL 待测液及 2
mL DPPH 溶液置试管中 ,摇匀 ,放置 30 min ,以
溶剂为参比 ,于 517 nm 测其吸光度 A c ,每个试样
作 3个平行样 ,按下式计算清除率:
清除率(G%)=[ 1-(A i -A j)/A c] ×100%
式中 ,Ac :2 mL溶剂加 2 mL DPPH 溶液的吸
光度;Ai :加 2 mL 待测液加 2 mL DPPH 溶液的吸
光度;A j:2 mL待测液加 2 mL 溶剂的吸光度。
同时将各浓度转换成对数 ,与其相对应的清
除率转换成几率值 ,进行曲线的一次拟合 ,得出几
率值在 0.5 的浓度对数 ,最后转换成浓度即为
EC50值 。
自由基清除能力(antiradical efficiency), AE=
1/EC50 。根据 AE大小判断抗氧化剂清除自由基
能力的大小 ,AE越大清除自由基的能力越强。
2　结果与分析
　甲醇提取物对 自由基的清除效果
随着提取物加入量的增加 ,对 DPPH ·清除
率增高。在试验浓度范围内 ,加入提取物的浓度
与 DPPH ·清除率呈量效关系(表 1)。
　水提物对 自由基的清除效果
随着提取物加入量的增加 ,对 DPPH ·清除
率增高。在试验浓度范围内 ,提取物的加入量与
DPPH ·的清除率呈量效关系(表 2)。甲醇提取
物对 DPPH · 的清除效果略高于水提物 ,但二者
差异不显著。
·231·1 期 吴翠云等:刺山柑提取物对 DPPH 自由基的清除作用
表 1　甲醇提取物对 DPPH自由基的清除效果
Table 1　The ef fect of methanol extracts on scavenging
DPPH free radical
编号
No.
提取物浓度
/(mg/mL)
C oncent rat ion
of ext ract s
清除率/%
S cavenging
rate
半抑制浓度
/(mg/mL)
50% Ef fect ive
concent ration
自由基清除能力
/(mL/mg)
Anti radical
ef ficiency
1 0.2 17.31
2 0.4 29.93
3 0.6 41.37 0.723 1.38
4 0.8 52.88
5 1.0 63.21
表 2　水提物对 DPPH自由基的清除效果
Table 2　The effect of water extracts on scavenging
DPPH free radical
编号
No.
提取物浓度
/(mg/mL)
C oncent rat ion
of ext ract s
清除率/%
S cavenging
rate
半抑制浓度
/(mg/mL)
50% Ef fect ive
concent ration
自由基清除能力
/(mL/mg)
Anti radical
ef ficiency
1 0.2 8.49
2 0.4 22.67
3 0.6 35.75 0.765 1.31
4 0.8 51.33
5 1.0 65.29
　石油醚提取物和乙酸乙酯提取物对
自由基的清除效果
　　在试验浓度最大为 1.0 mg/mL 时 ,石油醚提
取物和乙酸乙酯提取物对 DPPH ·的清除率分别
为 28.01%和 31.64%,说明其清除效果较差 ,远
低于甲醇提取物和水提物(表 3和表 4)。
表 3　石油醚提取物对 DPPH自由基的清除效果
Table 3　The effect of petroleum ether extracts on
scavenging DPPH free radical
编号
No.
提取物浓度
/(mg/mL)
C oncent rat ion
of ext ract s
清除率/%
S cavenging
rate
半抑制浓度
/(mg/mL)
50% Ef fect ive
concent ration
自由基清除能力
/(mL/mg)
Anti radical
ef ficiency
1 0.2 1.23
2 0.4 8.07
3 0.6 9.13 / /
4 0.8 19.04
5 1.0 28.01
　 对 自由基的清除效果
随着 vC 加入量的增加 ,对 DPPH · 的清除
率增高。在试验浓度范围内 ,提取物的加入量与
DPPH ·的清除率呈量效关系(表 5)。由表 1 ～
表 5可知 , vC 清除 DPPH ·的效果高于4种溶剂
提取物。
　 对 自由基的清除效果
随着 BHT 浓度的增加 ,对 DPPH · 清除率
愈高 。在试验浓度范围内 ,提取物的加入量与
DPPH 的清除率呈量效关系(表 6)。
表 4　乙酸乙酯提取物对 DPPH自由基的清除效果
Table 4　The effect of acetic ester extracts on
scavenging DPPH free radical
编号
No.
提取物浓度
/(mg/mL)
C oncent rat ion
of ext ract s
清除率/ %
S cavenging
rate
半抑制浓度
/(mg/mL)
50% Ef fect ive
concent ration
自由基清除能力
/(mL/mg)
Anti radical
ef ficiency
1 0.2 1.31
2 0.4 8.37
3 0.6 11.55 / /
4 0.8 21.96
5 1.0 31.64
表 5　vC对 DPPH自由基的清除效果
Table 5　The ef fect of vC on scavenging DPPH free radical
编号
No.
vC 浓度
/(mg/mL)
C oncent rat ion
of vC
清除率/ %
S cavenging
rate
半抑制浓度
/(mg/mL)
50% Ef fect ive
concent ration
自由基清除能力
/(mL/mg)
Anti radical
ef ficiency
1 0.006 34.61
2 0.007 39.73
3 0.008 45.55 0.009 111.11
4 0.009 53.60
5 0.010 57.65
表 6　BHT对 DPPH自由基的清除效果
Table 6　The effect of BHT on scavenging DPPH free radical
编号
No.
BH T 浓度
/(mg/mL)
C oncent rat ion
of BH T
清除率/ %
S cavenging
rate
半抑制浓度
/(mg/mL)
50% Ef fect ive
concent ration
自由基清除能力
/(mL/mg)
Anti radical
ef ficiency
1 0.02 17.64
2 0.04 38.21
3 0.06 52.39 0.056 17.86
4 0.08 62.96
5 0.10 69.64
由表 1 、表 2 、表 5和表 6可知 ,根据自由基清
除能力大小 ,不同供试样品对 DPPH ·的清除能
力次序为 vC>BHT >甲醇提取物>水提物。根
据清除率来看 ,不同样品对 DPPH ·的清除效果
依次为 vC>BHT >甲醇提取物>水提物>乙酸
乙酯提取物>石油醚提取物 。浓度为0.10 mg/
mL 时 ,供试样品对 DPPH ·的清除效果依次为
vC>BHT >水提物>甲醇提取物>乙酸乙酯提
取物>石油醚提取物 。
3　讨论
在试验条件下 , 4种提取物对 DPPH ·均有
一定的清除作用 ,且随着提取物加入量的增加 ,其
清除率增高 ,可见提取物的抗氧化性与提取物的
·232· 西　北　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　18 卷
浓度呈量效关系 。
4种提取物对 DPPH · 清除能力随着提取溶
剂极性的增强呈现增强趋势 ,但低于 BHT 和 vC
,这与各提取物中含有的黄酮类 、酚类 、皂甙类 、鞣
质类 、生物碱类 、多糖类等抗氧化物质的含量及组
成有关[ 10] 。另外 ,各种微量元素 、叶绿素等物质 ,
也可能对试验的结果造成影响 。4种提取物究竟
含有哪些具有清除 DPPH 自由基能力的化学成
分 ,还有待进一步研究。
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·233·1 期 吴翠云等:刺山柑提取物对 DPPH 自由基的清除作用