全 文 ：筛选并确定最佳提取方法 , 比较不同提取溶剂(甲醇 、乙醇 、乙
醚)索氏提取 、不同提取时间(2, 4, 6, 8 h)对熊果酸含量的影响。
结果表明 , 以乙醚为溶剂提取效果最好 , 6 h已基本提取完全 ,故
采用乙醚索氏提取 6 h。
表 2　不同产地夏枯草中的熊果酸含量 %
产地 熊果酸含量
浙江景宁 0.328 4
浙江磐安 0.358 4
四川南充 0.280 3
四川峨眉 0.361 6
浙江乐清 0.331 5
重庆彭水 0.317 1
重庆南川 0.294 9
3.2　流动相的选择 曾考察了用甲醇作流动相 , 但熊果酸峰与
杂质峰不能分离 , 所以改作乙腈作流动相。曾用不同比例的乙腈
与水作流动相 , 但峰形不佳 , 可能是熊果酸有部分解离的缘故。
所以改用 0.04 mol/L磷酸氢二钠 ,用 5%磷酸调 pH值 , 用 pH值
分别为 2.6, 2.7, 2.8和 2.9等 4种缓冲盐溶液 , 在 pH2.6和 2.7
两种条件下 , 表现为基线不稳 , 噪声大 , 而 2.8与 2.9两种 pH值
条件下 ,又以 pH为 2.8时峰形较好 , 熊果酸的保留时间为 21.9
min。
《中国药典》 2005年版Ⅰ部夏枯草项下规定 , 按干燥品计算 ,
原药材含熊果酸的总量不得少于 0.12%[ 1] 。从上述测定结果可
见 , 所选不同产地的药材均符合《中国药典》标准。但是不同商
品夏枯草中有效成分含量差异显著 , 四川峨眉产的夏枯草中 , 熊
果酸含量最高 , 四川南允熊果酸含量最低。分析主要影响因素可
能是不同遗传基础和生态环境(光照 、气候 、土壤)的不同所致。
所以加强药材来源管理和对药材质量控制是很有必要的。该研
究结果为评价不同产地夏枯草质量提供了科学依据。
参考文献:
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国中医药信息杂志 , 2003, 10(8):86.
收稿日期:2008-03-18;　修订日期:2008-08-21
基金项目:石河子大学高层次人才科研启动资金专项(No.RCZX200713)
作者简介:廉宜君(1974-),女(回族),河南扶沟人 ,现任石河子大学化学
化工学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事中药及中药药理研究工作.
沙枣多糖对小鼠免疫功能影响的研究
廉宜君 ,李炳奇 ,肖芙蓉 ,吕新建
(石河子大学化学化工学院 ,新疆 石河子　832000)
摘要:目的 研究沙枣多糖(EAPS)对正常小鼠免疫功能的影响。方法 将沙枣多糖分为 3个剂量组(60, 120, 240 mg·
kg-1),连续给小鼠 ig7d,进行免疫脏器指数的检测 、碳粒廓清试验 、血清溶血素形成和绵羊红细胞诱导的迟发型超敏反
应 , 探讨沙枣多糖对正常小鼠免疫功能的影响。结果 沙枣多糖能显著提高小鼠免疫脏器指数 , 单核巨噬细胞系统的吞
噬功能 , 增强小鼠迟发型超敏反应 , 促进溶血素的生成。结论 沙枣多糖能提高机体的非特异性和特异性细胞免疫功能。
关键词:沙枣;　多糖;　免疫功能
中图分类号:R962　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)05-1126-02
　　沙枣 ElaeagnusangustifoliaL.又名香柳 、桂香柳 、银柳 、七里
香等 , 属胡秃子科落叶小乔木或灌木 , 在西北各省的干旱沙区广
为栽培。据《新疆中草药手册 》记载 , 沙枣能 “强壮 , 镇静 , 固精 ,
健胃 , 止泻 ,调经 , 利尿”。 维吾尔医多将其用于脾胃虚弱 , 消化
不良 , 肠炎腹泻等疾病的治疗 [ 1 , 2] 。目前沙枣主要是以食用为
主 , 其深加工还没有得到充分的开发利用。为了提高沙枣产品的
附加值 , 石河子大学投入大量精力对沙枣进行了研究 ,发现沙枣
中含有丰富的沙枣多糖 , 对动物具有良好的免疫保健功能。为了
开发这一药用资源 , 我们将沙枣多糖作用于小鼠 , 通过测定以观
察对小鼠免疫器官脾 、胸腺指数 、单核巨噬细胞吞噬功能 、血清半
数溶血值(HC50)、迟发型超敏反应功能的影响 , 为中药有效成分
的进一步研究提供理论基础。
1 　材料与仪器
1.1　动物 昆明种小鼠 , 8 ～ 12周龄 ,体重 18 ～ 25g, 雌雄随机 ,石
河子大学实验动物中心提供。
1.2　试剂 丙酮 ,乌鲁木齐化学试剂厂产品;石油醚 , 乌鲁木齐化
学试剂厂产品;印度墨汁 ,北京笃信精细制剂厂产品;绵羊红细胞
悬液(SRBC), 石河子大学实验动物中心提供;Alsever′s血球保存
液 , 按常规配制;都氏试剂(NaHCO
3
1.0 g, KCN0.05 g), 高铁氰
化钾 0.2 g,加水至 1 000 ml, 4℃保存;补体(豚鼠血清)。
1.3　仪器 KQ-250型超声波提取仪 , 昆山市超声仪器有限公司
产品;SENCOR502B旋转蒸发器 , 上海申生科技有限公司产品;
SartoriusBS210S电子天平 ,北京塞多利斯天平有限公司产品;SHZ
-C型循环水式多用真空泵 , 巩义市英欲予华仪器厂产品;722
型光栅分光光度计 ,上海精密科学仪器厂产品;镀铬游标卡尺 , 湖
北省教学仪器厂 ,精密度 0.02 mm。
2　方法
2.1　沙枣多糖的提取 称取沙枣粉末 200.0 g, 加少量水浸泡 24
h湿润。加入石油醚(沸程 30 ～ 60℃)2.0 L, 在超声循环提取仪
中提取 30min,过滤。在滤渣中加入 95%的乙醇 2.0 L, 超声提
取 30min,过滤。在所得滤渣中加入蒸馏水 2.0 L, 超声提取 30
min,重复用水提取 3次。 提取完毕后过滤 、合并滤液 ,在旋转薄
膜蒸发仪上减压浓缩至 200 ml。加入 95%的乙醇使溶液中乙醇
含量达到 80%,低温静置过夜 , 抽滤 , 滤渣分别用乙醚 、丙酮 、无
水乙醇洗涤数次 ,得灰白色粉末样物质 , 放入烘箱中于 60℃干燥
备用。由苯酚 -硫酸法测得提取物中沙枣多糖含量为 50.28%。
2.2　检测项目及方法
2.2.1　实验动物分组及给药方式 本实验设计了高 、中 、低 3个
剂量组(每组 10只), 即小鼠每日每只经口给予(加入饮水法)沙
枣多糖 60mg· kg-1体重(低剂量), 120mg· kg-1体重(中剂量)
和 240 mg· kg-1体重(高剂量), 分别相当于人体推荐用量的 5,
10, 20倍。对照组给予正常饲料和饮水。
连续给予受试物 7d后活杀小鼠并测定各项免疫指标。
2.2.2　小鼠免疫器官重量的测定 [ 3] 称小鼠体重 , 颈椎脱臼处死
小鼠 , 脾脏 、胸腺称其湿重 ,计算脾指数和胸腺指数。
脾指数 =脾重量(mg)/体重(g)
胸腺指数 =胸腺重量(mg)/体重(g)
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5
2.2.3　单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的测定 [ 4] 末次
给药后 1 h, 称体重 ,各鼠均按 0.1 ml/10 g剂量由尾静脉注入印
度墨汁(以生理盐水按 1:5稀释),注射后分别在 1 min(t1)、5min(t2)从小鼠眼眶静脉丛取血 20μl,溶于 2.0 ml0.1% Na2CO3溶
液中摇匀 , 放置 20 min后于 680 nm处测其吸光度值(A), 以
0.1% Na2CO3溶液做空白对照 , 将小鼠处死后取肝脏和脾脏 ,用
滤纸吸干血迹后称重 , 根据公式计算廓清指数 K值和校正廓清
指数 α值。计算公式:K=(logA1 -logA2)/(t2 -t1);α=K1/3 ×体
重 /(肝重 +脾重)
2.2.4　小鼠血清溶血素的检测 [ 5] 给药第 3天 , 每鼠腹腔注射
2%SRBC0.2 ml致敏 , 并继续给药。致敏后第 4于末次给药后
90 min取小鼠眼球血 ,静置 1 h, 2 000 r/min离心 10 min, 取上层
血清 20μl,用 NS稀释 500倍 ,取此血清样 1 ml作为补体 , 37℃温
浴 1 h, 反应结束 , 将反应管立即移入冰浴中 , 以终止反应 , 以
2 000 r/min离心 10 min, 取 1 ml上清液盛于由 3 ml都氏试剂的
试管摇匀 , 放置 10 min后于 540 nm测其吸光度值(A)。 计算小
鼠的半数溶血值(HC
50
)。
样品 HC
50
=(样品的吸光度值 /SRBC半数溶血时的吸光度
值)×稀释倍数
2.2.5　迟发型超敏反应(DTH)检测 按文献方法 [ 6]给药第 3天
, 每鼠腹腔注射 2%SRBC0.2 ml致敏 , 并继续给药。 致敏后第 4
日取 20%SRBC50 μl悬液注射在小鼠右侧足垫皮下 , 左侧注射
50 μl生理盐水 , 24 h后用游标卡尺(精密度 0.02 mm)测定小鼠
左右足垫厚度之差为肿胀程度。同一部位测量 3次 ,取平均值。
3　结果
3.1　对小鼠免疫器官的影响 结果(见表 1)显示 EAPS各剂量
组均能增加小鼠胸腺和脾脏的重量。与对照组胸腺指数比较 ,
EAPS在 120mg· kg-1和 240 mg· kg-1剂量组有显著性差异(P
<0.05);而 60 mg· kg-1剂量组无显著性差异(P>0.05);与对
照组脾脏指数比较 , EAPS在 120 mg· kg-1剂量组 , 呈极显著性
差异(P<0.01);60mg· kg-1和 240 mg· kg-1剂量组 , 均有显著
性差异(P<0.05)。
表 1　沙枣多糖对小鼠免疫器官的影响( x±s)mg· kg-1
组别 剂量 脾脏指数 胸腺指数
60 6.68±1.17＊ 3.95±1.18
EAPS 120 8.06±0.60＊＊ 4.74±0.82＊
240 6.90±0.93＊ 4.61±0.93＊
对照 - 5.42±0.52 3.89±0.83
　　与对照组比较 , ＊ P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
3.2　对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的影响 由
表 2数据可知 , EAPS各剂量组均能明显提高廓清指数和吞噬指
数。与对照组比较 , EAPS的 120, 240 mg· kg-1剂量组廓清指数
均达到极显著水平(P<0.01), EAPS的 60mg· kg-1剂量组的廓
清指数也达到了显著水平(P<0.05)。 EAPS各剂量组对小鼠单
核巨噬细胞的吞噬功能的增强作用 ,以 120 mg· kg-1剂量组最为
显著。
表 2　沙枣多糖对小鼠碳粒廓清的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· kg-1 廓清指数 K 吞噬指数 α
60 0.025 5±0.004 7＊ 5.029±0.457
EAPS 120 0.037 0±0.003 8＊＊ 5.643±0.227＊＊
240 0.030 2±0.006 8＊＊ 5.322±0.205＊
对照 - 0.023 1±0.006 2 4.971±0.553
　　与对照组比较 , ＊ P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
3.3　对小鼠血清溶血素及迟发型超敏反应(DTH)的影响 由
表 3可知 , EAPS在 240 mg· kg-1剂量组的半数溶血值与对照组
差异极显著(P<0.01), 120 mg· kg-1剂量组与对照组的差异显
著(P<0.05), 60mg· kg-1剂量组的半数溶血值只是略有升高 ,
差异不显著(P>0.05)。 60mg· kg-1剂量组足跖肿胀度差值明
显高于对照组(P<0.01), 60 mg· kg-1剂量组和 240 mg· kg-1
剂量组足跖肿胀度差值与对照组相比差异显著(P<0.05)。
表 3　沙枣多糖对小鼠血清溶血素
及迟发型超敏反应(DTH)的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· kg-1 HC50 足跖肿胀度差 l/mm
60 114.6±42.3 0.827±0.067＊
EAPS 120 129.7±46.7＊ 0.965±0.081＊＊
240 166.2±27.8＊＊ 0.847±0.089＊
对照 - 110.6±23.0 0.778±0.112
　　与对照组比较 , ＊ P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
4　讨论
多糖类化合物是生物体的重要结构成分 ,主要影响机体的网
状内上皮系统和蛋白质的合成及抗体的生成 , 含有激活淋巴细
胞 、巨噬细胞和自然杀伤细胞等免疫细胞 , 具有促进细胞因子的
生成 , 改善机体的免疫功能的作用 [ 7 , 8] 。本实验采用连续经口给
药的方式进行免疫相关指标的测定 ,结果发现当多糖给药剂量为
120 mg/kg时受试物能明显升高小鼠的胸腺指数和脾脏指数 , 这
将对提高机体的免疫功能有一定的影响 ,因为胸腺是 T细胞分化
成熟的场所 , 也是机体细胞受抗原刺激后发生免疫应答的部
位 [ 9] 。
溶血素作为抗绵羊红细胞抗体 , 经绵羊红细胞(SRBC)诱导
由小鼠体内的 B淋巴细胞产生 , 溶血素生成的增加 , 反应了 RP
对免疫反应较后期阶段抗体分泌细胞形成具有增强作用。 SRBC
作为半抗原接触皮肤与皮肤蛋白结合成为完全抗原 ,使 T淋巴细
胞致敏 ,因此迟发型超敏反应是由特异性致敏效应 T细胞介导的
细胞免疫反应 ,是检测细胞免疫功能的常用方法之一。实验数据
说明沙枣多糖可以显著增强小鼠抗体分泌细胞产生抗体的能力 ,
从而增强小鼠的体液免疫 ,并可明显增强由 T细胞介导的迟发型
超敏反应。
单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的
标志之一。当细菌 、异物等抗原性物质进入机体后 ,可迅速被单
核巨噬系统吞噬和清除 , 其消除的速率(碳廓清指数)反映了吞
噬功能 。实验结果 ,沙枣多糖能显著增加小鼠的廓清指数和吞噬
指数 , 其免疫调节机理值得深入探讨。
实验显示 , 灌服沙枣多糖能显著提高小鼠单核巨噬细胞系统
的吞噬功能 ,增强小鼠迟发型超敏反应 , 促进溶血素的生成 ,以增
强机体的特异性和非特异性免疫功能。沙枣多糖对小鼠的免疫
功能有明显的调节作用。
参考文献:
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